川射干鸢尾苷元磺酸钠体外抗病毒作用研究

目的:研究川射干鸢尾苷元磺酸钠体外抗柯萨奇病毒和副流感病毒的效果,为抗病毒新药研发提供依据。方法:建立柯萨奇病毒感染Vero细胞、副流感病毒感染LLC-MK2细胞模型,以细胞增殖检测(CCK-8)法或细胞病变效应(CPE)法作为检测方法,了解药物对细胞的毒性以及体外抗病毒的效果,实验中以利巴韦林作为对照药物。结果:川射干鸢尾苷元磺酸钠对Vero细胞和LLC-MK2细胞的TC50浓度分别为2157.50μg/ml和1577.29μg/ml,川射干鸢尾苷元磺酸钠能明显抑制柯萨奇病毒和副流感病毒所致的细胞病变,IC50分别为114.05μg/ml和312.50μg/ml,治疗指数(TI)分别为18.92和5.05。结论:在体外抗病毒实验中,川射干鸢尾苷元磺酸钠显示出抑制柯萨奇病毒和副流感病毒的作用。

高效液相色谱法测定川射干鸢尾苷元磺酸钠及其制剂泰克吉宁注射液含量和有关物质

建立高效液相色谱法测定鸢尾苷元磺酸钠(4′,5,7-三羟基-6-甲氧基异黄酮-5′-磺酸钠)及其制剂泰克吉宁注射液的含量及有关物质。采用C18色谱柱(150×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-5%醋酸水(80:20),流速为1.0mL/min,检测波长为263nm。鸢尾苷元磺酸钠在11～100μg/mL范围内线性关系良好,回归方程Y=43.3609X-1.5973(r=0.99998),平均回收率为99.77%(n=9)。最低检测限为0.052μg/mL,与有关物质分离良好。本法快速、简便、准确,专属性强。

鸢尾苷元磺酸钠肌内注射液健康人体药动学研究

目的：研究鸢尾苷元磺酸钠肌内注射液在健康志愿受试者体内的药动学。方法：28例健康志愿者分为A和B两组,每组14例。A组受试者采用双周期自身交叉试验设计,单次肌内注射50 mg和200mg两种剂量的鸢尾苷元磺酸钠注射液,B组受试者单次肌内注射100 mg鸢尾苷元磺酸钠注射液,用HPLC-UV法测定人血浆中鸢尾苷元磺酸钠浓度,计算药动学参数。结果：单次肌内注射鸢尾苷元磺酸钠50,100和200 mg后,Cmax分别为（1.19±0.47）,（2.53±0.82）和（5.16±2.03）mg·L^-1;AUC0-240 m in分别为（77.74±8.00）,（184.00±34.67）和（363.06±68.97）mg.m in·L^-1;t1/2β分别为（41±20）,（36±14）和（40±19）m in。结论：鸢尾苷元磺酸钠注射液的体内过程符合二室开放模型,在50-200 mg剂量范围内鸢尾苷元磺酸钠在健康志愿者体内呈线性动力学特征。

RP-HPLC法测定川射干药材中鸢尾苷元的含量

目的:建立以RP-HPLC法测定川射干鸢尾苷元含量的方法。方法:采用C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%醋酸水(45∶55),流速为1.0mL.min-1,检测波长为266nm。结果:鸢尾苷元在32～320ng范围内线性关系良好;回归方程为Y=6.0874X+7.5423(r=0.9998),平均回收率为99.61%(n=6)。结论:本方法灵敏、简便、准确,可用于川射干的质量检测。

川射干总异黄酮苷元有效部位的制备工艺研究

目的:研究川射干总异黄酮苷元有效部位的工艺条件。方法:正交试验确定大孔吸附树脂吸附总异黄酮吸附条件,乙醇水溶液梯度洗脱以分离苷与苷元,酸水解苷及大孔吸附树脂除酸。结果:总异黄酮苷元的含量在59%～63%之间;得率为3.59%。结论:该工艺简便、合理、可行,具工业化生产价值。

