川陈皮素对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道黏液高分泌的抑制作用及其分子机制

目的:探讨川陈皮素(NOB)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌的影响,阐明其对内质网应激(ERS)信号通路调控的分子机制。方法:按随机数字表法将45只SD大鼠随机分为对照组、模型组、NOB组、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)组和NOB+4-PBA组,每组9只。除对照组外,其他各组大鼠均采用烟熏联合气道内注入脂多糖(LPS)建立COPD大鼠模型,建模成功后给予相应药物(50 mg·kg^(-1)·d^(-1)Nob或0.35 g·kg^(-1)·d^(-1)4-PBA)干预,每天1次,连续干预4周。完成药物干预后,采用小动物呼吸机和血气分析仪检测各组大鼠肺功能指标[肺动态顺应性(Cdyn)和气道阻力(RL)]和动脉血气指标[血二氧化碳分压(PaCO_(2))和动脉血氧分压(PaO_(2))];苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠肺组织杯状细胞增生情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中气道杯状细胞内黏蛋白5AC(MUC5AC)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠肺组织中MUC5AC mRNA表达水平;Western blotting法检测各组大鼠肺组织MUC5AC和ERS相关蛋白肌醇依赖酶1α(IRE1α)、转录激活因子6(ATF6)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肺气道杯状细胞大量增生,Cdyn和PaO_(2)水平明显降低(P<0.05),而RL和PaCO_(2)水平明显升高(P<0.05),BALF中MUC5AC、IL-1β、TNF-α和IL-6水平及肺组织中MUC5AC、IRE1α、ATF6、CHOP以及GRP78蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,NOB组、4-PBA组和NOB+4-PBA组大鼠肺功能、动脉血气指标以及肺气道杯状细胞增殖情况均有明显缓解,且BALF中IL-1β、TNF-α和IL-6水平及肺组织中MUC5AC、IRE1α、ATF6、CHOP以及GRP78蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),而NOB+4-PBA组大鼠的缓解效果最佳。结论:NOB能有效缓解COPD大鼠肺气道黏液高分泌情况,其作用机制可能与抑制ERS介导的MUC5AC高表达有关。

川陈皮素通过FOXO3a/SIRT1通路减轻脂多糖诱导的肺损伤

目的 观察川陈皮素在脓毒症肺损伤中的作用,并探究其潜在机制。方法 采用随机数字表法将48只8~10周的雄性C57 BL/6小鼠分为4组,即对照组、肺损伤组、治疗组(5mg/kg)和治疗组(10mg/kg),每组各12只。对照组不做任何处理;肺损伤组小鼠腹腔注射脂多糖(10mg/kg);治疗组(5mg/kg)小鼠接受腹腔注射脂多糖(10mg/kg)的同时予以川陈皮素(5mg/kg)灌胃;治疗组(10mg/kg)小鼠接受腹腔注射脂多糖(10mg/kg),同时予以川陈皮素(10mg/kg)灌胃。脂多糖腹腔注射12h后,检测各组小鼠肺功能及动脉血气,同时留取肺组织,分别从病理学和分子生物学层面评估小鼠肺损伤状况及可能靶点。结果 与对照组比较,肺损伤组小鼠气道压力、PaCO_(2)、肺损伤评分明显增高,PaO_(2)明显降低(P<0.05);与肺损伤组比较,治疗组(5mg/kg)和治疗组(10mg/kg)小鼠气道压力、PaCO_(2)、肺损伤评分明显降低,PaO_(2)明显升高(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,与对照组比较,肺损伤组小鼠肺组织中IL-1β、TNF-α、TXNIP和4-HNE的蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与肺损伤组比较,治疗组(5mg/kg)和治疗组(10mg/kg)小鼠肺组织上述蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。此外,肺损伤组小鼠肺组织中FOXO3a和SIRT1的蛋白表达水平较对照组明显降低(P<0.05);与肺损伤组比较,治疗组(5mg/kg)和治疗组(10mg/kg)小鼠肺组织中FOXO3a和SIRT1蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论 川陈皮素可抑制小鼠脓毒症肺损伤并减轻氧化应激和炎性反应,其机制可能与川陈皮素对FOXO3a/SIRT1通路激活有关。

