发根农杆菌介导的大豆DAD基因沉默嵌合植株的获得

利用发根农杆菌介导的转化方法,获得了大豆DAD基因在根组织中沉默的嵌合植株。同时在pHells Gate12载体基础上插入一个GFP表达盒使得对转基因组织的筛选变得更加简便;通过对荧光组织进行q PCR检测发现转基因组织与对照相比,DAD基因转录水平降低45%~70%。以上结果表明大豆DAD基因在转基因根组织中已被成功沉默,并且利用改造后的p Hells Gate12：GFP载体通过荧光可以对转基因组织进行初步快速筛选。

利用转基因毛状根高效培育大豆嵌合植株的方法

建立高效的大豆(Glycine max)转基因毛状根嵌合植株体系对于推动大豆功能基因组学研究具有重要意义。该研究利用3种大豆基因型材料比较了不同共培养条件下毛状根诱导率及成活率。结果显示,用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)侵染外植体并在黑暗条件下共培养1天是诱导毛状根形成的有效策略。研究发现清除下胚轴处不定根可显著增加毛状根的数目并促进根系生长,进而提高转基因毛状根的阳性率。毛状根诱导14天接种根瘤菌,可增强生长初期转基因毛状根与根瘤菌的接触,从而提高大豆的结瘤效率。该研究成功建立了一种高效培育大豆转基因毛状根嵌合植株的方法,可广泛应用于大豆基因功能研究。

发根农杆菌介导白羽扇豆转基因过表达体系的建立

白羽扇豆(Lupinus albus)是研究耐低磷机制的模式作物,然而遗传转化体系的缺乏极大限制了其功能基因组学研究。本试验以白羽扇豆品种‘Amiga’为材料,研究不同发根农杆菌菌株对白羽扇豆毛状根诱导率和阳性转化率的影响。结果发现K599为白羽扇豆发根遗传转化的最适菌种,进而确立了一套高效的白羽扇豆毛状根转化体系,并成功获得增强型绿色荧光蛋白基因EGFP (ENHANCED GREEN FLUORESCENT PROTEIN)在白羽扇豆毛状根中过表达的嵌合植株。该遗传转化体系的建立为白羽扇豆功能基因组学研究提供了强有力的方法支撑。