嵌合抗CD_(20)抗体Fab片段在大肠杆菌中表达及活性鉴定

目的 :构建抗CD2 0 嵌合抗体Fab片段表达载体 ,并在大肠杆菌中进行高效可溶性分泌表达。方法 :利用PCR方法从抗CD2 0 单链抗体 (ScFv)表达载体上扩增抗CD2 0 抗体轻链可变区基因 (VL)、重链可变区基因 (VH) ,然后将VH、VL 基因重组到Fab表达载体pYZF中 ,构建抗CD2 0 Fab表达载体pYZF1cd2 0 ,并在 2 7C7菌中高效表这。结果 :经Fab表达载体转化的 2 7C7菌株 ,进行表达培养 ,经分离纯化获得具有CD2 0 特异结合活性的Fab片段 ,竞争性免疫荧光抑制实验表明 ,表达产物Fab片段能竞争性抑制鼠源性抗CD2 0 抗体HI47和CD2 0 表达细胞Raji细胞结合。结论 :在大肠杆菌中高效可溶性分泌表达有活性的抗CD2 0 嵌合抗体Fab片段。

纤维蛋白单抗SZ-58嵌合Fab片段在大肠杆菌中的表达

为减少鼠源单抗的免疫原性，降低其分子量，应用基因重组技术将纤维蛋白单抗ＳＺ－５８可变区基因与人ＩｇＧ１恒定区基因Ｃ_Ｈ１、Ｃｋ进行拼接、扩增。将扩增后的ＳＺ－５８嵌合Ｆａｂ基因克隆至噬菌体质粒，并导入大肠杆菌中进行表达。表达的嵌合Ｆａｂ片段为可溶性。放免检测其在表达上清中的含量约为２００μｇ／Ｌ，免疫印迹电泳证实ＳＺ－５８嵌合Ｆａｂ片段能特异地与纤维蛋白Ｄ－Ｄｉｍｅｒ结合。