川射干与射干药材质量比较分析

目的了解市售川射干与射干药材质量。方法HPLC法测定川射干与射干药材中射干苷及次野鸢尾黄素的含量。结果川射干药材中射干苷含量均高于3.6%;射干药材中次野鸢尾黄素含量高于0.1%的样品占91%。结论西南、华南地区川射干与射干药材基本符合药典要求。

鸢尾苷元磺酸钠对柯萨奇B3型病毒诱导细胞固有免疫的初步研究

柯萨奇B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)病毒目前仍严重危害人类健康,目前没有批准的用于CVB3治疗的特效药,亟需开发新的抗CVB3药物。鸢尾苷元磺酸钠(Tectorigenin sodium sulfonate,TSS)是中药川射干化学成分鸢尾苷元的修饰物,本研究应用细胞感染模型评估了TSS体外抗CVB3作用。实验中,以CVB3感染的HT-29细胞为体外模型,在最大无毒浓度(TC0)情况下观察不同浓度药物作用于HT-29细胞后,在72h收集细胞,采用相对荧光定量RT-PCR法检测细胞中CVB3病毒核酸量,TLR3、TRIF mRNA表达水平;收集上清液,采用ELISA法测定上清液NF-κB,TNF-α、IL-6、IFN-β含量。结果显示TSS对HT-29细胞的TC0为15.625μg/mL。与模型组比较,15.625μg/mL剂量的鸢尾苷元磺酸钠能有效增加HT-29细胞活性,降低CVB3病毒滴度(P<0.001),能明显降低细胞内转导和转录活化因子TLR3、TRIF、NF-κB的表达水平(P<0.05),降低炎症因子TNF-α、IL-6、IFN-β的含量(P<0.05)。以上结果表明TSS体外具有显著的抗柯萨奇B3病毒作用,其机制可能是通过调节TLR3/NF-κB免疫信号转导通路而发挥抗病毒作用。

一测多评法评价川射干配方颗粒的质量

目的建立同时测定川射干配方颗粒中射干苷、野鸢尾苷、鸢尾黄素、鸢尾甲黄素A、鸢尾甲黄素B 5种成分含量的一测多评法(quantitative analysis of multi-components with single-marker,QAMS),并验证该方法在川射干配方颗粒质量控制中应用的可行性。方法以射干苷为内参物,确定其他4种成分的相对校正因子(f_(k/s));同时采用外标法(external standard method,ESM)测定各成分的含量,并比较QAMS计算值与实测值的差异,验证QAMS的可行性和准确性。结果川射干配方颗粒中野鸢尾苷、鸢尾黄素、鸢尾甲黄素A、鸢尾甲黄素B的f_(k/s)分别为0.865、1.359、1.209、1.158;4种成分QAMS计算值与实测值之间无明显差异。结论QAMS能准确地测定川射干配方颗粒中4种化学成分的含量,可用于川射干配方颗粒多指标质量控制。

射干、川射干、白射干薄层色谱及含量测定研究

采用射干甙、鸢尾甙、射干甙元及次野鸢尾黄素作对照品，在含０．５％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶ＨＦ２５４薄层板上，以氯仿—甲醇—甲酸为展开剂，用岛津ＣＳ—９３０薄层扫描仪，对射干、川射干、白射干作了薄层色谱、光谱扫描、色谱扫描的定性比较，以及通过方法学实验研究，拟订了含量测定方法，并对主要成分射干甙作含量测定比较。结果：白射干与射干的薄层色谱近似，川射干与射干的薄层色谱有较明显的差异；３种射干中的射干甙含量有明显的差异，同一品种，也因产地不同而异，白射干含０．３７％～０．５６％，射干含０．８１％～２．００％，川射干含３．７７％～５．６４％。

