1例错误否定父权的嵌合体STR分析

随着科学技术的不断发展,亲子鉴定中的嵌合体案例逐渐被发现。亲子鉴定目前通常是在现场采取血样,也有少数机构采取口腔拭子进行STR分型检测。在排除医源性人造异源嵌合体和检材被污染风险因素后,当不同基因座出现多个等位基因异常情况时,往往会考虑被检者为先天嵌合体。但是,如果嵌合体的血液中只存在一种细胞群的时候,血样常染色体STR分型不会出现异常,很容易得出错误的鉴定结论,直接排除亲缘关系。本文所分析案例,就属此类非常罕见的情况。

FOXN1基因敲除兔嵌合体的建立

目的建立F0代FOXN1基因敲除兔嵌合体,以探究普通饲养环境免疫缺陷兔活体保种的方法。方法首先,利用CRISPR/Cas9技术,将构建好的sgRNA和Cas9蛋白注入兔二细胞期胚胎的一个细胞中,以获得FOXN1基因编辑嵌合体胚胎。然后,胚胎移植至代孕母兔。最后,通过PCR技术以及Sanger测序方法鉴定F0代仔兔基因型,并观察其在普通饲养环境生长发育的情况。结果PCR结合Sanger测序结果表明FOXN1基因敲除兔嵌合体构建成功。经观察,嵌合体在普通环境下生长发育良好,无免疫缺陷表型。结论本研究初步建立了在普通环境下可正常生长发育的FOXN1基因敲除兔嵌合体,为后续进一步繁育FOXN1免疫缺陷兔奠定了研究基础。

新型布鲁顿氏酪氨酸激酶蛋白水解靶向嵌合体(BTK PROTAC)的设计合成及活性评价

目的 设计合成新型布鲁顿氏酪氨酸激酶蛋白水解靶向嵌合体(BTK PROTAC),并在体外评估这些分子对BTK蛋白的降解活性。方法 以Nurix Therapeutics公司临床化合物NX-5948为先导化合物,分析其与靶蛋白的相互作用,通过引入并环代替吡嗪胺的骨架跃迁思路对其进行结构改造,成功合成了一系列新型BTK PROTACs,通过时间分辨荧光共振能量转移技术(TR-FRET)、MTS法和蛋白质免疫印迹法分别测定目标化合物的激酶活性、细胞增殖抑制活性和BTK蛋白降解活性。结果 共合成6个目标化合物(化合物B~G),活性测试结果显示,大部分化合物都具有优异的细胞增殖抑制活性和BTK降解活性,其中化合物B表现出较优的BTK蛋白降解能力,其半数最大降解浓度(DC_(50))值约为0.1 nmol·L^(-1)。结论 基于NX-5948,通过骨架跃迁的方法设计合成了一类新颖的BTK PROTAC化合物,进行了构效关系的初步探索,可为BTK PROTAC降解剂的进一步研究提供参考。

15三体嵌合体:羊水穿刺产前诊断及胎儿组织的遗传检测

目的:对无创胎儿DNA检测结果提示为15号染色体异常的孕妇进行产前诊断并对流产胎儿组织进行遗传检测,为15三体嵌合体的遗传咨询和产前诊断提供依据。方法:选取1例无创胎儿DNA提示为15号染色体异常的孕妇,应用染色体核型分析、染色体微阵列分析技术(CMA)进行产前诊断并对流产胎儿组织进行荧光原位杂交(FISH)验证。结果:产前诊断胎儿羊水细胞染色体核型为15三体嵌合体,嵌合比例约为6.67%,CMA结果提示为15三体嵌合体,嵌合比例约为70%。二者结果相同,但嵌合比例存在较大差异。经遗传咨询及知情同意,孕妇及家属选择终止妊娠,取流产胎儿羊水及胎盘进行FISH验证,羊水检测结果提示15三体嵌合比例约为48%,胎盘检测结果提示15三体比例约为39%。结论:该例胎儿为15三体嵌合体,是真性嵌合体。羊水细胞培养过程中46,XN细胞可能存在优势生长,导致产前诊断染色体核型分析与CMA嵌合比例存在较大差异。流产胎儿组织的FISH检测对产前诊断结果验证具有良好的应用效果。

