基于人脐静脉内皮细胞的OGD/R模型研究当归-川芎药对中7个活性成分对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路的影响

目的探讨当归-川芎药对中7个活性成分(绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、丁烯基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、藁本内酯)对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白及其上下游血管活性物质、黏附因子和炎症因子的调控作用。方法构建人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,采用细胞增殖试剂盒(CCK-8法)检测细胞活力,探索7个成分的最佳造模时间;通过检测乳酸脱氢酶(LDH)释放探索最佳给药浓度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测7个成分对VEGF、VCAM-1、PAI-1、NF-κB、IL-1和IL-6表达的影响;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测7个成分对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白mRNA表达的影响。结果HUVEC氧糖剥夺6 h再复氧为最佳造模时间。高剂量绿原酸组、阿魏酸组、洋川芎内酯H组,低、中剂量丁烯基苯酞组,中、高剂量洋川芎内酯A、藁本内酯组显著降低LDH漏出率(P<0.05,P<0.01);绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯H部分剂量组细胞中VEGF、ICAM-1、VCAM-1的表达显著降低,绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯H、藁本内酯部分剂量组细胞NF-κB的表达显著下降,绿原酸、咖啡酸、丁烯基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A部分剂量组细胞中IL-6的表达显著增加,绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯A部分剂量组细胞IL-1表达显著减少,阿魏酸、洋川芎内酯H部分剂量组细胞中PAI-1的表达量显著下降(P<0.05,P<0.01);绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、丁烯基苯酞和洋川芎内酯A部分剂量组细胞中ERK、VEGF、NF-κB、VEGFR2和MMP9的mRNA相对表达量显著下调,洋川芎内酯H和洋川芎内酯A部分剂量组细胞中AKT的mRNA相对表达量均显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论当归-川芎中的药效成分可能通过抑制黏附因子、炎症因子和VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白mRNA的表达,从而发挥抗缺血性中风的作用。

川芎-当归药对有效成分在缺血性脑卒中应用的研究进展

缺血性脑卒中的发病率、死亡率和致残率极高,其生理病理机制复杂,川芎-当归药对是临床治疗脑缺血卒中的常用药对,其功效物质基础或临床作用的有效活性成分主要包括川芎嗪、阿魏酸、藁本内酯、当归多糖等,能够影响中风缺血后的急性损伤,包括抗炎、抗氧化、抗凋亡、抑制钙超载等,亦能促进神经元再生和血管新生,体现了对缺血性脑卒中治疗的神经保护和恢复作用以及多靶点的治疗机制。

“当归-川芎”药对中阿魏酸在体肠吸收研究

考察"当归-川芎"药对中阿魏酸肠吸收动力学及影响因素.采用在体循环灌流法,应用HPLC测定肠吸收循环液中阿魏酸的质量浓度,UV法测定肠吸收循环液中即时酚红质量浓度.研究比较"当归-川芎"药对及单味药当归、川芎中阿魏酸的吸收情况,药对中阿魏酸的吸收在质量浓度、pH值及胃肠道方面均表现出较大的优越性.药对配伍影响其成分阿魏酸的体内吸收动力学行为.

当归-川芎药对对脑缺血/再灌注损伤大鼠JAK-STAT信号通路的影响

目的探讨当归-川芎药对(GX)对脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠JAK-STAT信号通路的调控作用。方法采用改良线栓法制备大鼠I/R损伤模型,24 h后,进行神经功能评分,检测脑梗死体积,观察脑病理变化,测定脑中MDA、SOD、GSH-Px、NF-κB、VEGF、ICAM-1和PAI-1表达;免疫组化法检测脑缺血半暗带区JAK2、p-STAT3、AKT和ERK1/2表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能损伤严重,脑梗死体积较大,脑组织出现坏死、水肿、炎症、神经细胞排列紊乱、细胞异常增大、空泡样改变、神经元减少等病理特征,MDA、NF-κB、VEGF、PAI-1和ICAM-1表达升高,GSH-Px和SOD表达降低。与模型组比较,GX高、中剂量组神经功能评分显著降低;GX高、中、低剂量组脑梗死体积减小,脑病理状态有一定改善,GSH-Px、SOD、AKT和ERK1/2表达上调,MDA、NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1、JAK2和p-STAT3表达下调。结论GX可通过调控JAK-STAT信号通路相关指标的表达发挥活血化瘀和脑保护作用。

