嵌合抗原受体巨噬细胞(CAR-M)疗法在炎症相关抑郁症治疗中的应用

经典的嵌合抗原受体巨噬细胞(CAR-M)发挥促炎作用实现抗肿瘤免疫,但是通过改造CAR的结构设计也可以使其有类似M2的抗炎功能,从而治疗炎症性疾病。目前靶向M1型小胶质细胞的CAR-M疗法能够有效减少神经炎症,用于治疗炎症相关抑郁症。随着关于CAR-M抗炎作用的研究不断发展,CAR-M细胞疗法为治疗炎症相关疾病提供了新的思路。

嵌合抗原受体巨噬细胞免疫疗法及其在实体瘤治疗中的应用

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)疗法在血液肿瘤中取得了显著成功,但在实体瘤的治疗中收效甚微。相比之下,固有免疫细胞在癌症中的临床应用还没有得到广泛开发。巨噬细胞是肿瘤微环境中主要的固有免疫细胞并具有较强的吞噬和浸润能力,最近研究发现嵌合抗原受体巨噬细胞(chimeric antigen receptor macrophage,CAR-M)免疫疗法在多种实体瘤中发挥重要的抗肿瘤效应。本文总结了近年来CAR-M治疗肿瘤的相关研究,旨在探究其对实体瘤的潜在治疗价值,为其未来的临床应用提供参考。

靶向NKG2D配体的嵌合抗原受体巨噬细胞具有肿瘤杀伤功能

目的 制备表达NKG2D嵌合抗原受体(CAR)的巨噬细胞(NKG2D CAR-M),研究其是否可以增强巨噬细胞对表达靶抗原的肿瘤细胞系的杀伤效应。方法 合成包含NKG2D的胞外段,CD8α铰链区和穿膜区,CD3ζ胞内信号域的NKG2D CAR基因,构建到腺病毒Ad5F35载体中,利用重组Ad5F35腺病毒感染人原代CD14^(+)单核细胞分化而来的巨噬细胞,制备NKG2D CAR-M。通过流式细胞术和荧光显微镜检测其嵌合抗原受体在巨噬细胞上的表达,通过荧光素酶法检测检测NKG2D CAR-M对高表达NKG2D配体的前列腺癌细胞系PC-3细胞杀伤效果。结果 我们成功制备了NKG2D CAR-M细胞,该细胞对高表达NKG2D配体的PC-3细胞具有非常显著的杀伤效果。结论 NKG2D CAR-M对高表达NKG2D配体的肿瘤细胞具有显著的杀伤效果。

嵌合抗原受体巨噬细胞的研究进展

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)技术介导的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)疗法虽然已在急性B淋巴细胞白血病的临床治疗上取得了显著的效果,但是在实体瘤治疗中却进展缓慢。相比T细胞,巨噬细胞在实体瘤微环境中不仅具有较强的渗透性,而且具有促进抗原提呈和增强T细胞杀伤活性的作用,因此CAR巨噬细胞(CAR-M)在实体瘤的治疗中具有重要的应用前景。本文通过对CAR-M的细胞来源,CAR-M载体的构建和传递及CAR-M的临床研究进行综述,旨在为CAR-M的临床转化应用提供参考和依据。

实体瘤治疗新策略:嵌合抗原受体巨噬细胞的免疫治疗潜力

实体瘤是当今世界严重威胁人类健康的疾病之一。针对实体瘤的治疗方法,传统手术、放射治疗、化学药物治疗存在自身的局限性,免疫检查点抑制剂虽有效,但并非所有患者均有响应。嵌合抗原受体-巨噬细胞(chimeric antigen receptor-macrophage, CAR-M)疗法是通过基因工程改造巨噬细胞,使其表达特异性识别肿瘤抗原的嵌合受体,展现出定向杀伤肿瘤细胞的潜力。但目前CAR-M治疗实体瘤领域还处于临床前和早期临床研究阶段。本文将对CAR-M目前已进行的前期研究现状进行全面综述,包括CAR结构的设计、供体细胞来源及CAR基因向巨噬细胞的载体递送等方面,并对目前CAR-M发展的局限性和挑战进行汇总,为未来CAR-M的发展提供新的研究思路。

