鸡蛋开窗法对嵌合体鸡制备效率的影响

将受体种蛋分为3组,分别经换壳法、钝端开窗法和赤道面开窗后,比较3种开窗方法对孵化率的影响;分离培养鸡胚胎干细胞(ESCs),体外培养传代后用线性化的质粒p EGFP-N1转染鸡ESCs,比较显微注射时3种不同的处理方法对孵化率的影响;对获得的嵌合体鸡分别提取血液和组织DNA后进行PCR检测。结果表明:赤道面开窗法的孵化率显著高于换壳法和钝端开窗法(P<0.01);开窗后,显微注射经转染的ESCs组孵化率显著低于其他2组(P<0.01);PCR检测结果显示,有四只嵌合体鸡的部分器官表达了EGFP基因,其中两只鸡的性腺发生EGFP基因的嵌合。表明赤道面开窗后,对受体鸡胚下腔显微注射经转染的ESCs可以生产嵌合体鸡,产生嵌合体鸡的效率为4.17%。

关于用注入细胞的方法获得嵌合体鸡的可能性

关于用注入细胞的方法获得嵌合体鸡的可能性Ａ．Ｂ．等著魏庆信译原载《ＣＥ》１９９３．Ｎｏ．２（译者单位：湖北省农科院畜牧兽医研究所）为了获得转基因禽，除了显微注射外源遗传物质到受精卵的基本方法之外，正在试验不直接转基因的方法，这种方法是利用转移供体细胞...

嵌合体鸡的培育

筑波大学农林学系助教授田岛淳史等小组使用鸡未分化性腺的生殖细胞培育嵌合体鸡在世界上首次获得成功。它将为鸟类基因资源的保存和导入外源基因的转基因鸡的培育作出贡献。

特异性PCR反应鉴别携带W染色体的嵌合体公鸡子代性别的研究

利用聚合酶链式反应 (PCR)特异扩增家鸡W染色体高度重复序列EcoRI家族的 44 7bp片段 ,作为鉴定家鸡W染色体存在的依据。 4个表现型为雄性的嵌合体公鸡的精液中检测到了W染色体 ,通过人工授精获得嵌合体子一代。检测了其中 188个雏鸡的血液 ,5 1.6 % (97/ 188)含有W染色体 ,χ2 检验结果显示 ,雌雄后代符合 1:1的比例 ,这表明在这 188个成活的嵌合体子代中 ,基本上没有W染色体精子所产生的雏鸡 ,携带W染色体的精子没有将其W染色体传递到其子代雏鸡中。本研究利用PCR性别鉴定技术 ,从分子水平上对精液中携带W染色体的嵌合体公鸡 (ZW→ZZ型 )子代的性别分化作了初步的探讨。

供体细胞在鸡-麻鸭嵌合体胚胎中的发育

用微注射法将鸡的PGCs注入到麻鸭的胚盘下腔中 ,用鸡W染色体DNA探针通过原位杂交对供体细胞在嵌合体胚胎中的发育作了研究。 5 4个胚胎各器官都有不同程度的嵌合 ,其中肝脏的嵌合率最高 ,性腺最低。胚盘细胞移植法可制备鸡 -麻鸭的体细胞和种系嵌合体。

供体PGCs在鸡-鸭嵌合体胚胎性腺外的发育

通过微注射法将鸡原始生殖细胞 (PGCs)注入到鸭的胚盘下腔中 ,用鸡 W染色体 DNA探针通过原位杂交的方法对供体 PGCs在嵌合体胚胎性腺外的发育作了研究。结果表明 ,所取的 4 8枚胚胎中 ,有 18.8%的脑内和 2 3.

鸡Ⅹ期囊胚细胞研究进展及其应用

鸡Ⅹ期囊胚细胞(Blastodermal cells,BCs)作为潜在的胚胎干细胞,在胚胎发育动物模型、禽类转基因技术以及家禽种质资源冷冻保存等方面有广阔的应用前景。文章对鸡BCs的形态特征、体外培养、诱导分化、遗传修饰、冷冻保存、性别鉴定等体外操作方面的研究与应用进行了综述。

人胎盘碱性磷酸酯酶基因在鸡蛋蛋清中的表达

利用PCR方法从pSEAP2-control质粒中扩增获得人胎盘碱性磷酸酯酶基因plap的cDNA,将其克隆到鸡输卵管特异性表达载体(pAB-Sig-SV40)的卵清蛋白基因调控区下游。通过脂质体精子载体法人工授精母鸡,收集鸡蛋、孵化。雏鸡出壳后,抽提鸡冠基因组DNA,采用PCR方法检测两组孵化后代中的嵌合体鸡,第1组母鸡(95羽)中plap的PCR阳性检出率为75%,第2组母鸡(128羽)的阳性检出性率为81%。经Western blotting检测,仅1只嵌合体母鸡所产鸡蛋蛋清中检测到plap产物的存在。

鸡胚胎干细胞的分离及其嵌合体制备条件探索

分离培养鸡胚胎干细胞(ESCs),体外培养传代后,进行碱性磷酸酶活性检测和SSEA-1染色鉴定;并用线性化的质粒pEGFP-N1转染鸡ESCs。受体种蛋经赤道面开窗后,将经转染的ESCs注射到受体鸡胚胚下腔,以便制作嵌合体鸡;对获得的嵌合体鸡分别提取血液和组织DNA后进行PCR检测。结果表明:5只存活的的嵌合体鸡血液中没有发生EGFP基因嵌合,但有4只嵌合体鸡的部分器官表达了EGFP基因,其中有2只鸡的性腺发生嵌合,表明利用赤道面开窗后对受体鸡进行胚下腔显微注射可以生产嵌合体鸡。