当归-川芎药对改善脑缺血再灌注急性损伤的代谢组学机制分析

目的:运用代谢组学方法探究当归-川芎药对抗脑缺血再灌注急性损伤的可能机制。方法:60只雌性SD大鼠随机分成6组,每组10只。DG、CX和GX组按5倍临床剂量给药当归、川芎、当归-川芎药对;NM组按照20 mg/(kg·d)灌胃尼莫地平片混悬液;假手术组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水;连续灌胃7 d。除假手术组,其他5组于第7天采用线栓法制备大脑中动脉栓塞/再灌注(MCAO/R)损伤大鼠模型。再灌注24 h后,采集血清和脑组织标本,采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)技术进行非靶向代谢组学检测,利用非监督主成分分析(PCA)、有监督型偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物,并进行代谢通路注释。结果:假手术组和模型组血清和脑组织代谢轮廓存在明显差异(P<0.05),共筛选出与MCAO/R相关的嘌呤类、磷脂类、脂肪酸类等19个潜在生物标志物,其中血清生物标志物5个,脑组织生物标志物14个。与当归-川芎药对治疗MCAO/R损伤密切相关的生物标志物有11个,主要与抗坏血酸与醛酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢、甘油磷脂代谢、戊糖和葡糖醛酸的相互转化、柠檬酸循环等代谢通路有关。结论:当归-川芎药对可逆转脑缺血再灌注急性损伤大鼠的代谢紊乱,筛选出的内源性差异代谢物或可成为该药对治疗脑缺血再灌注急性损伤的潜在靶点。

当归-川芎药对治疗阿尔茨海默病的生物信息学、网络药理学分析

目的通过生物信息学、网络药理学探讨当归-川芎药对治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法检索GEO数据库,获得GSE5281基因表达谱,对AD进行差异表达基因筛选分析。应用中药系统药理学技术平台(TCMSP)数据库,筛选出药对中的潜在化学活性物质及相关靶点蛋白。借助Cytoscape(3.7.2)软件构建"药物-疾病-靶点"的调控网络,Bisogenet和CytoNCA构建蛋白互作网络(PPI),Bioconductor平台和R软件进行GO和KEGG富集分析,MOE软件对潜在化学活性物质和关键靶点进行分子对接。结果共筛选出9个化合物,涉及9个靶点,PPI核心基因为JUN、NR3C1、PPARG、RXRA、BCL2、BAX;GO生物功能分析包含661条富集,主要涉及蛋白结合、信号转导、突触后膜等;KEGG富集得到23条相关信号通路,主要涉及神经活性配体-受体相互作用通路、糖尿病并发症AGE-RAGE信号通路、细胞凋亡通路、非酒精性脂肪肝通路、PI3K-Akt信号通路等。Perlolirine可能对PPARG存在较好的结合能力,并且Perlolirine、Myricanone与RXRA也能形成较好结合。结论当归-川芎药对治疗AD体现了中药多成分、多靶点的特点,可实现对本病发生发展过程的调控。

基于网络药理学及分子对接发掘当归-川芎药对治疗肺栓塞的作用机制

目的:通过网络药理学及分子对接技术发掘当归-川芎药对治疗肺栓塞的作用机制。方法:TCMSP查询当归-川芎药对的药物成分,使用Swiss Target Prediction预测药物成分的作用靶点;GeneCards网站在线获取肺栓塞的疾病靶点,Venny 2.1在线获取药物和疾病交集靶点。使用STRING进行蛋白-蛋白相互作用(PPI)分析并使用Cytoscape构建网络图,利用Metascape进行GO和KEGG分析。使用Cytoscape软件构建“药物-靶点-通路”网络图。PubChem、PDB及PyMoL、AutoDock软件进行分子对接。建立肺栓塞大鼠动物模型,治疗组予以中药当归-川芎药对灌胃治疗2周,对照组予以等量水灌胃,酶联免疫法检测两组大鼠血清相应靶点蛋白表达。结果:当归-川芎药对中的8个有效成分通过多条通路直接作用于25个疾病靶点治疗肺栓塞,其中β-谷甾醇、豆甾烯醇、杨梅酮、芎萘呋内酯等是核心成分,半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、雌激素受体1(estrogen receptor alpha,ESR1)、肉瘤病毒17癌基因(JUN)、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)是核心靶点。GO富集分析结果显示,交集基因最可能相关的生物过程主要涉及细胞对形态发生、激素反应、有机环化合物的反应等,细胞组分主要涉及膜筏、膜微区、线粒体外膜等,分子功能主要涉及半胱氨酸内肽酶活性、泛素蛋白连接酶、蛋白二聚酶活性等。KEGG通路富集分析结果提示当归-川芎药对主要参与低氧诱导因子-1(HIF-1)、脂代谢、HCI、神经变性等信号通路。分子对接结果提示核心成分与重要靶点间的结合性较好。酶联免疫检测显示治疗组血清ESR1、JUN、PTGS2蛋白表达均高于对照组(t=-8.018、-10.370、-6.545,均P<0.01)。结论:当归-川芎主要通过调节HIF-1、脂代谢、HCI、神经变性等信号通路的ESR1、JUN、PTGS2等疾病靶点,干预酶的活性、脂代谢、神经变性等生物学过程,进而治疗肺栓塞。

基于UPLC-Orbitrap-HRMS技术鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠体内入血成分