张进研究员团队发现具有“胞葬”肿瘤细胞功能的第二代工程化嵌合抗原受体-巨噬细胞可治疗实体瘤

2023年11月27日,浙江大学基础医学院张进研究员团队在《自然·免疫》(Nature Immunology)在线发表了题为“A second generation M1-polarized CAR macrophage with antitumor efficacy”的研究成果(DOI:10.1038/s41590-023-01687-8)。该项工作设计了抗原依赖性极化的第二代诱导多能干细胞(iPSC)来源的嵌合抗原受体(CAR)巨噬细胞(CAR-iMAC),阐明了其抗原依赖性极化和激活,以及通过“胞葬”作用杀伤肿瘤的机制,为CAR-iMAC应用于实体肿瘤的免疫细胞治疗提供了坚实的理论基础。

一种靶向HER2嵌合抗原受体CAR THP-1细胞系的构建

目的获得稳定转染靶向人类表皮生长因子2(HER2)的嵌合抗原受体巨噬细胞(CAR-M)。方法构建靶向HER2的CAR慢病毒载体并感染人单核细胞白血病细胞系(THP-1)。通过分选流式细胞仪分选出含有绿色荧光标记的CAR THP-1细胞并在体外继续培养。将此靶向HER2的CAR THP-1细胞与HER2表达阴性(-)及阳性(+)的子宫内膜癌细胞系Ishikawa分别共培养,通过成像流式细胞仪检测其对HER2表达阳性肿瘤细胞的靶向吞噬,通过流式细胞仪检测其对HER2表达阳性肿瘤细胞的靶向吞噬比例。结果CAR慢病毒感染THP-1细胞效率较低;与癌细胞共培养后,流式细胞术及成像流式细胞术结果显示,CAR THP-1组与空载体组相比,CAR THP-1细胞对HER2阳性的Ishikawa细胞吞噬能力增强(P<0.01)。结论通过构建CAR慢病毒载体并转染THP-1细胞,成功建立了靶向HER2的CAR THP-1细胞系,且其能通过特异性靶向吞噬HER2阳性Ishikawa细胞。

BCMA靶向的嵌合抗原受体T细胞治疗复发/难治多发性骨髓瘤患者并发噬血细胞综合征临床观察

目的:研究以B细胞成熟抗原(BCMA)为靶点的嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗复发/难治多发性骨髓瘤(MM)后并发噬血细胞综合征(carHLH)患者的临床特点和治疗方案。方法:回顾性分析2018年7月至2021年12月浙江大学医学院附属第一医院BCMA靶向的CAR-T细胞治疗Ⅰ期单中心临床试验(注册号:ChiCTR1800017404)中的99例复发/难治MM患者(包括3例浆细胞白血病患者)的临床资料。收集carHLH组和非carHLH组的临床资料,比较两组临床特点、疗效、CAR-T细胞扩增特点、血清细胞因子水平等差异,并总结carHLH患者的治疗方案及转归。结果:99例患者中,发生carHLH 20例,carHLH发生率为20.20%,carHLH发生的中位时间为细胞因子释放综合征(CRS)后的第7天(第0~19天),集中发生于CRS后第5~10天。与非carHLH患者比较,carHLH患者中男性患者比例、CAR-T细胞治疗前骨髓浆细胞比例、治疗期间发生3~4级CRS的患者比例均更高(均P<0.05);CAR-T细胞扩增高峰更高(P<0.01);血清细胞因子白介素(IL)-6、IL-10和γ干扰素水平更高(均P<0.01);国际标准化比值和D-二聚体峰值更高,纤维蛋白原谷值更低(均P<0.01)。20例发生carHLH的患者中,单独使用托珠单抗治疗7例,单独使用糖皮质激素治疗5例,同时使用托珠单抗和糖皮质激素治疗6例,均好转。MM客观缓解率17例接受疗效评估的carHLH患者为100.00%,78例接受疗效评估的非carHLH患者为94.87%(P>0.05)。结论:接受BCMA靶向的CAR-T细胞治疗的MM患者carHLH发生率较高,治疗前骨髓浆细胞比例越大越容易发生carHLH,且治疗后CAR-T细胞扩增程度及细胞因子水平与carHLH发生密切相关。并发carHLH者在接受以托珠单抗和糖皮质激素为主的治疗后疗效大多较好。

嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其在肿瘤免疫治疗中的应用

嵌合抗原受体修饰的T(chimeric antigen receptor-modified T,CAR-T)细胞是指通过基因修饰技术将带有特异性抗原识别结构域及T细胞激活信号的遗传物质转入T细胞并表达,使T细胞能直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原相结合而被激活的细胞疗法。近年来,CAR-T细胞在血液病治疗中取得了显著的效果,为血液肿瘤患者带来了新的希望,已成为最有希望的肿瘤免疫治疗方法之一,成为各大企业研发的热点。但是由于CAR-T细胞疗法会产生细胞因子风暴等不良反应及对实体瘤的治疗效果不佳,使得CAR-T细胞的临床应用仍面临挑战。除T细胞之外,研究人员正在探讨将CAR运用到其他免疫细胞上,例如对NK细胞、γδT细胞、NKT细胞、巨噬细胞等免疫细胞进行修饰,以提高这些免疫细胞杀伤肿瘤的效果,同时降低CAR-T细胞免疫治疗所带来的不良反应。本文通过比较CAR修饰不同的免疫细胞在肿瘤治疗中的优点和缺点,为CAR修饰免疫细胞在肿瘤免疫治疗中的临床开发和应用提供新的思路和启示。

载脂蛋白嵌合模拟肽对巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的观察载脂蛋白嵌合模拟肽Ac-hE-18A-NH2对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法 RAW264.7巨噬细胞种植于24孔板,用0.5μCi/孔3H-胆固醇和含50mg·mL-1氧化低密度脂蛋白共同孵育24h之后,给予不同浓度的Ac-hE-18A-NH2(0～100mg·mL-1)干预24h,收集细胞用液体闪烁计数法检测胆固醇流出。采用ELISA测定细胞内cAMP含量,采用实时荧光定量PCR及Westernblot检测ABCA1、LXRα和PPARγ的mRNA及蛋白表达。结果 Ac-hE-18A-NH2以浓度依赖方式介导胆固醇流出;50mg·mL-1Ac-hE-18A-NH2干预不同时间,其介导的胆固醇流出率分别为(10.86±1.46)%(6h),(13.43±1.55)%(12h),(20.58±1.34)%(18h),和(26.93±4.37)%(24h)。同时,Ac-hE-18A-NH2还以浓度依赖方式增加细胞内cAMP水平,上调ABCA1、LXRα和PPARγmR-NA和蛋白表达。加用cAMP刺激剂8-Br-cAMP,Ac-hE-18A-NH2介导的胆固醇流出率由26.93±4.37增加至35.81±2.73,ABCA1mRNA表达增加了66.67%。而加用PPARγ特异性抑制剂预处理细胞后,PPARγ的表达几乎完全抑制,ABCA1和LXRα的表达也受到一定程度抑制,Ac-hE-18A-NH2介导的胆固醇流出率明显减少。结论模拟肽Ac-hE-18A-NH2可以明显促进巨噬细胞胆固醇流出,其机制可能与cAMP-ABCA1和PPARγ-LXRα-ABCA1两种途径有关。

