川楝子醇提物抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖的作用机制研究

目的:探究川楝子醇提物抑制急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞增殖的作用机制。方法:选取人急性淋巴白血病细胞T淋巴细胞(CCRF-CEM)细胞株及无特定病原体(SPF)级6周SD品种的雌性大鼠12只,以不同浓度梯度川楝子醇提物作用24 h、48 h、72 h,观察其对CCRF-CEM细胞的抑制及凋亡的影响。结果:16 mg/L、80 mg/L、400 mg/L川楝子醇提物作用ALL细胞的不同时间具有明显的抗增殖作用。相较于对照组,于同一时间点,不同质量川楝子醇提物的吸光度值明显不同,且随着质量的增加吸光度值逐渐降低(P<0.05)。与对照组比较,16 mg/L、80 mg/L、400 mg/L川楝子醇提物作用外周血淋巴细胞同一时间段的给药吸光度值比较差异无统计学意义(P>0.05)。提示不同质量浓度对外周血淋巴细胞无明显的不良反应。于同一时间点,与对照组比较,不同质量浓度川楝子提取物的B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)基因、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因、P53基因表达明显不同(P<0.05);Bax基因随质量浓度的增加而增加,Bcl-2基因表达随质量浓度的增加而降低,24 h 400 mg/L川楝子醇提物的P53基因表达达到最高,而作用于ALL细胞48 h后,基因表达呈上升趋势(P<0.05)。结论:川楝子醇提物可通过线粒体介导抑制白血病CCRF-CEM细胞增殖,并且呈浓度及时间的依赖性。

川楝子醇提物通过线粒体途径诱导白血病CEM细胞的凋亡

背景:苦寒中药川楝子具有小毒,对生长环境要求不高,在实体瘤中能显著抑制肿瘤细胞的增殖,但在血液肿瘤中报道较少,基于前期研究结果,并结合中医“以毒攻毒”理论探讨其主要成分川楝素抗急性淋巴细胞白血病的作用机制。目的:探究川楝子醇提物抑制白血病CEM细胞增殖的作用机制。方法:人急性T淋巴细胞白血病CEM细胞培养至对数生长期,经5种浓度梯度川楝子醇提物作用24,48,72 h后,通过MTT实验求得各组细胞抑制率。考虑到受渗透压影响并保证后续实验的开展,筛选出川楝子醇提物低、中、高质量浓度(16,80,400 mg/L),作用大鼠外周血淋巴细胞24,48,72 h,采用MTT实验和吉姆萨-瑞氏染色探究其毒性作用,通过Hoechst 33258染色观察CEM细胞凋亡小体,RT-qPCR实验检测川楝子醇提物作用CEM细胞24,48 h后p53、Bcl-2、Bax、Cyt-C、Caspase-9和Caspase-3基因转录情况,Western blot实验检测川楝子醇提物作用CEM细胞24,48 h后p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与结论:①16,80,400 mg/L川楝子醇提物对正常淋巴细胞无明显抑制作用;②16,80,400 mg/L川楝子醇提物作用CEM细胞经Hoechst 33258染色能看到蓝色亮光的凋亡小体;③与对照组比较,80,400 mg/L川楝子醇提物作用CEM细胞后能提高p53、Bax、Cyt-C、Caspase-9和Caspase-3基因转录水平(P<0.05或P<0.01),降低Bcl-2基因转录水平(P<0.05或P<0.01),尤其以48 h较为突出;④给药24 h后,相较于对照组,16,80,400 mg/L川楝子醇提物组Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01),400 mg/L川楝子醇提物组p53蛋白表达升高(P<0.05),给药48 h后,相较于对照组,80,400 mg/L川楝子醇提物组p53蛋白表达明显上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),Bax蛋白表达则显著升高(P<0.05或P<0.01);⑤结果表明,川楝子醇提物能显著抑制白血病CEM细胞的增殖,在一定范围内呈现浓度和时间依赖性,其机制可能是通过诱导线粒体介导的细胞凋亡途径来实现的。