抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体在大肠杆菌中的高效分泌表达

构建抗CD2 0嵌合抗体片段F(ab′) 2 突变体 ,研究其在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的生物学活性。采用PCR法构建抗CD2 0嵌合抗体片段F(ab′) 2 突变体 ,并用双脱氧终止法测定DNA序列 ;采用 19L发酵罐高密度发酵抗CD2 0嵌合抗体片段F(ab′) 2 突变体 ,采用亲和色谱和分子筛色谱法纯化表达产物 ,并用SDS PAGE和薄层激光扫描鉴定纯化产物 ;采用活细胞间接免疫荧光法测定纯化产物与靶细胞的结合活性 ;MTT法测定纯化产物对Raji细胞的生长抑制作用 ,并研究其作用机理。DNA序列测定结果表明 ,抗CD2 0嵌合抗体片段F(ab′) 2 突变体已成功构建 ,表达可溶性产物的产量达 36 0mg L ,具有与Raji细胞 (CD2 0 + )结合的活性 ,并抑制Raji细胞的生长 ,其作用机理为诱导Raji细胞凋亡。

抗CD20嵌和抗体的体外生物学活性研究

c8F6是我们实验室制备的一株抗CD20的鼠/人嵌合抗体。本研究对c8F6的体外生物学活性进行了测定并与临床上使用的CD20抗体Rituximab进行了比较。实验结果表明,c8F6具有与Rituximab相似的抗原结合活性,抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC),肿瘤细胞凋亡诱导活性及肿瘤细胞生长抑制作用。但c8F6的补体依赖性细胞毒作用(CDC)明显强于Rituximab,在10μg/ml浓度时c8F6对Daudi细胞和Raji细胞的杀伤率分别为91%和86%,而Rituximab的杀伤率分别为65%(Daudi细胞)和32%(Raji细胞)。研究结果提示,c8F6可能发展成为一个比Rituximab更为有效的用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤的抗体制剂。