蛋白水解靶向嵌合体在抗病原体药物研发中的研究进展

[背景]靶向蛋白降解技术依赖细胞内天然存在泛素化-蛋白酶系统与溶酶体降解系统两种方式,能够特异性地靶向癌症目标蛋白并对其进行降解,从而达到治疗疾病的目的,并已被证明可用于传统小分子难以靶向的不可成药受体蛋白.蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)作为一种较为成熟的靶向蛋白降解的双功能分子,多用于靶向癌症治疗,也进一步展现出在感染性疾病(抗病毒和抗菌)领域的优势,是利用细胞自身破坏机制降解特定疾病相关蛋白的最有前景方法之一.[进展]本文主要阐述PROTAC的分子组成和作用机制,分别介绍小分子形式和非小分子形式PROTAC的分类及其优势,并总结PROTAC在抗病毒感染(流感病毒、肝炎病毒、新型冠状病毒及人巨细胞病毒)和抗菌感染(结核分枝杆菌)方面的最新研究进展.[展望]考虑到PROTAC本身固有的缺点,可借助纳米颗粒等递送系统作为载体,从而改善其生物相容性和细胞渗透性,进而提高其靶向和治疗效果,旨在为更多PROTAC相关的药物研究提供思路.

碳离子束辐射诱变水稻基因突变嵌合体的分子特征

嵌合体是辐射诱变M1代普遍存在的现象,然而,有关水稻的嵌合体突变效应及变异遗传机制尚不清楚。本研究采用靶向捕获测序技术获得碳离子束辐照后的OsNramp5突变嵌合体,并利用10kb液相芯片检测该嵌合体的M1代及突变M2代基因组的SNP/InDel发生及变异遗传分离特征。结果表明:水稻M1代嵌合体中检测到的OsNramp5基因突变位点未遗传至M2代,即在M1代体细胞检测到的突变位点未进入生殖细胞遗传;另外,在M1基因组突变类型中,转换是颠换的2倍,虽然超过一半变异位点遗传至M2代,但很少位点来自基因功能编码区。本研究揭示了碳离子束辐照诱变的体细胞M1代嵌合体的基因组变异特征及其在M2代的遗传特征,为研究碳离子束辐照后的嵌合体突变效应机制和选择诱变育种程序提供参考。

基于蛋白降解靶向嵌合体的IRAK4降解剂的设计、合成及生物活性评价

目的 设计并合成具有抗肿瘤活性的白细胞介素-1受体相关激酶4(IRAK4)降解剂。方法 将IRAK4蛋白配体与E3连接酶配体经不同类型和长度的连接链进行连接,合成目标化合物,其结构经MS谱和~1H NMR谱确证。以大B细胞淋巴瘤细胞OCI-LY10为测试细胞株,对所合成的目标化合物进行体外抗肿瘤活性评价以及对IRAK4的降解测试。结果 合成了9个靶向IRAK4的降解剂,活性测试结果显示目标化合物均可抑制大B细胞淋巴瘤细胞OCI-LY10细胞增殖,其中化合物Ⅲ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ对IRAK4有较强的降解活性,半数最大降解浓度(DC_(50))值在1~10 nmol·L^(-1)。结论 利用蛋白降解靶向嵌合体技术,通过对IRAK4的降解,实现对肿瘤细胞的增殖抑制,值得进一步研究。

蛋白水解靶向嵌合体类药物及其潜在风险分析

目的介绍靶向蛋白质降解(TPD)技术中“蛋白水解靶向嵌合体(PROTACs)”技术的作用机制和设计原理,讨论现有基于PROTACs技术药物的潜在风险及解决方案,以期为新型、高效且安全性较高的PROTACs类药物研发提供参考。方法分析近年来已发表的相关文献信息,归纳PROTACs技术的作用机制、各组成部分的设计原理、已发现的潜在风险及已报道的应对策略。结果对PROTACs类药物的设计,多从靶蛋白结合分子的溶剂暴露区域选择合适的位点与连接链结合,同时该设计应基于高分辨率的晶体结构,并且应避免小分子与靶蛋白的结合亲和力发生变化;在E3连接酶及其配体选择上,多是先从使用较为广泛的CRBN和VHL连接酶配体开始进行逐步筛选;在连接链设计上,多是从柔性PEG类链开始筛选;在潜在风险上,PROTACs类药物存在如过度降解、脱靶毒性、Hook效应、代谢产物毒性、醛氧化酶参与代谢、linker断裂型产物毒性等问题。结论建议将PTOTACs化合物视为整体看待,灵活应用蛋白质组学等技术方法,预防与监测分析该类化合物的代谢产物毒性,为开发活性更好、安全性更高的PROT ACs药物奠定基础。

