异基因骨髓移植后嵌合状态的研究进展

骨髓移植是许多血液系统疾病和免疫缺陷性疾病的有效治疗措施 ,移植成功与否与供者细胞在受者体内的植入状况即嵌合状态的形成有关。由于造血干细胞输入量、供者和受者T细胞量、预处理方案以及移植时患者病情等因素的影响 ,可以形成不同形式的嵌合状态。如果受者的骨髓或外周血中完全是供者的细胞 ,则形成完全的供者嵌合状态 (CC) ;当检测到供者和受者两种细胞成分时 ,则为混合嵌合状态 (MC)。不同形式的嵌合状态 ,以及嵌合状态形式的不同演变趋势 ,其临床意义各不相同。检测嵌合状态的方法有多种 ,包括微卫星检测、染色体核型分析、血型转换、红细胞抗原、限制性片段长度多态性、可变数目串联重复序列以及现在最常用的PCR法。

肾移植术后受者体内微嵌合状态的研究

目的:探讨肾移植术后受者体内微嵌合状态与移植肾功能、排斥反应之间的关系。方法:采用对人类性别决定基因SRY扩增的巢式PCR方法,对接受79例男性供肾的女性肾移植患者外周血的微嵌合进行检测分析。结果:总的微嵌合发生率为55.70%(44/79),其中移植后6个月内微嵌合的发生率为35.71%,6～18个月内发生率为46.67%,18个月以上发生率为71.43%。10例患者术后14d至6个月连续观察发现微嵌合的出现呈波纹式动态变化。嵌合阳性患者的排斥反应发生次数明显少于嵌合阴性患者(P<0.05),但二者血肌酐值差别无显著性(P>0.05)。结论:微嵌合阳性患者的排斥反应发生率明显降低。

以口腔粘膜细胞为对照检测异基因造血干细胞移植后嵌合状态

目的:探讨以口腔粘膜细胞DNA代表移植前基因状态的可行性,解决缺乏移植前样本病例嵌合状态的检测问题.方法:对2例接受异基因造血干细胞移植术病例,采集供者、受者移植术前外周血、受者移植术后外周血和口腔粘膜拭子,以PCR-STR技术对各样本进行DNA分析,对比移植前后基因分型变化判断嵌合状态,比较受者移植术前外周血和移植术后口腔粘膜拭子基因分型的异同.结果:2病例移植后受者外周血的PCR-STR基因分型与供者一致,呈完全的供者嵌合状态;受者移植后的口腔粘膜细胞基因分型与移植前外周血的基因分型一致.结论:口腔粘膜细胞的DNA样本可以代表受者移植前的基因状态,在实践中可以用口腔粘膜细胞代替移植前的受者样本进行嵌合状态的检测.

同种异基因造血干细胞移植后血细胞嵌合状态动态检测的临床意义

自1971年Thomas等首次报告同种异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）能够使白血病患者长期存活以来,allo-HSCT已成为恶性或难治性血液病最有效的根治性治疗方法。据国际骨髓移植登记处（IBMTR）和欧洲骨髓移植协作组（EBMT）的统计结果，急性白血病第一次完全缓解（CR1）期的患者接受人类白细胞抗原（HLA）全相合同胞移植后1年的无病生存率达61％～70％，

异基因造血干细胞移植后嵌合状态的追踪监测

目的:应用荧光标记短串联重复序列(STR)复合扩增技术,探讨多个STR基因座在异基因造血干细胞移植后嵌合体状态评估中的作用.方法:对31例移植后患者进行追踪检验,分别PCR复合扩增各病例组常染色体9个STR基因座和Amelogenin基因座,扩增产物经DNA自动分析仪分离后,GeneScan扫描,Genotyper分型.结果:7例患者血由第1次检验结果与供者STR分型一致变为混合型,4例死亡,3例复发;4例患者血由第1次检验结果与供者一致变为受者自身型,均死亡;1例患者血由混合型变为与供者STR分型一致,无复发;1例患者血两次检验均为混合型,已死亡;其余18例患者血均与供者血STR分型一致,其中16例目前预后较好,2例已死亡.结论:复合扩增STR基因座具有较高的个体识别力,检测灵敏、准确、快速,在对异基因造血干细胞移植患者的植入情况进行动态检测的研究中有用,对移植物植入或被排斥、疾病复发均有预警作用,同时必须结合临床症状,及时地进行STR检测,以便于早期实施临床干预治疗.