川陈皮素对食管癌KYSE150细胞存活、侵袭和凋亡的影响及机制实验研究

目的:探究川陈皮素对食管癌KYSE150细胞存活、侵袭及凋亡的影响及可能的机制。方法:将培养至对数生长期的KYSE150细胞分为对照组(常规培养)、顺铂组(0.5μg/ml顺铂)、川陈皮素低(10μg/ml)、中(20μg/ml)、高(40μg/ml)浓度组。采用MTT法检测KYSE150细胞存活率。采用Transwell实验检测KYSE150细胞侵袭能力。采用流式细胞术检测KYSE150细胞凋亡率。采用荧光定量PCR法检测KYSE150细胞Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、ROCK2 mRNA表达。采用Western bolt法检测KYSE150细胞RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与对照组比较,顺铂组及川陈皮素低、中、高浓度组KYSE150细胞存活率、侵袭数目以及RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(均P<0.05)。与顺铂组比较,川陈皮素低、中浓度组KYSE150细胞存活率、侵袭数目以及RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达水平升高,凋亡率降低(均P<0.05)。川陈皮素高浓度组和顺铂组上述指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。川陈皮素低、中、高浓度组KYSE150细胞存活率、侵袭数目以及RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达水平依次降低,凋亡率依次升高(均P<0.05)。结论:川陈皮素能够抑制KYSE150细胞的存活和侵袭,促进凋亡,其机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

达立通浸膏中延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯在大鼠体内的药代动力学及组织分布研究

目的:研究达立通浸膏给药后大鼠体内主要药物成分及药代动力学特点。方法:建立同时检测延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,应用于测定大鼠血浆和组织中药物浓度及药代动力学特征。结果:建立了同时定量测定延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯方法,单次灌胃给予达立通浸膏后,延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯可以快速吸收进入体内,在血中峰浓度(C_(max))分别为(13.73±7.50)、(27.01±17.69)、(66.73±29.94)ng/mL,曲线下面积(AUC_(0-t))分别为(80.43±40.03)、(41.30±28.69)、(303.90±136.69)ng·h·mL^(-1),消除半衰期(t_(1/2))分别为(5.82±2.22)、(1.08±0.01)、(4.95±2.53)h。多次给药能明显增加各物质体内暴露水平。各成分在大鼠的主要组织/器官中广泛分布,在胃肠道中暴露水平最高,其次是肝和肾。各成分存在明显的雌雄差异,在雌性大鼠中的暴露量(C_(max)和AUC)均显著高于雄性大鼠(P<0.05)。结论:UPLC-MS/MS测定延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯的方法准确、灵敏、可靠。达立通浸膏中延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯可吸收进入血液、广泛分布于体内组织、器官、较快代谢/消除,为达立通浸膏潜在的体内药代标记物。

川陈皮素对单纯性肥胖症大鼠肠道菌群和短链脂肪酸的影响

目的:探讨川陈皮素(nobiletin,NOB)对高脂饮食诱导的单纯性肥胖症大鼠肠道菌群及其产物短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)的影响。方法:将22只SD大鼠随机分为对照组(6只)和模型组(16只)。采用高脂饮食喂养制备单纯性肥胖症大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组(6只)和川陈皮素组(6只)。川陈皮素组给予川陈皮素溶液(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃治疗,连续干预21 d。隔天记录各组大鼠体质量,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察各组大鼠肝脏和脂肪组织病理学变化,采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血脂水平,以16S核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)测序法分析各组大鼠肠道菌群的变化,应用高效液相色谱-质谱(high-performance liquid chromatography mass spectrometry,LC-MS)联用方法检测大鼠SCFAs含量。结果:与对照组相比,模型组大鼠体质量显著升高(P<0.01),脂肪细胞直径明显增大,出现肝细胞空泡化现象并伴有脂肪变性和炎症浸润,大鼠总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)水平显著升高(P<0.05)。在肠道菌群的变化方面,在门水平上,模型组大鼠厚壁菌门上升,拟杆菌门下降;在属水平上,模型组大鼠拟杆菌属、乳杆菌属、经黏液真杆菌属显著下降,大肠杆菌属显著升高。SCFAs中丙酸和丁酸水平下降。经治疗后,与模型组相比,川陈皮素组大鼠体质量显著下降(P<0.05),脂肪细胞直径明显缩小,肝细胞空泡现象和脂质积累减轻,大鼠TG和TC水平显著降低(P<0.05);在门水平上,川陈皮素组大鼠厚壁菌门下降,拟杆菌门上升;在属水平上,拟杆菌属、乳杆菌属、经黏液真杆菌属显著升高,大肠杆菌属显著下降;SCFAs中丙酸和丁酸含量均显著升高(P<0.05)。结论:NOB能够降低肥胖症大鼠体质量,调节大鼠肠道菌群的结构以及SCFAs的含量,改善脂质代谢,从而发挥抗肥胖的作用。

