岩豆凝集素寡糖链的纯化及组成研究

糖蛋白分子上的寡糖链是细胞间和分子间相互识别的基础。寡糖链的结构研究首先是寡糖链的分离纯化及糖基组成分析。寡糖链的组成分析多用气相色谱或高效液相色谱。本文报道用气相色谱法对纯化的岩豆凝集素(Milletia dielsiana Harms.Lectin,简称MDL)寡糖链糖基组成的研究结果。

岩豆凝集素分子修饰与圆二色性的关系研究

天然态岩豆凝集素（ＭＤＬ）远紫外圆二色性（ＣＤ）谱显示２１６ｎｍ处单一负峰，是一种高β－折叠构象凝集素；近紫外ＣＤ谱呈现２８２ｎｍ处负峰和２６０～２７５ｎｍ及２９５ｎｍ处的负肩，经Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺（ＮＥＭＩ）和对氯汞苯甲酸（ＰＣＭＢ）修饰ＭＤＬ的巯基，其近紫外ＣＤ谱未发生变化，远紫外ＣＤ谱仅发生细微变化，ＭＤＬ凝集活性保持不变；ＰＣＭＢ过量时，ＣＤ谱呈现典型的无规卷曲谱形，ＭＤＬ完全丧失凝集活性，去除ＰＣＭＢ后，活性又全部恢复．二硫苏糖醇（ＤＤＴ）修饰ＭＤＬ的二硫键并用碘乙酸（ＩＣＨ２ＣＯＯＨ）保护巯基，ＭＤＬ远紫外ＣＤ谱２１６ｎｍ处的负峰红移至２２５ｎｍ，且显著减小；同时，近紫外ＣＤ谱２８２ｎｍ处负峰几乎消失，两负肩分别保持完整，分子中α－螺旋降低，无规卷曲增加较多，ＭＤＬ凝集活性未发生变化．用Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）修饰ＭＤＬ分子中的色氨酸，导致２１６ｎｍ负峰蓝移至２０８ｎｍ且变小，分子中无规卷曲和α－螺旋增加，β折叠减少，近紫外ＣＤ谱２９５ｎｍ负肩消失，２８２ｎｍ负峰红移至２８７ｎｍ，ＭＤＬ凝集活性完全丧失．

岩豆凝集素的圆二色性与生物学活性关系的研究

岩豆凝集素（ＭＤＬ）的远紫外圆二色性谱（ＣＤ谱）显示２１６－２１７ｎｍ处的单一负峰。此时ＭＤＬ分子含有１６．２％的α螺旋，４６．３％的β折叠和３７．５％的无规卷曲。ｐＨ９．０时负峰红移至２２０ｎｍ，且在２１７－２２２ｎｍ处的峰值几乎相同；在２０－４０℃范围内，ＣＤ谱的变化甚微；６０℃时谱峰蓝移；在８０℃或１００℃时，２１２ｎｍ处出现一大负峰。１ｍｏｌ／Ｌ或２ｍｏｌ／Ｌ脲时，ＭＤＬ的ＣＤ谱已发生明显变化，二级结构单元也有变化，凝集兔红细胞的活性也随之减弱；随脲浓度的增加，ＭＤＬ的谱峰蓝移，最终在２１２ｎｍ处出现大负峰。当胍浓度为０．７５ｍｏｌ／Ｌ时，ＭＤＬ的ＣＤ谱即有明显变化和活性丧失；胍浓度继续增加，ＣＤ谱逐渐成为特征的无规卷曲的谱形。在ｐＨ９．０、温度超过８０℃、脲或胍浓度分别高于２ｍｏｌ／Ｌ和０．７５ｍｏｌ／Ｌ时，ＭＤＬ的ＣＤ谱发生显著变化的同时，其凝集兔红细胞的生物学活性全部丧失，分子的二级结构单元也发生很大改变。