4例ABO和Rh血型嵌合体的血清学及分子生物学基础研究

目的研究血型嵌合体的血清学特征分子生物学确认方法。方法对4例医院输血科送检做ABO和RhD血型的患者,进行ABO和Rh血型鉴定、毛细管离心分离新生红细胞、吸收试验、DTT处理凝集红细胞试验,同时对患者1的血样进行分子生物学研究。结果患者1:ABO血型为AB/B型嵌合,Rh血型为RhCE基因嵌合;患者2:Rh血型为RhD基因嵌合;患者3:ABO血型为AB/B型嵌合,Rh血型为RhD基因嵌合;患者4:ABO血型为O/B型嵌合,Rh血型为RhCE基因嵌合。结论在血型血清学上,排除患者有近期输血史,同时又不存在使患者抗原减弱的疾病情况下,ABO和Rh血型出现混合外观现象是其主要特征,实验人员可依据此怀疑患者是有血型嵌合体的可能通过血清学和分子生物学方法进行确认。

胎儿低比率嵌合体产前诊断方法的比较

目的:探讨染色体微阵列分析(CMA)、荧光原位杂交(FISH)和细胞核型分析在胎儿羊水低比率嵌合体中的诊断差异性。方法:回顾分析我院2019年1月-2020年12月无创DNA产前筛查提示21、18、13为高风险(Z值<5),补充报告为性染色体可能异常的病例,并进一步联合运用CMA、FISH与细胞核型分析确诊其是否为异常核型及嵌合比例。结果:收集30例,FISH检出率100%(95%CI:88.65%~100%),核型分析检出率70%(95%CI:52.12%~83.34%),CMA检出率13.33%(95%CI:5.31%~29.68%)。对于嵌合体的检测,核型分析与FISH方法有统计学差异(P=0.004),CMA与FISH检测也有统计学差异(P<0.001)。结论:对于无创DNA产前筛查提示21、18、13为高风险(Z值<5),或者性染色体数目存在异常的胎儿,FISH可以作为确定嵌合类型以及异常核型嵌合比例的首选检测方法。

洋葱黄色条纹突变体叶绿体基因组测序及嵌合体验证

为鉴定洋葱黄条纹突变体中叶绿体基因组基因突变,利用洋葱黄色条纹突变体进行黄色组织叶绿体基因组测序及差异位点验证分析,对突变体种子果夹表型特征与出苗后表型进行对比分析,并利用ABP1-1、KMOX-1和MYB-2分子标记对4份黄条纹黄化程度在50%以上的植株绿色和黄色组织DNA进行分子标记多态性检测。结果表明,测序获得突变体叶绿体基因组153 585 bp,与洋葱叶绿体参考基因组比对筛选出5个差异位点,PCR扩增及测序分析发现叶绿体基因组碱基的突变、插入并不导致黄条纹突变;突变果夹黄化程度与母株上种子出苗后黄化程度成正比,果夹越黄,种子出苗叶片越黄,3个分子标记对同一株黄色和绿色组织进行PCR验证,发现绿色与黄色组织扩增条带不一致。综上所述,洋葱叶片黄色条纹突变是一种嵌合体突变。

羊水细胞染色体嵌合体的临床分析

通过分析研究羊水细胞嵌合体的发生率、真假嵌合体的辨别及胎儿妊娠结局,为遗传咨询提供参考依据。方法 近六年我院优生遗传门诊就诊并符合各适应症的孕妇,行羊水染色体核型分析。对部分羊水核型为嵌合体的结果结合基因芯片进行分析,部分孕妇选择抽取脐带血,结合超声影像进行遗传咨询,胎儿出生后随访。结果 18464例羊水中101例为嵌合体,发生率为0.55%;嵌合体中有80例同时行基因芯片分析,55例与核型结果一致;10例选择抽取脐带血复查,6例结果与羊水一致;未进行复查的21例中,9例已引产,10例选择继续妊娠,目前未发现明显异常。结论 发现羊水染色体为嵌合核型,可综合基因芯片检查或复查脐带血核型分析,并结合超声检查辨别真假嵌合后进行产前诊断遗传咨询和预后评估。