复合组织移植嵌合状态的研究进展

嵌合状态(chimerism)是指接受了同种异体移植的受体内可检测到供者的细胞或遗传物质的现象。同时,移植的组织内很多细胞如巨噬细胞则被宿主细胞代替,形成一种互相嵌合的状态。从Billimgham(1953)等首先发现造血细胞嵌合状态能够诱导供体特异性耐受以来,在啮齿类和灵长类动物模型中发展了许多不同的实验方案。通过嵌合状态诱导免疫耐受有许多的优点,包括其可靠性与平稳性。这些特点对于器官和组织移植的受体来说具有临床应用的吸引力。本文将从几个方面讨沦这个问题。 研究历史 Billimgham(1953)等首先发现造血细胞嵌合状态能够诱导供体特异性耐受,他们通过孵育造血组织在胚胎小鼠中成功诱导了皮肤异体移植的免疫耐受并提出假说:造血细胞嵌合状态可能是克服MHC障碍的免疫耐受的最基本的机制。

肾移植术后微嵌合状态与免疫耐受的关系

诱导免疫耐受控制移植物排斥一直是器官移植界所面临的一大难题,故耐受诱导方案的研究成为移植免疫研究的焦点;自1969年微嵌合学说提出以来,引起了移植界的广泛兴趣,但至今仍存在很多争议。本文就微嵌合学说及其与免疫耐受关系的研究作一介绍。

造血干细胞移植后嵌合状态的检测及定量研究进展

异基因造血干细胞移植后嵌合状态的形式有三种:完全供者嵌和状态、混合嵌和状态及完全受者型。微卫星DNA等分子学检测嵌和状态的方法都是利用人类基因组中具有高度多态性的DNA遗传标记来区分个体。定量检测嵌合状态的方法有:凝胶成像密度扫描、DNA测序仪和基因扫描软件程序、多重PCR扩增微卫星标志、高效液相色谱及实时定量PCR等。

用PCR-VNTR法检测CML异基因外周血干细胞移植后动态嵌合状态的作用

目的明确移植后造血细胞来源及微小残留病,为临床治疗提供依据。方法对18例异基因外周血干细胞移植者,在移植后不同时间检测人类两个高度可变的串联重复序列(Viariable number tandem repeated sequences,VNTR),动态观察分子嵌合状态,并监测染色体核型及标志基因。结果不同引物供受者的检出率有明显差异。单用马利兰(Bu)预处理的混合嵌合(Mix chimerism,MC)的发生率在移植后+14天较Bu加环磷酰胺(CY)高预处理的。移植后6个月持续MC者复发率可达20%。1例完全嵌合(Complete chimerism,CC)患者移植后6个月重新出现受者带型,后复发。在指导临床治疗方面,VNTR优于染色体核型及标志基因。13例持续MC者减量或停用免疫抑制剂,11例(84%)转为CC。结论应用PCR-VNTR动态检测移植后嵌合状态,可以评估预处理方案、预测高危复发并指导移植后治疗。

微卫星估价异基因外周血干细胞移植后嵌合状态

目的 用检测 5个四核苷酸重复序列了解异基因干细胞移植后嵌合状态以及预后的关系。方法 PCR扩增12 0份正常人和 10对移植供受者基因组DNA ,据所得片段大小确定 5个微卫星在人群中的多态性及移植后嵌合状态。结果 各微卫星均发现 7个以上等位基因 (7～ 12 )多态性 ,杂合度仅CSF1PO低于 70 %。移植患者中完全嵌合状态 (CC) 8例 ,1例死于GVHD ;混合嵌合状态 (MC) 1例 ,死亡 ;受者型 1例 ,死亡。结论 5个四核苷酸重复序列点多态性可成功检测大多数嵌合状态。

Hurler综合征时供体混合嵌合状态和低水平艾杜糖醛酸苷酶可能对神经发育起保护作用

Hurler syndrome is a lysosomal storage disease resulting in fatal cardiac or neurologic sequelae unless alpha-iduronid-ase production is reconstituted with hematopoietic stem cell transplantation. We report on a 4- year, 6- month-old boy with mixed donor chimerism and low enzyme levels but a normal neurodevelopmental trajectory.

