岩白菜素对大鼠心肌细胞的缺氧/复氧损伤保护作用的机制研究

目的 探究岩白菜素(Ber)减轻大鼠心肌细胞(H9C2)缺氧/复氧损伤(SI/R)的分子机制。方法 建立H9C2缺氧/复氧损伤模型,通过免疫印迹法检测关键分子的表达,通过末端标记法染色和乳酸脱氢酶释放量检测细胞损伤,通过二氯荧光素染色及丙二醛(MDA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,通过分别给予EX-527和SR-18292抑制沉默交配型信息调控2同源物1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物受体共激活因子-1α(PGC-1α)。实验按干预方法不同分组,分别为Bey干预组(SI/R+Ber)、Bey+SIRT1抑制剂组(SI/R+Ber+EX-527)、对照组(SI/R+PBS)。SI/R+Ber组加入含有100μM的Ber培养基进行干预,SI/R+Ber+EX-527组加入含有100μM的Ber和50 nM EX-527的培养基进行干预。SI/R+PBS组为磷酸缓冲液(PBS)干预作为对照组。结果 与SI/R+PBS组相比,SI/R+Ber组Bcl-2的表达水平升高(P <0.001),Bax的表达水平显著降低(P <0.001),PGC-1α的表达水平明显升高(P <0.001);与SI/R+Ber组相比,SI/R+Ber+Ex-527组Bcl-2的表达水平降低(P <0.001),Bax的表达水平显著升高(P <0.001),PGC-1α的表达水平明显降低(P <0.001)。给予PGC-1α的抑制剂SR-18292后,与SI/R+Ber组相比,细胞活力显著降低(P <0.01);乳酸脱氢酶释放显著升高(P <0.001);MDA生成显著升高(P <0.01),大鼠心肌细胞的凋亡指数明显升高(P <0.01),ROS的产生明显升高(P <0.01),Bcl-2表达水平显著降低(P <0.001),Bax表达水平升高(P <0.01),SIRT1表达水平无明显变化(P> 0.05)。结论 Ber通过激活SIRT1/PGC-1α通路来减少ROS的产生,进而抑制SR/I损伤中的大鼠心肌细胞凋亡。

岩白菜素通过调控NF-κB/NLRP3通路和代谢对特发性肺间质纤维化小鼠的影响

目的探讨岩白菜素对特发性肺间质纤维化(IPF)小鼠的影响。方法采用博来霉素气管内滴注建立IPF小鼠模型,灌胃给予岩白菜素干预28 d,记录小鼠体质量变化和肺指数,HE染色观察肺组织病理变化,Masson染色观察肺组织胶原纤维变化,免疫荧光法观察肺组织α-SMA、NLRP3表达,RT-qPCR法检测肺组织p65、NLRP3、GSDMD、ASC mRNA表达,Western blot法检测肺组织p65、IκBα、NLRP3蛋白表达。结果与模型组比较,岩白菜素组小鼠肺组织中α-SMA表达,p65、NLRP3、GSDMD、ASC mRNA表达,p65、NLRP3蛋白表达均降低(P<0.01),IκBα蛋白表达升高(P<0.01)。结论岩白菜素可以通过抑制NF-κB/NLRP3信号通路和调节代谢发挥治疗小鼠IPF的作用。

岩白菜素的乙酰化修饰

目的研究岩白菜素乙酰化产物的合成.方法在吡啶介质中以乙酸酐对岩白菜素进行乙酰化.结果得到3个未见文献报道的部分乙酰化岩白菜素并阐明其结构.结论在吡啶中用乙酸酐乙酰化,可得到岩白菜素的部分乙酰化产物.