川陈皮素调节RIP1/RIP3/MLKL信号通路对慢性心力衰竭大鼠心肌坏死性凋亡的影响

目的探究川陈皮素(Nob)调节受体相互作用蛋白激酶1/受体相互作用蛋白激酶3/混合谱系激酶样结构域蛋白(RIP1/RIP3/MLKL)信号通路对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌坏死性凋亡的影响及作用机制。方法于2022年9月—2023年3月在南方医科大学中心实验室进行实验。建立大鼠CHF模型,将造模成功的75只大鼠按随机数字表法分为模型组(CHF组)、川陈皮素低剂量组(Nob-L组,7.5 mg·kg-1·d^(-1)Nob)、川陈皮素中剂量组(Nob-M组,15 mg·kg-1·d^(-1)Nob)、川陈皮素高剂量组(Nob-H组,30 mg·kg-1·d^(-1)No b)和通路抑制剂Necrostatin-1组(Nec-1组,2.45 mg·kg-1·d^(-1)Nec-1),每组15只。另取15只大鼠作为假手术组(Sham组)只打开胸腔不进行结扎。干预28 d后,采用超声心动图检测左心室功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)水平;苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理变化及纤维化情况;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察心肌组织凋亡情况;蛋白质印迹法(Western blot)检测心肌组织RIP1、RIP3、MLKL磷酸化水平及半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(Caspase-8)蛋白表达。结果与Sham组比较,CHF组心肌组织部分细胞损伤坏死、结构紊乱、心肌细胞肿胀、有大量的炎性细胞浸润,心肌组织胶原蛋白沉积和纤维化增加,与CHF组比较,Nob-L组、Nob-M组、Nob-H组和Nec-1组心肌纤维排列逐渐规则、心肌细胞肿胀、坏死及炎性细胞浸润减少、胶原沉积和纤维化减少。与Sham组比较,CHF组左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、IL-1β、TNF-α和MDA水平、细胞凋亡率、p-RIP1/RIP1、p-RIP3/RIP3、p-MLKL/MLKL表达显著增加,左心室射血分数(LVEF)、左心室轴缩短分数(FS)、SOD和T-AOC水平、Caspase-8表达显著降低;与CHF组比较,Nob-L组、Nob-M组、Nob-H组、Nec-1组上述指标均改善(F/P=102.557/<0.001、117.684/<0.001、364.401/<0.001、268.087/<0.001、124.566/<0.001、229.003/<0.001、193.585/<0.001、182.164/<0.001、142.657/<0.001,140.900/<0.001、169.680/<0.001、103.485/<0.001、108.277/<0.001、200.435/<0.001),且Nob-L组、Nob-M组、Nob-H组的干预效果呈剂量依赖性(P<0.05)。结论Nob可能通过抑制RIP1/RIP3/MLKL信号通路的激活,减轻炎性反应及氧化应激,抑制CHF大鼠的心肌坏死性凋亡,对CHF大鼠发挥保护作用。

川陈皮素在阿尔兹海默病防治机制中的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是老年患者最常见的神经退行性疾病。AD发病机制尚不明确,可能与多种因素如中枢炎性反应、氧化应激等有关。川陈皮素是一种天然存在的多甲氧基类黄酮,广泛存在于柑橘类水果,具有抗炎、抗氧化等功效,其作用机制可能与其影响MAPKs、PI3K/AKT和NF-κB炎症通路、抑制小胶质细胞活化,进而减少促炎介质生成和多种途径协同作用增加ATP产量、降低活性氧水平有关。此外,川陈皮素还以非竞争的方式抑制β蛋白裂解酶的活性,减少β-淀粉样蛋白(amyloid protein-β,Aβ)的水平,影响昼夜节律基因的表达等方式,对昼夜节律稳定起调节作用,并通过调节肠道功能影响肠道菌群活性等缓解AD的临床症状。本文将从AD相关药物的研究现状和川陈皮素在AD防治中的可能机制两方面的研究进展进行综述。