输血相关的微嵌合体

输血是近年来被认为是引起微嵌合体的原因之一,尤其是在严重创伤患者中最为明显。本文对输血相关的微嵌合体(TA—MC)的发生率、原因、预防及目前所了解的概况作一综述;另外,对妊娠相关的微嵌合体和移植相关的微嵌合体等问题也进行了讨论。

基于Nanoluc技术和荧光分析技术建立蛋白质水解靶向嵌合体筛选方法及评价

目的为了从一系列旨在降解靶蛋白的化合物中筛选出高效的蛋白质水解靶向嵌合体(PROTAC),本文建立了一个稳定的高通量PROTAC筛选方法。方法Nanoluc荧光素酶有LgBiT和HiBiT两个亚基组成,通过将HiBiT标签与mCherry(红色荧光蛋白)、目的蛋白、Halo标签融合表达,LgBiT与GFP(绿色荧光蛋白)融合表达,利用GFP与mCherry的共定位情况可直观评价Nanoluc荧光素酶的组装情况,而通过监测Nanoluc的活性可以指示目的蛋白的含量。利用慢病毒包装系统构建稳定过表达GFP-LgBiT和HiBiT-mCherry-Target-Halo的细胞系,使用可募集Halo标签融合蛋白被Cul2-Rbx1-Elo BCVHL复合体降解的Halo PROTAC3诱导HiBiT-mCherry-Target-Halo降解,进一步利用蛋白质免疫印迹(Westernblot)、Nanoluc荧光素酶活性分析系统和流式细胞术分别评价Halo PROTAC3诱导底物降解的效率。结果Halo PROTAC3高效降解HiBiT-mCherry-Target-Halo,并呈现浓度和时间依赖性。结论本文建立了一种联合Nanoluc技术和荧光分析的PROTAC筛选策略,用Halo PROTAC3作为阳性对照,可以快速评价PROTAC分子使底物蛋白被降解的效率,实现对PROTAC的“优化选择”或者“优中选优”,为最终PROTAC的开发应用提供保障。

特发性黄斑前膜手术前后嵌合体带改变与视功能的相关性

目的:探讨特发性黄斑前膜(IMEM)患者手术前后黄斑区微结构与术后视功能恢复的相关性。方法:选取2017-01/2019-12就诊于我院的IMEM患者43例43眼,术前、术后3、6、9mo均检测最佳矫正视力(BCVA),进行视物变形(M-chart评分表)评分,并采用频域光学相干断层扫描(SD-OCT)测量中心凹视网膜厚度(CFT)、中心凹下脉络膜厚度(SFCT)、神经节细胞-内丛状层(GC-IPL)厚度及嵌合体(IZ)带缺损长度。结果:术后3、6、9mo,纳入患者BCVA和视物变形程度均较术前逐渐改善(均P<0.05),且BCVA与CFT、IZ带缺损长度均呈正相关(P<0.05),与SFCT、GC-IPL厚度均无相关性(P>0.05);视物变形评分与CFT均呈正相关(P<0.05),与SFCT、GC-IPL厚度、IZ带缺损长度均无相关性(P>0.05)。结论:CFT和IZ带缺损长度与IMEM术后BCVA具有显著相关性,这两项指标可作为预测IMEM术后视功能恢复的指标。

染色体嵌合体在基因检测中的研究进展

染色体嵌合体是指个体中存在两个或多个染色体不同的细胞系,这些细胞系来源于单个受精卵。染色体嵌合体标本来源困难、临床结局多样导致临床结果解释和检测困难,是基因研究的难点之一。本文将对嵌合体的形成机制、致病性以及基因检测技术等进行综述,为临床治疗和产前遗传咨询提供更好的诊疗依据。

