嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)灭活苗对商品猪免疫保护效力的研究

运用多功能细胞电穿孔仪将本实验室构建的重组pSK-dPCVl-2质粒转染Dulac细胞，传代培养后获得具有稳定感染细胞的重组嵌合型猪圆环病毒PCV1-2。将该重组病毒灭活后与ISA206VG佐剂乳化制成灭活苗，通过免疫效力试验来评价该疫苗的免疫保护效力。将42日龄PCV2母源抗体水平较低的20头商品猪随机分成4组，另外2头作为健康对照组。分2次免疫，通过检测不同时间的间接免疫荧光抗体滴度、中和抗体滴度、平均日增重、攻毒后病毒血症以及解剖后病理变化和组织中的病毒载量等各项指标评价疫苗的免疫保护效果。结果显示：二免后14d，所有免疫组试验猪都表现为PCV2血清学阳性，且中和抗体水平在1／15～1／20。在猪的增重方面，免疫组猪和健康对照组猪的体重都有增加，而攻毒对照组猪的体重没有增加，且3个免疫组和攻毒对照组之间平均日增重差异显著（P〈0．05）。攻毒后21d扑杀试验猪，免疫组猪的淋巴结和各脏器的大体和显微病变都比攻毒对照组轻微。攻毒对照组的淋巴结出现多核巨细胞和嗜酸性粒细胞，且有多量的淋巴细胞缺失，免疫组未见多核巨细胞，淋巴细胞缺失也较少。淋巴结中PCV2病毒载量的log10在攻毒对照组为5．566±0．432，在10^（4.0）、10^（5.0）、10^（6.0）。TCID50·mL^（-1）免疫组分别为4．469±1.023、4．434±0．716、3．521±0．958，其中10^（5.0）、10^（6.0）TCID50·mL^（-1）免疫组与攻毒对照组差异显著（P〈O．05），但是，试验期间各试验组和健康对照组均未观察到明显的类似PMWS的临床症状。断奶仔猪免疫10^（5.0）TCID52·mL^（-1）以上嵌合型猪圆环病毒PCV1-2灭活苗可以有效地抵抗PCV2b／1B／Jiangsu／JingJiang／2012／11／08病毒感染。

猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究

猪圆环病毒2型(PCV2)经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下:①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著(P<0.05)。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。

猪圆环病毒2型感染对猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗体液免疫的影响

本试验采用ELISA方法对单独接种猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株灭活苗组(HP组,n=3)和PCV2感染且出现病毒血症后接种PRRSV变异株灭活苗组(PCV2/HP组,n=3)不同时相血清中的PRRSV抗体进行检测;并对HP和PCV2/HP组血清中PCV2特异的抗体和核酸分别进行ELISA和荧光定量PCR检测。结果表明,在首免后70dHP组血清平均抗体效价极显著高于PCV2/HP组(P<0.01);首免后56、63和77dHP组平均抗体效价明显高于PCV2/HP组。其中在首免后56和63dHP组抗体阳性率均达67%(2/3),PCV2/HP组在相应时相抗体阳性率为0;在首免后70和77dHP组抗体阳性率均达100%(3/3),PCV2/HP组在相应时相抗体阳性率仅为0和33%(1/3)。结果提示PCV2感染可在一定程度上抑制PRRSV变异株(JXA1)特异性的抗体反应。

我国猪圆环病毒2型疫苗研发及应用现状

猪圆环病毒2型(PCV2)是目前已知的最小的猪病毒,但其却给养猪场带来巨大的经济损失。目前,防控PCV2的主要措施是免疫接种。2009年我国引进了首个猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗,同时也投入了大量的研究资金自主研发各种疫苗,目前市场上出现了多种类型的猪圆环病毒2型疫苗,包括全病毒灭活苗、基因工程疫苗等。本文着重概括一下我国猪圆环病毒2型疫苗研发及应用现状,提出一些看法与展望,希望对广大疫苗研发及使用单位有所启发。

嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪，9头猪随机分为4组，1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头，2组（2头）肌肉注射真核表达质粒200μg／头，3组（2头）肌肉注射空载体（pcDNA3．1）200μg／头，4组（2头）不免疫作为攻毒对照组。于免疫后42d，PCV1—2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体。免疫后42d所有组攻毒PCV2和PRRSV，剂量分别为2×10^4.5 TCID50／头和10^6 TCID50／头。攻毒后21d，攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大，免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒栽量低于对照组，攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组。这些结果表明，嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后，对PCV2感染能产生保护性免疫应答，有可能成为候选疫苗。

要做就做最好的基因工程疫苗-访易邦生物猪苗事业部总经理张丽宏

在市场上常见的猪用疫苗中,按疫苗种类分类大致分为全病毒灭活苗、减毒活疫苗、基因工程苗(包括亚单位苗.载体疫苗,核酸疫苗)等,传统的疫苗是用全病毒,全知菌来制备,而基因工程疫苗是通过生物技术分析病毒.細菌的结构,找到能够发挥免疫保护作用的基因片段,将目的基目片段插入新的载体,使之充分表达,经純化后而制得的疫苗,純蛋白含量是评估基因工程疫苗貭量标准的指标之一。作为现代分子生物学和分子免疫学的一个主要发展方向,基因工程疫苗在猪群中的各大疾病的免疫预防方面发挥着越来越大的作用。2014年10月青岛易邦生物工程有限公司(以下称"青岛易邦")研发的猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗(易固净)上市,2017年正值易圓净上市三周年之际,本刊有幸采访到青岛易邦猪苗事业部总经理张丽宏女士,就易圆净的研发和三年来的销售情况进行了详細地了解!