川陈皮素对舒芬太尼麻醉后大鼠认知及学习记忆功能损伤的影响机制

目的探索川陈皮素对舒芬太尼麻醉后大鼠认知功能及学习记忆功能损伤的影响及作用机制。方法选取SPF级SD大鼠65只,对照组15只,50只建立舒芬太尼模型,其中45只成功建模,将建模后大鼠随机分为模型组、川陈皮素低剂量组、川陈皮素高剂量组,每组各15只。对照组、模型组给予5 mL生理盐水灌服,川陈皮素低剂量组给予生理盐水+25 mg/kg川陈皮素灌服,川陈皮素高剂量组给予生理盐水+55 mg/kg川陈皮素灌服。观察各组大鼠逃生潜伏期、空间探索能力,测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、Toll样受体-4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果与对照组相比,模型组、川陈皮素低剂量组、川陈皮素高剂量组平台所在象限停留时间、穿越平台次数、SOD、CAT水平表达降低,而逃生潜伏期、MDA、TNF-α、IL-1β、TLR4、NF-κB p65水平表达升高(P<0.05);与模型组相比,川陈皮素低剂量组、川陈皮素高剂量组逃生潜伏期、MDA、TNF-α、IL-1β、TLR4、NF-κB p65表达水平降低,平台所在象限停留时间、穿越平台次数、SOD、CAT表达水平升高(P<0.05);与川陈皮素低剂量组相比,川陈皮素高剂量组逃生潜伏期、MDA、TNF-α、IL-1β、TLR4、NF-κB p65表达水平降低,平台所在象限停留时间、穿越平台次数、SOD、CAT表达水平升高(P<0.05)。结论川陈皮素可改善舒芬太尼麻醉后大鼠认知功能及学习记忆功能的损伤,其机制可能与调节相关因子表达水平有关。

超高效液相-三重四极杆质谱联用仪测定新会陈皮中柚皮苷、川陈皮素、橙皮苷、橘皮素、辛弗林的检测方法研究

以超高效液相-三重四极杆质谱为技术基础,建立了可同时测定新会陈皮中柚皮苷、川陈皮素、橙皮苷、橘皮素、辛弗林等成分的检测方法。该方法中柚皮苷、川陈皮素、橘皮素、辛弗林的线性范围为25~1000μg·L^(-1),橙皮苷线性范围为100~2000μg·L^(-1),线性系数均>0.995,线性良好。经验证,该方法简单高效,灵敏度高,精确性好,能够满足新会陈皮中相关成分的检测要求。

川陈皮素调节CCL2-CCR2信号轴对牙周炎大鼠炎性损伤的影响

目的:通过构建牙周炎大鼠模型探讨川陈皮素对牙周炎大鼠炎性损伤的影响及作用机制。方法:采用丝线结扎联合10%蔗糖饮水建立牙周炎大鼠模型;将牙周炎大鼠分为模型组、川陈皮素低剂量组、川陈皮素中剂量组、川陈皮素高剂量组,每组10只,另取10只大鼠为对照组;川陈皮素低、中、高剂量组分别灌胃25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg川陈皮素,对照组、模型组灌胃等量生理盐水。HE染色检测各组大鼠牙周组织病理形态变化;qPCR检测各组大鼠牙周组织C-C趋化因子配体2(CCL2)、C-C趋化因子受体2(CCR2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6 mRNA水平;免疫组织化学染色检测各组大鼠牙周组织CCL2表达;Western blot检测各组大鼠牙周组织CCL2、CCR2、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达。结果:牙周炎大鼠模型建立4周后,与对照组相比,造模大鼠出现牙槽骨吸收、牙根松动有出血现象,表明牙周炎大鼠模型构建成功;与对照组相比,模型组大鼠牙周组织出现牙槽骨吸收、有大量炎性细胞浸润、CCL2阳性细胞数目增多,牙周组织CCL2、CCR2、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.05);与模型组相比,川陈皮素低、中、高剂量组大鼠牙周组织炎性细胞浸润逐渐减轻,成纤维细胞数量逐渐增加,CCL2阳性细胞数目减少,牙周组织CCL2、CCR2、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:川陈皮素可能通过抑制CCL2-CCR2信号轴减轻牙周炎大鼠炎性损伤。