目的鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠ig后的入血原型成分和代谢产物。方法基于超高效液相色谱-静电场轨道阱-高分辨率质谱技术(UPLC-Orbitrap-HRMS),结合对照品图谱、自建数据库、相关文献信息及Compound Discoverer 3.3、Xcalibur qual browser 4.3等软件对当归-川芎药对的化学成分进行分析鉴定;大鼠经ig给药后制得含药血清,通过比对含药血清与对照组血清,鉴定入血原型成分和代谢产物。结果共在当归-川芎药对中鉴定出69个化学成分,主要包括苯酞类24个、有机酸类24个、氨基酸类8个、含氮类7个、香豆素类4个、木脂素类1个、黄酮类1个;在含药血清中共鉴定出30个入血原型成分,包括苯酞类15个、有机酚酸类13个、香豆素类2个;鉴定出45个代谢产物,包括32个苯酞类代谢产物,13个有机酚酸类代谢产物。结论明确了当归-川芎药对的化学成分及入血原型成分和代谢产物。

高效液相色谱法测定当归-川芎药对配伍复方中阿魏酸的含量

目的:考察当归-川芎药对配伍复方(芎汤、生化汤、四物汤)中阿魏酸(FA)含量的变化。方法:用反相高效液相色谱法进行测定。结果:芎汤、生化汤、四物汤中阿魏酸煎出量依次为(109.4±3.0)mg·L-1,(95.3±1.9)mg·L-1,(85.6±2.0)mg·L-1。结论:当归-川芎药对配伍桃仁、炮姜、炙甘草,以及配伍白芍、熟地后阿魏酸煎出量均降低。

不同配比当归-川芎药对的抗炎、镇痛作用实验研究

目的观察当归-川芎药对抗炎、镇痛的药理作用,并比较不同配比药对抗炎、镇痛作用的差异。方法将当归-川芎药对分别按照1∶1、3∶2、2∶1、3∶1的质量比例配制水煎液,用二甲苯耳廓肿胀法、蛋清足趾肿胀法检测不同配比药对的抗炎作用;用热板法、甲醛法、醋酸扭体法观测不同配比药对的镇痛作用。结果不同配比当归-川芎药对能减轻小鼠二甲苯所致耳廓肿胀及蛋清所致足趾肿胀度,以1∶1配伍比例效果最佳;能提高小鼠热板疼痛痛阈值、降低甲醛疼痛舔足次数及醋酸疼痛扭体次数,以1∶1、3∶2配伍比例效果最佳。结论当归-川芎药对具有抗炎、镇痛作用,不同配比之间药效存在差异。

当归-川芎药对治疗脑梗死的“调控网络”和机制

目的:本研究借助网络药理学的方法预测当归-川芎药对治疗脑梗死的潜在靶点,探讨其调控网络及作用机制。方法:首先,本研究运用在线中医药生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)筛选当归-川芎作用的共同靶点;其次,通过OMIM数据库、GAD数据库、TTD数据库以及PharmGKB数据库筛选与脑梗死相关的靶点,并通过Cytoscape3.6.1软件筛选"药物-靶点-疾病"网络中的关键靶点;最后,利用DAVID 6.8在线分析工具对得到的关键靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集,并运用Omicshare在线分析工具对通路富集结果进行可视化。结果:通过筛选得到当归-川芎药对的共同靶点229个,脑梗死相关的作用靶点102个,通过网络合并和拓扑最终得到当归-川芎药对治疗脑梗死的关键靶点493个,其中涉及154个生物过程,65种细胞组成,51种分子功能及20条具有显著意义的通路(P<0.01,FDR<0.05)。结论:当归-川芎药对可能通过Thyroid hormone信号通路、Neurotrophin信号通路、MAPK信号通路及PI3K信号通路发挥治疗脑梗死的功效。其中,Thyroid hormone信号通路可能是治疗脑梗死的新方向。

当归-川芎挥发性成分与其抗子宫痉挛活性相关性分析

目的:评价当归-川芎不同配比药对挥发性成分与其抑制小鼠离体子宫平滑肌收缩效应的相关性。方法:采用小鼠离体子宫收缩模型评价当归-川芎不同配比药对挥发性成分的生物效应,采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对挥发性成分进行分析鉴定,探讨两者的相关性。结果:离体子宫平滑肌收缩试验表明不同配比当归-川芎药对挥发油对小鼠离体子宫收缩效应强弱依次为:当归-川芎(2∶1)>当归-川芎(3∶1)>当归-川芎(1∶1)>当归-川芎(3∶2);GC-MS分析结果表明对离体子宫收缩效应最佳的当归-川芎(2∶1)药对挥发油中主要成分的比例关系为:(Z)-ligustilide:(Z)-3-butylidene phthalide:4,5-dihydro-3-butyl-phathalide:(E)-ligustilide:Unknown compound:8,9-dehydro-Cycloisolongifolene:Neocnidilide:(E)-3-butylidene phthalide(80.75∶4.02∶2.07∶1.66∶0.81∶0.61∶0.53∶0.52)。结论:不同配比当归、川芎药对挥发性成分抑制离体子宫平滑肌收缩效应强度不同,可能是由于挥发油中各组成成分比例不同引起;挥发油中以内酯类成分为主,提示该类成分可能为抑制子宫收缩的主要活性成分。