专利视角下我国蛋白降解靶向嵌合体技术创新态势研究

目的 为我国蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)技术研究提供信息服务支撑,为相关药物研发机构的技术开发和专利布局提供参考。方法 采用专利分析法,以HimmPat专利数据库为检索平台,对截至2022年2月向中国国家知识产权局专利局申请且已公开的PROTAC技术相关专利申请进行检索,对其专利申请趋势、技术生命周期、主要申请人、技术来源国、技术主题及改进路线等专利数据进行分析。结果与结论 本研究共纳入专利133件。PROTAC技术在我国开始进行专利申请的时间较晚,申请人数量从2015年的2家发展到2020年的30家,申请量从2015年的2件增长到2020年的38件,年度专利申请量和申请人数量都处于快速增长时期,但单个申请人年均申请量仍不足2件,表明该领域的研究仍处于技术的发展期早期;Arvinas、海思科、海创药业等申请人的申请数量位居前列。国内申请量虽领先于国外来华申请量,但国内专利申请的平均简单同族申请量及平均简单同族国家量仅为1.5,远低于国外来华申请量,反映出国内申请在“质”的层面仍有提升空间。PROTAC技术最初的改进主要集中在E3连接酶配体和靶点、配体的选择,之后陆续出现新型PROTAC开发、连接子设计、配套方法等新的改进方向,表明专利申请主体在PROTAC技术发展初期便已开始多赛道布局。建议我国PROTAC药物研发可重点从提高PROTAC药物的口服生物利用度、生物安全性,克服潜在耐药性,探索理性设计及评估方法等方面进行考虑。

人兽嵌合体技术的伦理问题及其规范

21世纪以来,随着生物医学的蓬勃发展,人兽嵌合体技术的研究和讨论引起了广泛关注。人兽嵌合体的一般研究是将人类干细胞导入去除器官基因的动物胚胎,旨在人兽嵌合体内培育出人类器官,以解决人体器官的供体短缺问题和为相关科研的发展提供实验材料等。但因其技术涉及跨物种的基因改造,破坏了物种界限和生态位的自然性,引起了威胁物种安全、损害人类尊严等多方面的伦理问题。人兽嵌合体技术的发展是科技进步的时代选择,存在其必然性和合理性,不应该受到绝对程度的禁止,但必须遵守安全且有利、尊重、公正等伦理学原则,在严格有序的伦理规范下和谐运行。

11号染色体三体嵌合体病例的遗传学检测及分析

11号染色体三体嵌合体临床罕见,决策困难。本研究综合运用非侵入性产前检测、染色体核型分析、染色体微阵列分析、染色体拷贝数变异测序、荧光原位杂交等技术,对2例11号染色体三体嵌合体病例进行检测及遗传咨询。2例病例获得不同的妊娠结局,11号染色体三体的限制性胎盘嵌合胎儿表现为严重生长受限,孕25+3周终止妊娠,胎盘嵌合比例达44%;而11号染色体三体的胎儿真性低比例嵌合体,排除了单亲二倍体且超声无异常,经慎重的产前咨询后,选择继续妊娠至足月分娩,新生儿随访一年余,发育未见异常,妊娠结局良好。非侵入性产前检测对限制性胎盘嵌合具有一定的检测效能,但也可能漏诊胎儿真性嵌合体病例,非侵入性产前检测结果阳性而侵入性产前检测未发现异常的病例,需重视咨询并加强妊娠期管理。

限制性胎盘嵌合体的妊娠与分娩结局

目的 分析限制性胎盘嵌合体(CPM)的妊娠与分娩结局。方法 收集2017年10月至2021年11月行无创产前检测(NIPT)结果异常样本的产前诊断及胎盘染色体检测结果,分析CPM的妊娠与分娩结局。结果 在48例进行胎盘染色体检测的样本中(对照组27例,CPM组21组),对照组妊娠期间发生合并症的有5例(18.52%),1例子痫前期,2例为妊娠期糖尿病(GDM),1例妊娠期高血压,1例妊娠期血小板减少合并水肿。CPM组妊娠期合并症有6例(30.00%),4例GDM,1例重度子痫前期,1例血栓前状态。对照组胎儿超声异常2例(7.41%),1例胎儿右肾轻度分离(7.2 mm),1例羊水偏少,其余25例胎儿超声未见异常,27例新生儿顺利分娩。CPM组4例胎儿超声异常(20.00%),1例胎儿超声提示右手多指,3例提示羊水少,其中1例合并胎儿生长受限。1例因羊水检出21q22.3区域可能存在致病性缺失,孕妇坚决要求引产,其余20例新生儿均顺利分娩。对照组新生儿小于胎龄儿(指出生体重<10%或<-2SD,SGA)有2例(7.41%),出生体重Z-Score分别为-3.01SD及-4.63SD。CPM组新生儿SGA有4例(20%)。4例SGA分别为16号染色体三体1例(出生体重Z-Score:-2.61SD),13号染色体三体1例(出生体重Z-Score:-3.29SD),嵌合X染色体单体2例(出生体重Z-Score:-2.79SD、-3.47SD)。结论 CPM组妊娠期合并症、胎儿超声异常及SGA发生率均比对照组高。