HaCaT细胞中FUT4表达与其启动子区甲基化的相关性分析

岩藻糖基转移酶Ⅳ(FucosyltransferaseⅣ,FUT4)在正常细胞中表达量很低,但其低表达的调控机制以及是否受其启动子甲基化调控并不十分清楚。文章采用Western blot、免疫荧光和Real-time PCR的方法检测正常人永生化表皮细胞系HaCaT细胞FUT4的表达,观察DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-d C处理对FUT4表达的影响。应用甲基化特异性PCR方法分析HaCaT细胞中FUT4启动子甲基化状态。结果表明,HaCaT细胞中FUT4的表达水平明显低于人表皮鳞癌细胞A431和SCC12。5μmol/L的5-aza-d C处理72 h的HaCaT细胞,其FUT4m RNA水平明显升高,并且与未经5-aza-d C处理的对照组相比,U引物扩增检测到的产物量增加,M引物扩增检测到的产物量明显减少。这些结果表明,HaCaT细胞中FUT4的低表达可能与其启动子区Cp G岛甲基化有关。

FUT4过表达促进胚胎细胞与子宫内膜细胞的黏附

胚胎与子宫内膜上皮细胞之间的黏附是胚胎成功植入的关键.岩藻糖基转移酶Ⅳ(FUT4)对胚胎细胞与子宫内膜细胞黏附的影响未见报道.本研究以人子宫内膜细胞(HEC-1A)和胚胎细胞(JAR)为体外着床模型,观察上调HEC-1A细胞中FUT4表达对JAR细胞与HEC-1A细胞黏附的影响.RT-PCR和免疫细胞化学检测结果显示,FUT4过表达增加HEC-1A细胞中FUT4基因及蛋白的表达;免疫细胞化学及Western印迹结果表明,上调HEC-1A细胞中FUT4增加细胞表面LeY的合成;细胞黏附实验结果显示,与未转染组相比较,FUT4过表达增加了JAR细胞与HEC-1A细胞的黏附率.本研究证明,FUT4过表达可以增加细胞表面LeY寡糖抗原的合成,从而促进胚胎细胞与子宫内膜细胞的黏附.

米非司酮通过调节岩藻糖基转移酶IV的表达抑制胚胎体外黏附

目的:探讨米非司酮对人胚胎细胞JAR与人子宫内膜细胞RL95-2之间黏附的影响及其调控的分子机制。方法:采用黏附实验分别观察RU486以及岩藻糖基转移酶IV(FUT4)对JAR细胞与RL95-2细胞之间黏附的影响。采用RT-PCR以及Western blotting检测米非司酮对RL95-2细胞以及流产妇女子宫内膜中FUT4表达的调控。结果:①米非司酮抑制JAR细胞与RL95-2单层细胞之间的黏附;②米非司酮抑制RL95-2细胞以及流产妇女子宫内膜中FUT4基因和蛋白的表达;③FUT4质粒转染RL95-2细胞后,调节JAR细胞与RL95-2单层细胞之间的黏附。结论:米非司酮通过调节FUT4的表达抑制胚胎体外黏附。

黄芩、白术通过调节岩藻糖基转移酶Ⅳ、Ⅶ的表达促进胚胎体外黏附

目的:探讨黄芩、白术对胚胎体外黏附的影响及其调控的糖分子机制。方法:培养人子宫内膜细胞(RL95-2)和人绒毛膜细胞(JAR),并经米非司酮诱导后建立着床障碍模型。通过黏附实验观察不同浓度黄芩、白术水煎液对胚胎黏附率的影响,采用RT-PCR、Western blotting检测着床相关寡糖合成关键酶的表达变化。结果:黄芩、白术50 mg/L治疗组胚胎黏附率较模型组显著升高(P<0.05),着床相关的岩藻糖基转移酶Ⅳ、Ⅶ(FUT4、FUT7)的m RNA及蛋白表达显著增加(P<0.001)。结论:中药黄芩、白术可通过上调FUT4、FUT7的表达促进胚胎体外黏附。