川陈皮素通过激活SIRT1/FOXO3a信号来减轻肾缺血再灌注损伤

目的:本研究旨在探究川陈皮素(NOB)保护小鼠肾缺血再灌注损伤(RIRI)的可能分子机制。方法:将Balb/c小鼠分为5组(n=6):假手术组、模型组、NOB组(50 mg/kg)、组蛋白去乙酰化酶沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂EX527组(5 mg/kg)、NOB+EX527组(50 mg/kg的NOB+5 mg/kg EX527)。在建模前24 h对小鼠进行药物处理。通过阻断小鼠左肾动静脉血流建立RIRI模型。建模24 h后检测肾组织中氧化应激标志物含量。通过苏木精-伊红(HE)染色和天狼星红染色评价肾组织病变和纤维化。通过TUNEL染色检测肾细胞凋亡。通过蛋白质免疫印迹法检测肾组织中SIRT1、叉头框蛋白O3a(FOXO3a)、细胞凋亡和自噬相关蛋白表达。通过实时荧光定量PCR检测肾组织中SIRT1和FOXO3a mRNA的水平。结果:与模型组比较,NOB组小鼠肾脏病变程度减轻,肾脏纤维化面积降低(均P<0.05)。与模型组比较,NOB组肾组织抗氧化作用升高(P<0.05)。与模型组比较,NOB组肾组织中细胞凋亡减少(P<0.05)。与模型组比较,NOB组肾组织中SIRT1和FOXO3a的mRNA和蛋白相对表达量升高,微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,而p62降低(均P<0.05)。此外,EX527逆转了NOB对肾脏的保护作用(P<0.05)。结论:NOB通过激活SIRT-1/FOXO3a信号通路介导的自噬来减轻RIRI。

川陈皮素对急性肾损伤大鼠的改善作用及机制研究

目的探究川陈皮素(NOB)通过调节沉默信息调节因子1(SIRT-1)/叉头框转录因子O3a(FOXO3a)通路介导的自噬对急性肾损伤(AKI)大鼠的改善作用及其机制。方法采用一次性腹腔注射顺铂(20 mg/kg)的方法构建AKI大鼠模型。将60只SPF级SD雄性大鼠采用随机数字表法分为对照组(Control组)、AKI模型组(Model组)、低剂量NOB组(NOB-L组,200 mg/kg)、高剂量NOB组(NOB-H组,400 mg/kg)和高剂量NOB+SIRT-1抑制剂EX527组(NOB-H+EX527组,400 mg/kg NOB+5 mg/kg EX527),每组12只。末次给药后收集大鼠24 h尿液,检测24 h尿微量白蛋白含量、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖甘酶(NAG)含量和尿β2微球蛋白(β2-MG)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和肾脏中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;HE染色观察大鼠肾小管组织病理变化;TUNEL染色法检测肾小管细胞凋亡;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测大鼠肾脏组织中SIRT1和FOXO3a mRNA表达;Western blot检测大鼠肾脏组织中SIRT1/FOXO3a通路和自噬相关蛋白的表达。结果与Control组相比,Model组大鼠肾脏组织病理损伤严重,24 h尿微量白蛋白、尿NAG、尿β2-MG、血BUN、血Scr、肾小管损伤评分、肾脏MDA水平、细胞凋亡率升高,肾脏SOD水平、SIRT1/FOXO3a通路和自噬相关蛋白表达降低(P<0.05);与Model组相比,NOB-L组和NOB-H组大鼠肾脏组织病理损伤减轻,24 h尿微量白蛋白、尿NAG、尿β2-MG、血BUN、血Scr、肾小管损伤评分、肾脏MDA水平、细胞凋亡率降低,肾脏SOD水平、SIRT1/FOXO3a通路和自噬相关蛋白表达升高(P<0.05)。结论NOB可能通过激活SIRT-1/FOXO3a通路,促进自噬,进而改善大鼠的AKI。

川陈皮素在体内外模型中对肠干细胞增殖的影响

目的探讨在体内外模型中常用有效剂量川陈皮素(nobiletin,NOB)对肠道干细胞的调节作用。方法构建小鼠结肠癌细胞系MC38的3D培养模型,加入不同浓度NOB,观察克隆死亡和存活。构建小鼠小肠类器官模型,在类器官培养体系中添加不同浓度的NOB,观察类器官的出芽和生长,利用MTT染色后的类器官成像进行面积和吸光值计算。在50、100μmol/L浓度NOB干预体系中不同时间撤掉NOB,观察类器官生长。在50μmol/L浓度NOB处理类器官的体系中分别加入R-spondin1、CHIR99021加强Wnt通路激活信号,观察类器官的生长。对C57/B6J小鼠灌胃不同浓度NOB,连续给药4 d,观察肠道隐窝和绒毛长度比,观察隐窝细胞凋亡,以及隐窝底部干细胞龛中Olfm4/BrdU染色阳性的细胞数量。结果与对照组相比,50μmol/L NOB即可显著促进肿瘤细胞MC38成球后死亡,显著降低克隆形成率(P<0.001)。与对照组相比,NOB从50μmol/L起可以显著抑制肠类器官的出芽,50~200μmol/L NOB可以显著抑制类器官的生长(P<0.001),并且具有剂量依赖效应;NOB撤药后在50μmol/L时肠类器官生长容易恢复,在100μmol/L时难以恢复到正常水平。增强Wnt通路的激活可以部分挽救NOB对肠类器官的抑制作用。在体给予高于常用浓度的NOB不能诱导肠隐窝细胞凋亡,不影响肠干细胞的数目和增殖,不影响隐窝和绒毛比。结论NOB具有抑制正常肠干细胞的能力,可能通过调控干细胞相关通路如Wnt发挥作用,但其在在体不能发挥抑制干细胞增殖的效应;这提示NOB在常规浓度应用的安全性,同时提醒对NOB在在体肿瘤模型中发挥的抑制作用需要进行更深入的评估。