HPLC法测定不同产地川射干中6个活性成分的含量

目的:比较不同产地川射干中射干苷、鸢尾甲苷A、鸢尾甲苷B、野鸢尾苷、野鸢尾黄素和次野鸢尾黄素6个活性成分的含量,为该药材资源的综合开发利用提供科学依据。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Extend C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-含0.3%甲基-β-环糊精的0.2%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 ml·min-1,检测波长为265nm,柱温30℃。结果:在上述条件下,射干苷、鸢尾甲苷A、鸢尾甲苷B、野鸢尾苷、野鸢尾黄素和次野鸢尾黄素平均回收率分别为100.3%,98.8%,98.1%,101.0%,101.3%,100.8%,RSD分别为0.70%,1.53%,0.39%,1.57%,1.41%,0.98%(n=6);进样量分别在0.040~1.213μg,0.010~0.306μg,0.017~0.498μg,0.006~0.171μg,0.006~0.169μg,0.003~0.090μg范围内线性关系良好(r≥0.999 4);25批样品中6个成分的含量分别为5.923 5~43.514 4 mg·g-1,1.385 6~9.253 1 mg·g-1,3.526 2~16.028 5 mg·g-1,0.985 6~7.654 1 mg·g-1,2.965 6~12.354 1 mg·g-1,0.856 2~5.146 5 mg·g-1。结论:本试验所建立的方法可为川射干的质量控制提供科学的依据。

中药射干毒性成分分析

研究中药射干[Belamcanda chinensis(L.)DC]的化合物成分。用70%乙醇提取,减压浓缩至浸膏,水溶解后得滤液和沉淀,滤液由大孔吸附树脂AB-8纯化,沉淀由乙酸乙酯溶解,用聚酰胺薄层层析、Sephadex LH-20等方法进一步提纯各组分,利用核磁共振鉴定结构。结果表明:该射干经分离得到5个化合物,分别为野鸢尾黄素(irisflorentin)、鸢尾苷元(tectorigenin)、鸢尾苷(tectoridin)、草夹竹桃甙(androsin)、鸢尾甲苷A(iristectorin A),其中草夹竹桃甙为毒性成分,首次在射干中发现。

水溶性尼泊尔鸢尾异黄酮磺化物的合成及药理活性研究

以尼泊尔鸢尾苷元(5,7-二羟基-4,′6-二甲氧基异黄酮)为原料通过磺化反应合成了水溶性化合物尼泊尔鸢尾异黄酮-3′-磺酸钠(5,7-二羟基-4,′6-二甲氧基异黄酮-3′-磺酸钠),并采用IR,NMR及元素分析法对其结构进行表征。同时进行了抗缺氧活性实验,结果表明尼泊尔鸢尾异黄酮-3′-磺酸钠磺酸钠的水溶性、抗缺氧生理活性优于尼泊尔鸢尾苷元。

山东产射干化学成分的提取、分离与鉴别

目的研究山东产射干的化学成分。方法射干根茎乙醇提取物乙醚溶解部分的硫酸钠提取部分分得4个化合物,进行理化和光谱分析。结果与结论成分Ⅲ鉴定为5,7,4'-三羟基-6,3'-二甲氧基异黄酮,成分Ⅳ为野鸢尾苷元。

HPLC法测定川射干中鸢尾黄酮苷的含量

目的：建立以高效液相色谱法测定川射干中鸢尾黄酮苷含量的方法。方法：色谱柱为Diamond ODS C18（150mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-0．5％醋酸溶液（3：7），检测波长为265nm，流速为0．8mL·min^-1。结果：鸢尾黄酮苷进样量在0．0792～0．3960μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系；平均回收率为99．80％，RSD：1．09％（n=6）。结论：本方法灵敏、简便、准确，可用于川射干的质量控制。