载脂蛋白嵌合模拟肽通过NF-κB途径抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞炎症反应

目的:探讨载脂蛋白嵌合模拟肽Ac-hE-18A-NH2对氧化型低密度脂蛋白(oxidized LDL,ox-LDL)刺激下巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响及其作用机制.方法:Ox-LDL刺激RAW264.7巨噬细胞,给予不同浓度的模拟肽Ac-hE-18A-NH2(1～100μg/mL)干预,收集细胞,测定巨噬细胞TNF-α的分泌和mRN表达水平.Western印迹检测ATP结合盒转运蛋白A1 (ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)及P-IκB蛋白浓度.EMSA检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性.结果:Ox-LDL刺激使RAW264.7巨噬细胞TNF-α分泌和mRNA表达明显增强,细胞内胆固醇蓄积,促进IκB磷酸化,并激活NF-κB.Ac-hE-18A-NH2浓度依赖性地降低TNF-α分泌及mRNA表达,上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,减少细胞内胆固醇含量,抑制NF-κB活化,并抑制IκB磷酸化.相同的实验条件下及作用浓度,D-4F对于TNF-α分泌的抑制作用不如Ac-hE-18A-NH2.结论:Ac-hE-18A-NH2能抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞TNF-α分泌和mRNA表达,IκB/NF-κB-TNF-α信号通路是其中作用途径之一.Ac-hE-18A-NH2的抗炎作用优于apoA-I模拟肽D-4F.

载脂蛋白嵌合模拟肽对低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡的影响

目的观察模拟肽Ac-hE-18A-NH2对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的RAW264.7巨噬细胞凋亡的影响。方法50 mg.L-1oxLDL处理RAW 264.7细胞48 h后加入不同浓度的Ac-hE-18A-NH2(1、10、50、100 mg.L-1)和β-环糊精(β-CD)或布雷菲得菌素(BFA)共同孵育24 h。通过流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测caspase-3活性及细胞内胆固醇含量,Western blot检测细胞bcl-2蛋白的表达,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。结果 oxLDL诱导的RAW 264.7巨噬细胞的凋亡率随着oxLDL浓度的增加和处理时间的延长而明显提高。Ac-hE-18A-NH2(1、10、50、100mg.L-1)干预后细胞凋亡率以浓度依赖的方式减少。Ac-hE-18A-NH2呈浓度依赖性的促进细胞内胆固醇流出和降低细胞内的胆固醇含量,降低caspase-3的活性,上调bcl-2的蛋白表达。β-CD与Ac-hE-18A-NH2共同作用后胆固醇流出明显增加,细胞凋亡率相应减少。而BFA作用相反。结论Ac-hE-18A-NH2明显抑制oxLDL诱导的巨噬细胞凋亡,其作用可能与促进细胞胆固醇流出、减少细胞内胆固醇蓄积有关。

巨噬细胞相关的实体瘤治疗新策略

巨噬细胞在实体瘤的发生发展中起着重要作用,基于巨噬细胞的实体瘤治疗也取得了阶段性的成果。与巨噬细胞相关的实体瘤治疗新策略主要包括:调节肿瘤相关巨噬细胞的数量和表型及构建嵌合抗原受体巨噬细胞(CAR-M),前者通过抑制巨噬细胞募集、耗竭肿瘤相关巨噬细胞(TAM)和重编程TAM等方式,减弱TAM对实体瘤的促进作用,增强TAM的抗肿瘤效应;后者基于CAR-T的设计原理,使得巨噬细胞能够特异性识别肿瘤细胞表面抗原,并利用巨噬细胞较强的浸润能力,使得CAR-M能够进入实体瘤发挥抗肿瘤效应。目前,CAR-M疗法已在动物模型中获得了成功,相关临床研究正在进行,尚未获得明确的结论。TAM具有良好的组织浸润能力、吞噬活性和安全性,在实体瘤治疗中展现出广阔的前景,进一步研究TAM表型极化的机制、解决巨噬细胞来源问题、优化CAR-M的体外转染策略,将有效推动巨噬细胞在实体瘤治疗中的应用。

CAR-巨噬细胞在恶性血液病中的研究进展

本文回顾了嵌合抗原受体巨噬细胞(chimeric antigen receptor macrophage,CAR-M)疗法的发展历程,探讨了其在恶性血液系统疾病中的应用进展,介绍了CAR-M相关的临床试验,分析了CAR-M疗法在临床应用中面临的优势与挑战,并对其在未来治疗恶性血液病的应用前景进行了展望。

