转染嵌合性T细胞受体基因小鼠T淋巴细胞的体外抗肿瘤作用

目的:研究小鼠T淋巴细胞在转染嵌合性T细胞受体基因后的体外抗肿瘤作用。方法:应用重组DNA技术,将HER2特异性嵌合性T-细胞受体构建入逆转录病毒载体;转入包装细胞后,收集病毒上清,转染小鼠T淋巴细胞,转基因后的小鼠T淋巴细胞分别与HER2阳性(SK-OV-3)或阴性(MCF-7)的肿瘤细胞系共培养,检测其细胞因子γ干扰素释放,51Cr释放法检测CTL评价其抗肿瘤效应。结果:所构建载体经酶切鉴定符合要求,乒乓法转染包装细胞系GP+E86,检测病毒滴度为1.2×106,Retronectin结合离心法转染经抗CD3/CD28单抗活化的小鼠T淋巴细胞,转染效率可达50%以上;转染嵌合性T细胞受体基因的T淋巴细胞与HER2阳性或阴性的肿瘤细胞系共培养后可检测到HER2特异性的细胞因子γ干扰素释放,51Cr释放法测CTL可见转染嵌合性T细胞受体基因T淋巴细胞对HER2阳性的肿瘤细胞具显著杀伤效应。结论:转染嵌合性T细胞受体基因的小鼠T淋巴细胞在体外可通过细胞因子释放和CTL效应发挥显著的抗肿瘤作用。

表达嵌合性T细胞受体的肿瘤浸润淋巴细胞对KDR表达阳性细胞的选择性杀伤作用

目的 研究表达嵌合性T细胞受体VEGF12 1 hinger FcRγ的肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)对血管内皮生长因子 (VEGF)受体KDR(kinase domaininsertcontainingreceptor)表达阳性细胞的选择性杀伤作用。方法 应用分子克隆技术重组VEGF12 1 hinger FcRγ(Vhγ) ,构建重组逆转录病毒质粒pMSCVneo Vhγ ,经PT6 7包装后筛选高滴度的病毒 ,体外感染分离于肝癌组织的TIL ,获得MSCVneo Vhγ TIL。以空病毒感染TIL获得的MSCVneo TIL作为对照。以MTT比色法分析不同的TIL细胞对 4种靶细胞 (不表达VEGF受体KDR的成纤维细胞系NIH3T3和肝癌细胞系HepG2 ,以及表达VEGF受体KDR的人脐静脉血管内皮细胞系ECV30 4和恶性黑色素瘤细胞系A375 )的杀伤活性。结果 未转染的TIL和MSCVneo TIL对NIH3T3和ECV30 4无明显的杀伤作用 ,对HepG2和A375有一定杀伤作用 ,对4种靶细胞杀伤活性的差异无显著性 ;MSCVneo Vhγ TIL对NIH3T3无明显杀伤活性 ,对ECV30 4有明显杀伤活性 ,对HepG2的杀伤与TIL、MSCVneo TIL相比差异无显著性 ,而对A375的杀伤明显增强。结论 嵌合性T细胞受体Vhγ经逆转录病毒载体介导 ,可在TIL细胞表面稳定表达 ,并获得选择性识别和溶解KDR阳性血管内皮细胞和肿瘤细胞的新效应功能。

嵌合性抗原受体T细胞治疗血液肿瘤患者规范化护理体系的构建

目的构建具有系统性、科学性、适用性的嵌合性抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor,CAR-T)治疗血液肿瘤患者规范化护理体系,以期为开展CAR-T治疗提供规范化护理的依据。方法 2017年1月,成立医护技一体化的研究小组,查阅国内外相关文献、经相关专家反复探讨建立草案,应用德尔菲法,对13位相关临床医疗、护理专家进行了两轮专家函询,建立了"CAR-T治疗的规范化护理体系"。结果两轮函询问卷的有效回收率为100%,权威系数(Cr)分别为0.93、0.94,专家协调系数(W)分别为0.336、0.402,具有统计学意义(P<0.05);确立了包括评估、技术操作、并发症预防护理、健康教育、心理干预、集成化管理等6项一级指标和34项二级指标组成的CAR-T治疗血液肿瘤患者规范化护理体系。结论 CAR-T治疗血液肿瘤患者规范化护理体系内容全面合理,构建过程科学,有一定适用性。