香港海鸥形菌多重PCR及嵌合荧光PCR检测方法的建立与应用

目的建立香港海鸥形菌(Laribacer hongkongensis,LH)的多重PCR(multi-PCR)及嵌合荧光法(SYBR Green I)PCR检测方法,并对其在临床及环境微生物方面的应用前景进行评价。方法通过对62株香港海鸥形菌16SRNA基因和16S-23SrRNA基因间隔区(16-23SrRNA intergenic spacer region,ISR)进行PCR扩增和多序列比对,设计两对特异性引物,建立多重PCR体系,用15种细菌性腹泻标准菌株及临床菌株进行PCR特异性和敏感性检验;并在此基础上针对两对引物分别用嵌合荧光PCR法进行浓度梯度检测,以确定最低检测限。结果香港海鸥形菌多重PCR法特异性为100%,最低检出限为5×103 CFU/mL菌液;而嵌合荧光PCR法两对引物的最低检出限均达到5×102 CFU/mL菌液。结论该法的建立为临床及环境微生物学提供了一种快速和灵敏的香港海鸥形菌检测手段。

腺病毒荧光定量PCR快速检测方法建立

目的建立腺病毒双链嵌合荧光染色(SYBR Green)实时定量PCR快速检测方法,用于腺病毒感染的早期诊断及病毒核酸定量分析。方法建立并优化SYBR Green荧光定量PCR反应体系和反应条件,评价该方法的特异性、灵敏度和重复性,同时进行熔解曲线分析,构建定量分析模型,并对84份临床样本进行检测。结果该方法与其他呼吸道病毒无交叉反应,检测灵敏度102拷贝/μL,熔解曲线显示单一的峰,熔解温度为(84.9±0.1)℃,临床样本检测阳性率达30.95%。结论建立了快速、敏感、特异的腺病毒SYSR Green荧光定量PCR检测方法,适用于腺病毒的早期快速诊断。

杆状病毒在家蚕基因寻靶中的应用

家蚕丝素轻链基因被克隆时,把绿色荧光蛋白基因(GFP)插入外显子7,用这个轻链-绿色荧光蛋白嵌合基因代替苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的多角体蛋白基因。这个重组病毒被用来在家蚕基因组轻链区域寻靶轻链-绿色荧光蛋白基因。