细菌Flavobacteriaceae sp. CZ1127产海参岩藻聚糖硫酸酯酶的发酵条件优化

以从海洋中分离筛选得到的细菌Flavobacteriaceae sp.CZ1127为研究对象,通过单因素实验和正交试验对其产海参岩藻聚糖硫酸酯酶的培养基成分进行优化,提高其产酶量。得出其最佳培养基组成为(w/v):海参岩藻聚糖硫酸酯0.25%、酵母粉0.15%、MgSO4.7H2O 0.05%、CaCl2 0.02%、KCl 0.01%、Na2HPO4 0.22%、NaH2PO4 0.06%、NaCl 2.5%;确定了该菌株的最佳培养条件为:500 mL的三角瓶装液150 mL、温度为25℃、转速150 r/min、发酵时间为48 h。优化后,海参岩藻聚糖硫酸酯酶活力为22.88 U/mL,比优化前提高了3.01倍。

岩藻聚糖硫酸酯酶提取方法比较研究及响应面优化

为了研究海洋细菌Flavobacteriaceae sp.CZ1127产胞内岩藻聚糖硫酸酯酶的高效提取方法,本研究比较了超声破碎、化学试剂法、溶菌酶法、渗透压作用、反复冻融等几种方法对Flavobacteriaceae sp.CZ1127胞内岩藻聚糖硫酸酯酶的提取效果,确定超声破碎法为最优方法。进一步通过单因素实验及响应面实验考察了超声破碎各因素对提取效果的影响,建立了预测超声破碎法提取岩藻聚糖硫酸酯酶酶活的数学模型,并对各因素条件进行了优化。最终确立的超声破碎提取最佳条件为:破碎功率600 W,菌悬液浓度20 mg/m L,破碎总时长9 min,单次破碎时长为6 s,间歇时长4 s。利用优化方法可从单位质量(g)菌体中获得岩藻聚糖硫酸酯酶酶活(1640.47±84.81)m U/g,提取效果较优化前提高了56.80%。

岩藻聚糖硫酸酯酶及其降解产物的研究进展

岩藻聚糖硫酸酯酶多用于制备低分子质量岩藻寡糖,主要为α-L-岩藻糖苷酶、岩藻多糖酶和硫酸酯酶。它主要来源于软体动物及海洋微生物中,其中大部分属于黄杆菌科。该文从岩藻聚糖硫酸酯酶的分类、来源、酶的基因鉴定、酶活力的影响因素、酶解产物的结构及生物活性等方面进行了综述,以期为岩藻聚糖硫酸酯酶的应用与岩藻寡糖的生产提供理论参考。

基于pHBH法的岩藻聚糖硫酸酯酶酶活测定方法

采用对羟基苯甲酰肼(pHBH)对岩藻糖进行显色,建立测定岩藻糖还原端含量的pHBH法。该方法操作简便,灵敏度高,检测限为0.26μg/mL,定量限0.85μg/mL。在此基础上,以Flavobacteriaceae sp.CZ1127产生的岩藻聚糖硫酸酯酶为试验材料,对岩藻聚糖硫酸酯酶活测定方法中的几个关键影响因素进行研究,建立一套快速、可靠的岩藻聚糖硫酸酯酶酶活测定方法。采用该方法,酶活检测限达到0.048 mU。

产岩藻聚糖硫酸酯酶微生物的筛选及产酶条件优化

利用岩藻聚糖硫酸酯酶对岩藻聚糖硫酸酯进行降解,是获得低分子质量岩藻聚糖硫酸酯的最佳途径,这对岩藻聚糖硫酸酯的结构研究和活性低聚糖的开发具有重要意义。本文通过次甲基蓝法从麦岛海域海水中筛选出1株岩藻聚糖硫酸酯酶的高产菌株MD3,经高效排阻色谱验证其具有降解岩藻聚糖硫酸酯的能力。优化的发酵产酶条件:发酵温度25℃,发酵初始pH8.0,250mL三角瓶装液50mL,摇床转速200r/min,发酵时间72h。优化后MD3产酶能力由2.1U/mL提高到4.0U/mL,为岩藻聚糖硫酸酯酶的生产及活性低聚糖的开发奠定基础。