岩白菜素纳米结构脂质载体制备及其体内药动学研究

目的制备岩白菜素纳米结构脂质载体,并考察其体内药动学。方法熔融法制备纳米结构脂质载体。以固态脂质种类、液态脂质种类、固液脂质比、脂药比、泊洛沙姆188浓度为影响因素,包封率、载药量、粒径为评价指标,单因素试验优化处方,考察体外释药,测定稳定性,进行晶型分析。18只大鼠随机分为3组,分别灌胃给予岩白菜素、物理混合物、岩白菜素纳米结构脂质载体的0.5%CMC-Na混悬液(60 mg/kg),于0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12 h采血,HPLC法测定岩白菜素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最优处方为固态脂质山嵛酸甘油酯,液态脂质油酸,固液脂质比4∶1,脂药比10∶1,泊洛沙姆188浓度2.0%,平均包封率为(84.16±1.57)%,载药量为(7.73±0.27)%,粒径为(215.53±18.04)nm,Zeta电位为-(37.56±2.03)mV。纳米结构脂质载体在模拟胃液中240 min内累积释放度小于50%,在模拟肠液中36 h内为71.04%,并且在后者中12 h内稳定性良好。岩白菜素以无定形状态存在于纳米结构脂质载体中。与原料药、物理混合物比较,纳米结构脂质载体t_(max)、t_(1/2)延长(P<0.01),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),相对生物利用度与原料药相比增加至6.08倍。结论纳米结构脂质载体可改善岩白菜素稳定性、口服生物利用度。

岩白菜素对脂多糖诱导小胶质细胞炎症反应的抑制作用及其分子机制

目的探讨岩白菜素对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎症反应模型的影响以及其机制是否与调控小胶质细胞M1/M2表型极化相关。方法BV2小胶质细胞分为对照组、LPS组、LPS+低剂量岩白菜素组、LPS+高剂量岩白菜素组,LPS+低剂量岩白菜素组、LPS+高剂量岩白菜素组分别加入10μmol/L、100μmol/L的岩白菜素预处理2 h后与LPS组一起加入LPS刺激诱导炎症反应模型,对照组正常培养不做任何处理。各组置于倒置显微镜下观察细胞形态变化,Western blotting法检测细胞M1型小胶质细胞分泌型标志物一氧化氮诱导合酶(iNOS)、M2型小胶质细胞分泌型标志物精氨酸1(Arg-1)蛋白表达。结果对照组细胞呈梭形,胞体小,有较少的分支形成;LPS组细胞胞体变大,细胞分支增多,呈阿米巴样;LPS+低剂量岩白菜素组、LPS+高剂量岩白菜素组细胞形态均较LPS组有改善,胞体变圆,分支减少。细胞iNOS蛋白表达对照组、LPS+高剂量岩白菜素组、LPS+低剂量岩白菜素组>LPS组;细胞Arg-1蛋白表达LPS组>iNOS蛋白表达对照组、LPS+高剂量岩白菜素组、LPS+低剂量岩白菜素组(P均<0.05)。结论岩白菜素可抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应,该作用可能通过促进小胶质细胞向M2表型极化实现。

HPLC测定四方藤中3种岩白菜素类化合物的含量

建立了使用高效液相色谱测定四方藤中岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素、11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素含量的方法。色谱柱为SinoChrom ODS-BP C18（5μm,4.6mm×200mm）,流动相为乙腈和0.1%的甲酸水溶液,流速为0.8mL/min,检测波长为275nm。结果表明岩白菜素、11-O-没食子酰岩白菜素和11-O-对羟基苯甲酰岩白菜素都在0.066 7~0.343 7μg内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为96.11%（RSD=1.92%）,97.02%（RSD=0.9%）,94.43%（RSD=1.77%）。本方法操作简便,精密度高,重现性好,可作为四方藤中这3种岩白菜素类化合物含量的检测方法。