嵌合状态分析在异基因造血干细胞移植中的应用现状

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前多种血液系统恶性疾病的唯一治愈方法,但其移植成功率受较多因素影响,如移植物抗宿主病(GVHD)、疾病复发及严重感染等。而移植物植入状态对GVHD和复发的早期预测和抢先干预尤为重要。嵌合状态分析作为检测allo-HSCT后移植物植入状态的常用方法,可及时、有效监测疾病状态,并且为后续治疗策略提供指导。笔者拟就嵌合状态分析方法及其作用、细胞谱系特异性嵌合状态分析,以及嵌合状态分析在非恶性疾病(NMD)中的应用等方面的研究现状进行阐述,旨在为提高allo-HSCT成功率提供参考。

异基因造血干细胞移植后细胞嵌合状态动态监测的临床意义

目的研究异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后各系细胞嵌合状态与移植物植人、急性移植物抗宿主病（aGVHD）、移植物被排斥和疾病复发的关系。方法对65例患者进行allo—HSCT，存移植后定期采集所有患者的外周m和骨髓。用流式细胞术分选了65例患者的CD3^＋T淋巴细胞，52例分选了CD3^-CD56^＋CD16^＋NK细胞，32例分选了CD15^＋粒细胞，20例分选了CD19^＋B淋巴细胞。进行PCR扩增短串联重复序列检测各系细胞嵌合状态。结果移植后NK细胞早期植入比例（55．5％）最高，T细胞最晚（＋21d）达到完全供者嵌合状态。＋7dT淋巴细胞供者嵌合比例（DC）≥70％和＋14dT淋巴细胞DC／〉95％属aGVHD发生的高危患者。除急性淋巴细胞白血病外，出现移植物被排斥的分子生物学征象者和疾病复发者，都以T淋巴细胞供者嵌合状态下降为主。在过继免疫治疗中，动态检测嵌合状态可以判断疗效和指导进一步的治疗。结论allo—HSCT后T淋巴细胞嵌合状态动态检测可以早期预测发生aGVHD的高危患者、判断移植物植入、发现移植物被排斥和疾病复发并指导免疫渊节治疗的时机和疗效。

成年大鼠联体诱导的移植耐受与嵌合状态相关性的研究

目的 将异基因成年大鼠联体共生 (parabiosis)以诱导相互特异的移植耐受 ,探讨嵌合体与耐受的关系。方法 联体前后低剂量环磷酰胺 (CP ,l0 0mg/kg)腹腔注射 ,观察联体大鼠存活时间。分别于联体 5、15、45d时将联体大鼠分开 ,并相互植皮 ,观察皮肤存活情况 ,并在上述时间点以流式细胞仪检测联体分开后大鼠胸腺、脾脏中供体来源细胞的嵌合状态。在联体 15d时检测同种异型混合淋巴细胞反应 (MLR)、迟发性超敏反应 (DTH)。结果 实验组大鼠联体存活时间 (中位数 =6 3.5d ,P =0 .0 0 0 5 )明显延长。DA、LEW大鼠于联体 15d可诱导较稳定的皮肤移植耐受。嵌合状态在移植耐受诱导期 (15d内 )呈明显增长 ,而在耐受维持期 (15d后 )嵌合状态无明显变化。联体 15dMLR、DTH呈供体特异性降低。结论 联体共生可诱导DA、LEW大鼠相互特异的移植耐受 ,嵌合体与耐受状态有明显的相关性。

游离缘指甲DNA检测异基因造血干细胞移植后供受者嵌合状态的变化

目的 探讨异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）后用患者指甲游离缘标本进行短片段重复序列（short tandem repeat,STR）基因分型和供受者嵌合率检测的适用性,并观察移植后患者指甲中供受者嵌合状态变化.方法 选取2009年7月至2011年9月在北京市道培医院行allo-HSCT的25例患者及25名供者.采集患者及其供者外周血、骨髓、指甲游离缘和口腔黏膜标本.提取标本中基因组DNA,进行15个STR位点的基因分型和嵌合状态分析.将患者分为2组：第1组包括12例患者,在接受allo-HSCT后1个月内分别同时采集患者的指甲游离缘标本和口腔黏膜标本,并做嵌合状态的比较；第2组包括13例患者,观察患者行allo-HSCT后3个月指甲标本中的嵌合状态,并对其中3例患者进行多次指甲标本采集和嵌合状态检测.结果 在第1组12例患者中,指甲标本均检测为患者自身的STR基因型；在4份口腔黏膜标本中检测到供受者混合嵌合状态,供者STR基因型所占比例分别为16.7％、32.1％、35.8％和60.7％.在第2组13例患者中,5例患者存在供受者细胞的混合嵌合状态,即受者指甲中出现供者的STR基因型,嵌合率在6.7％至82.6％之间.3例行allo-HSCT后多次检测指甲嵌合率的患者中,1例始终未检测到供者基因型的嵌合,另2例患者中检测到持续存在的供者基因型的嵌合.结论 移植后1个月内采集的指甲游离缘标本可用于患者STR基因型鉴定和供受者嵌合率分析,优于口腔黏膜标本.供者的移植物中具有可以分化成为皮肤组织的细胞,部分患者移植后皮肤中可长期存在供者来源细胞的嵌合状态.