人重组GM－CSF／HAS－D3嵌合蛋白（GM－HSA）在大肠杆菌中的表达及其产物稳定性的研究

将人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人血清白蛋白第三功能区（ＨＳＡ－Ｄ３）的基因串联后，在Ｅ．ｃｏｌｉ中获高效表达，表达量占菌体蛋白的３２．６％。利用ＴＦ－１体外细胞活性测定表明，ＧＭ－ＨＳＡ的活性单位为１．０４×１０＾６Ｕ／ｍｇ，虽然其比活性低于ＧＭ－ＣＳＦ，但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性。

肿瘤免疫细胞治疗研究进展

肿瘤免疫细胞治疗是一种新型的肿瘤治疗模式,属于肿瘤免疫治疗范畴,旨在通过调节机体的免疫细胞激活状态达到治疗肿瘤的目的.随着肿瘤免疫学理论和技术的发展,肿瘤免疫细胞治疗在血液系统肿瘤和实体瘤的临床治疗上均取得了显著的疗效,有望成为继手术、化疗、放疗和靶向治疗后恶性肿瘤治疗领域的又一场革新.本文仅就肿瘤免疫细胞治疗中以嵌合抗原受体T细胞、自然杀伤细胞以及巨噬细胞为核心的免疫细胞治疗技术的国内外研究情况进行综述.

稳定表达M-CSF及其受体的人—鼠嵌合肿瘤细胞系的建立及性质

目的 :建立稳定表达人巨噬细胞集落刺激因子受体 (M- CSFR)或人巨噬细胞集落刺激因子受体—膜结合型巨噬细胞集落刺激因子 (M- CSFR- m- M- CSF)的人—鼠嵌合肿瘤细胞系 ,作为研究肿瘤免疫治疗的实验模型。方法 :用 PCR技术构建 M- CSFR- m- M- CSF融合 c DNA的真核表达载体。将携带 M- CSFR及 M- CSFR- m- CSF的重组质粒转染小鼠骨髓瘤细胞系 SP2 / 0 ,G4 18筛选所得的混合克隆 ,有限稀释后克隆化培养。结果 :得到 3株稳定表达人 M- CSFR和 4株稳定表达人 M- CSFR- m- M-CSF的嵌合肿瘤细胞系。ABC免疫酶标法和 RT- PCR法证实所获细胞系有明显的目的蛋白表达。皮下接种 BAL B/ c小鼠成瘤率 10 0 %。结论 :建立了稳定表达人 M- CSFR或人 M- CSFR- m- M- CSF的人—鼠嵌合肿瘤细胞系 ,并已成功地用于 M- CSF及其受体 DNA疫苗免疫效应的研究。其原理和方法可供同类研究工作借鉴。

多发性骨髓瘤CAR-T治疗后并发噬血细胞综合征1例报道并文献复习

目的:探讨嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗合并噬血细胞综合征(HLH)的发病机制、临床特征及诊疗。方法:回顾性分析1例复发难治性多发性骨髓瘤患者CAR-T治疗发生HLH的临床表现、诊疗经过及后期随访,并结合相关文献报道,分析CAR-T治疗的相关毒副反应及诊疗方案。结果:该例患者CAR-T输注后第2天即发生1级细胞因子释放综合征(CRS),输注后第35天出现3级CRS,且合并HLH,给予甲泼尼龙及托珠单抗治疗后缓解,现随访15个月余,原发病维持严格意义的完全缓解。结论:CAR-T相关HLH发生率虽然极低,但临床医师应该保持警惕,并延长观察时间,其治疗方案可参考HLH-2004方案。

高中生物课程中的体液免疫深探

体液免疫是高中生物课程中的重要内容,也是重点和难点。它主要包括：抗原的识别、B淋巴细胞的增殖和分化、抗体发挥免疫效应三大阶段。抗原特异性识别的关键是淋巴细胞表面具有能与抗原特异性结合的抗原受体。B淋巴细胞的增殖分化,需要经过抗原刺激致敏,再经活化的辅助性T淋巴细胞分泌的淋巴因子刺激分裂,并最终分化得到记忆细胞和可以产生抗体的浆细胞。抗体具有五种形式,能够标记、结合或杀灭抗原。