岩白菜素通过下调PI3K-AKT-mTOR通路抑制恶性胶质瘤的恶性生物学行为

目的探究岩白菜素对恶性胶质瘤细胞的抑制作用及可能机制。方法常规培养U251和U87细胞,以一定浓度梯度(0、0.5、1、2、4、8μM)的岩白菜素与U251和U87细胞共孵育,MTT法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测集落形成能力,Transwell小室迁移和侵袭实验检测纵向迁移能力,划痕愈合实验检测横向迁移能力,Hoechst细胞凋亡检测试剂盒检测凋亡,免疫印迹检测PI3K-AKT-mTOR通路的变化,MTT检测与PI3K抑制剂共孵育后岩白菜素对U251细胞抑制作用的变化。同时利用MTT评估岩白菜素对正常人脑胶质HEB细胞的细胞毒性。结果与一定浓度梯度的岩白菜素共孵育后,MTT法检测发现U251和U87细胞的增殖能力以时间依赖性和浓度依赖性下降,平板克隆形成实验检测发现U251和U87细胞的集落形成能力浓度依赖性下降,Transwell小室迁移和侵袭实验检测发现U251细胞的纵向迁移和侵袭能力浓度依赖性下降,划痕愈合实验发现U251细胞的横向迁移能力浓度依赖性下降,Hoechst细胞凋亡检测试剂盒检测发现与一定浓度的岩白菜素共孵育后凋亡细胞增多,免疫印迹检测发现,总PI3K、总AKT及总mTOR没有改变,但是磷酸化的PI3K、磷酸化的AKT及磷酸化的mTOR呈浓度依赖性下降,PI3K抑制剂并不能增强岩白菜素对U251细胞的抑制作用。岩白菜素对HEB无明显细胞毒性。结论岩白菜素可以特异性抑制恶性胶质瘤细胞的恶性生物学行为,作用机制与减少PI3K-AKT-mTOR通路的磷酸化有关。

RP-HPLC法测定复方岩白菜素片中岩白菜素的含量

建立了复方岩白菜素片中岩白菜素含量测定的反相高效液相色谱法.采用色谱柱Diamon-sil C18（5μm,4.6 mm×250 mm）,柱温为30℃;流动相为V（乙腈）∶V（水）=15∶ 85;流速为1.0 mL·min-1;检测波长272 nm.研究结果表明：岩白菜素在28.32～ 226.56 μg/ml的范围内呈良好的线性关系,样品平均回收率为100.86％,RSD=0.89％.该方法操作简便,快速,具有良好的稳定性和重复性,适用于复方岩白菜素片中岩白菜素含量测定。

复方岩白菜素片中两种主要成分的含量测定

目的:用高效液相色谱法测定复方岩白菜素片含量。方法:以甲醇-水（30:70）为流动相,在264nm波长处检测。结果:复方岩白菜素片中马来酸氯苯那敏的平均回收率为98.50％,RSD=0.66％;岩白菜素的平均回收率为99.70％,RSD=1.02％.结论:高效液相色谱法简便快速,适用于复方岩白菜素片的含量测定。

HPLC测定复方岩白菜素片中岩白菜素和马来酸氯苯那敏的含量

采用HPLC测定复方岩白菜素片中岩白菜素和马来酸氯苯那敏的含量.岩白菜素在6～84 μg/ml范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9997),回收率为99.4%,RSD为0.3%(n=6);马来酸氯苯那敏在5～70 μg/ml范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9997),回收率为99.5%,RSD为0.6%(n=6).

大鼠血浆中岩白菜素含量分析方法的建立及其体内药动学

目的建立血浆中岩白菜素的HPLC的测定方法,研究岩白菜素及岩白菜素磷脂复合物在大鼠体内的药动学行为。方法采用Odyssil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-乙腈-质量分数为0.2%的磷酸水溶液（体积比为4∶16∶80）,流速为0.8 mL·min^-1,检测波长为220 nm。应用液-液萃取法处理血浆,测定两只大鼠分别口服岩白菜及其磷脂复合物后不同时刻血浆中岩白菜素的质量浓度。结果岩白菜素质量浓度在0.01-5 mg·L^-1内线性关系良好,定量下限为0.01 mg·L^-1;提取回收率均在78.6%-90%之间;日内、日间精密度均小于13.7%。结论该方法准确度高、灵敏度强、专属性好,可作为测定大鼠血浆岩白菜素质量浓度的方法,为探讨岩白菜素的药动学行为提供方法依据。

紫金牛属药用植物中岩白菜素的高效液相色谱法测定及资源利用

紫金牛属药用植物中岩白菜素的高效液相色谱法测定及资源利用张艺，赖先荣，孟宪丽（成都中医药大学６１００７５）邬家林，闵伯清（四川省医药学校６１４２０１）紫金牛属多种植物有药用历史［１］，其中紫金牛、朱砂根等使用较为广泛，曾为中国药典、部颁及地方药材标准...