鸢尾苷元的大鼠在体肠吸收研究

目的 研究鸢尾苷元在大鼠肠道内的吸收规律。方法 采用大鼠在体小肠循环灌流的方法,利用紫外分光光度法和HPLC法分别测定循环液中酚红和鸢尾苷元的浓度。研究鸢尾苷元在大鼠全肠段及十二指肠、空肠、回肠、结肠中的吸收情况。结果 鸢尾苷元可在大鼠小肠中吸收,低、中、高浓度的吸收速率常数Ka分别为0.0997±0.0177、0.1330±0.0190、0.1513±0.0134 h^（-1）;鸢尾苷元在十二指肠、空肠、回肠、结肠的吸收速率常数Ka分别为0.0657±0.0233、0.0576±9.6×10^（-3）、0.1778±0.0879、0.0809±0.0254 h^（-1）。按吸收速率常数由高到低排列为回肠〉结肠〉十二指肠≈空肠。结论 鸢尾苷元在大鼠小肠全段有不同程度的吸收,回肠可能为其主要吸收部位;鸢尾苷元在大鼠小肠中的吸收机制并非单纯的被动扩散,可能存在着载体介导的转运。

不同产地川射干中异黄酮成分含量比较研究

目的:分析测定和对比不同产地川射干中射干苷、鸢尾甲苷A、鸢尾甲苷B、野鸢尾苷、鸢尾苷元、鸢尾甲黄素A、鸢尾甲黄素B 7个异黄酮成分,建立快速测定其含量的方法。方法:采用HPLC法测定7个异黄酮成分含量,色谱柱为Kromasil C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.5%醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1 m L·min^(-1),柱温35℃,检测波长266 nm;并以检测出的含量为指标,使用SPSS 19.0软件对15批样品进行聚类分析。结果:射干苷、鸢尾甲苷A、鸢尾甲苷B、野鸢尾苷、鸢尾苷元、鸢尾甲黄素A、鸢尾甲黄素B色谱峰分离良好;进样量分别在0.024 8~0.992、0.003 6~0.144、0.005 9~0.236、0.004 4~0.176、0.016 2~0.648、0.005 5~0.22、0.005 7~0.228μg范围内线性关系良好;平均加样回收率(n=6)分别为99.7%、97.7%、98.2%、98.2%、98.8%、103.0%、103.6%,RSD分别为0.57%、2.0%、1.3%、1.1%、0.81%、2.2%、2.3%。15批样品中上述7个成分的含量分别为33.27~58.63、0.62~6.87、1.36~9.95、0.79~7.25、5.42~24.65、0.78~4.56、0.94~8.63 mg·g^(-1);聚类分析结果显示15批样品可分为三大类,反映不同产地川射干药材成分的区别。结论:所建立的川射干HPLC含量测定方法可用于川射干的质量控制,聚类分析方法也可为川射干种植、栽培和质量评价提供依据。

野鸢尾苷的制备及其对小鼠离体小肠平滑肌调节作用研究

目的:从中药川射干中分离制备野鸢尾苷单体,初步探究野鸢尾苷对小鼠离体小肠平滑肌调节作用。方法:采用多溶剂萃取法制备野鸢尾苷,采用改良的Ellman比色法探究野鸢尾苷对乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响;并结合采用离体小肠平滑肌实验方法,取小鼠小肠平滑肌,在K⁃H液中制备小肠平滑肌环,通过BL⁃420S生物机能实验系统测定其张力的变化,观察野鸢尾苷对小鼠离体小肠平滑肌静息张力及对新斯的明、碘解磷定诱导小肠平滑肌收缩的影响。结果:多溶剂萃取法所得的野鸢尾苷单体,经HPLC峰面积归一化法计算其纯度>98%;野鸢尾苷对AChE活性具有抑制作用,其IC_(50)为4.09 mg·mL^(-1),且呈剂量依赖关系;野鸢尾苷(0.014~4.604 mg·mL^(-1))对正常小鼠离体小肠收缩有明显的兴奋作用,且抑制作用呈剂量依赖性,野鸢尾苷对胆碱酯酶复活剂碘解磷定引起小肠收缩抑制有显著性的拮抗作用(P<0.05),对胆碱酯酶抑制剂新斯的明促进小肠运动没有显著性协同作用(P>0.05)。结论:多溶剂萃取法是一种简单、高效的分离制备川射干中野鸢尾苷的方法;野鸢尾苷具有抑制AChE的拟胆碱作用,可促进小肠收缩运动,有望成为AChE抑制剂的候选物。