岩白菜和岩陀中岩白菜素含量比较

目的:探讨岩白菜和岩陀中岩白菜素含量,以供开发参考。方法:采用高效液相色谱法测定。结果:岩白菜根茎的岩白菜素含量(5.14%～7.46%)明显高于叶片的岩白菜素含量(0.19%～0.27%);人工栽培岩白菜根茎的岩白菜素含量(5.14%～5.20%)比野生的含量(7.25%～7.46%)略低;不同居群岩陀中岩白菜含量差异不大(4.29%～4.63%),但稍低于岩白菜的含量。结论:供试的各居群岩白菜和岩陀的根茎均是提取岩白菜素的最佳原料;岩白菜采用人工栽培是可行的。

中药岩白菜素的反相高效液相色谱分析

采用反相高效液相色谱法(RP HPLC),以甲醇∶水=45∶55(V/V)为流动相,紫外275nm波长检测,用外标法测定了虎耳科植物提取产物中岩白菜素的含量。该方法简便、快捷、准确,结果重现性好。日内和日间精密度(RSD)在0.79%～4.22%之间,回收率为98.1%～103.1%。

炮制对虎耳草中岩白菜素及其止咳抗炎作用的影响

目的探讨不同炮制方法对虎耳草中岩白菜素的量及镇咳、抗炎作用的影响。方法用HPLC法测定虎耳草生品、盐制品、醋制品、蜜制品、姜制品、酒制品中岩白菜素的量;采用浓氨水引咳法、二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀法比较生品及各炮制品的镇咳、抗炎作用。结果虎耳草中岩白菜素的量高低顺序为醋制>蜜制>盐制>生品>酒制>姜制。虎耳草延长小鼠的咳嗽潜伏期作用强弱为盐制组>生品组>蜜制组>醋制组>姜制组>酒制组。虎耳草减少小鼠的咳嗽次数作用强弱为醋制组>姜制组>蜜制组>盐制组>酒制组>生品组。虎耳草对二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀模型的抗炎作用强弱为姜制组>盐制组>醋制组>生品组>蜜制组。结论不同炮制方法对虎耳草中岩白菜素含有量及镇咳、抗炎作用有显著影响,虎耳草止咳宜用醋制品。

朱砂根愈伤组织诱导及其岩白菜素含量的测定

取朱砂根(ArdisiacrenataSims.)幼苗不同部位作外植体,研究不同激素组合对愈伤组织诱导的影响,利用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)检测愈伤组织中岩白菜素含量。实验结果表明朱砂根幼苗的不同部位(胚根、下胚轴、茎及叶)均能诱导出愈伤组织,最高诱导率都在45%以上,以MS基本培养基添加2,4-D0.5mgL-1和KT0.01mgL-1时愈伤组织的诱导和生长最好。这些愈伤组织均有合成岩白菜素的能力,其中以胚根诱导的愈伤组织中岩白菜素含量最高,为干重的0.076%,相当于原植物根中含量的1/9。高效液相色谱定量测定法精密度高,专一性好,能准确检测朱砂根愈伤组织中岩白菜素的含量。

云南不同地区岩白菜中岩白菜素含量的比较

应用高效液相色谱法(HPLC)测定了采自云南8个地区的18个岩白菜居群的岩白菜素含量,结果表明:(1)同一居群的不同器官间岩白菜素含量差异悬殊,根状茎是提取岩白菜素的理想器官;(2)不同居群的根状茎中的岩白菜素含量存在极显著差异(P<0.01),介于9.77%-3.15%之间,丽江玉龙水库居群的根状茎是开发利用岩白菜中岩白菜素的最优种源;(3)不同居群的叶片中的岩白菜素含量也存在极显著的差异(P<0.01),在1.61%～0.55%之间。