川陈皮素干预阿尔茨海默病作用机制研究进展

川陈皮素来源于中药陈皮的多甲氧基黄酮(polymethoxyflavonoids,PMFs)成分,具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗肥胖和抗动脉粥样硬化等功效,现代研究发现其在治疗阿尔茨海默病方面具有良好的潜力。阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种神经系统退行性疾病,是严重的健康和社会问题,药物治疗为最常用的治疗手段。川陈皮素通过抑制淀粉蛋白β-分解酶1的活性,增加中性内肽酶的活性,调控cAMP/PKA/ERK,减轻淀粉样蛋白神经毒性;提高乙酰胆碱转移酶的活性、降低乙酰胆碱酯酶活性,增强谷氨酸受体-1的磷酸化水平,提高神经元突触可塑性;调节活性氧、超氧化酶歧化物、丙二醛水平及细胞凋亡相关基因,减轻神经细胞氧化损伤;调节PI2K/AKT和NF-κB信号通路、调控炎症因子水平,减轻神经炎症损伤;逆转Tau蛋白的过度磷酸化,改善微管细胞骨架紊乱;调节胰岛素信号传导和线粒体功能,改善昼夜节律、睡眠周期失调。表明川陈皮素通过多种机制发挥防治AD的作用,但目前关于川陈皮素治疗AD的临床研究尚少,应进一步加强相关研究,以期为AD治疗新药的研发提供前期基础。

川陈皮素对慢传输型便秘小鼠的治疗作用及机制研究

目的探讨川陈皮素(NOB)对慢传输型便秘(STC)小鼠的治疗作用及其机制。方法随机将小鼠分为正常组、模型组、阳性对照组(莫沙必利,2.5 mg·kg^(-1))及NOB低、中、高剂量组(10、20、40 mg·kg^(-1)),每组12只。模型组和给药组均采用盐酸洛哌丁胺诱导STC小鼠模型,造模成功后给予相应药物灌胃处理,每天1次,共2周。检测各组小鼠24 h内排便量、粪便含水量、肠道推进率及结肠肌电变化;HE染色观察各组小鼠结肠组织病理学变化;ELISA法检测各组小鼠结肠组织中5-羟色胺(5-HT)、血管活性肽(VIP)、一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性;Western blot检测各组小鼠结肠组织中干细胞因子(SCF)和酪氨酸激酶受体(c-kit)蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠结肠损伤明显,24 h排便量、粪便含水量、肠道推进率、结肠肌电慢波振幅及结肠组织中SCF和c-kit蛋白表达均显著降低(P<0.05),而结肠肌电慢波频率、结肠组织中5-HT、VIP、NO和NOS水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,NOB中、高剂量组及阳性对照组小鼠结肠损伤减轻,24 h内排便量、肠道推进率、结肠肌电慢波振幅及结肠组织中SCF和c-kit蛋白表达均显著升高(P<0.05),而结肠肌电慢波频率及结肠组织中5-HT、VIP、NO和NOS水平均显著降低(P<0.05),而NOB低剂量组以上指标无显著性差异(P>0.05)。结论NOB可通过调节结肠肌电、增强肠道神经传递、促进肠道推进,从而改善STC小鼠排便情况,其作用机制可能与上调SCF和c-kit蛋白表达有关。

川陈皮素通过抑制STING/NF-κB信号通路促进骨质疏松大鼠的骨折愈合

目的探讨川陈皮素(NOB)通过抑制干扰素基因刺激因子(STING)/核转录因子kappaB(NF-κB)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠骨折愈合的影响。方法通过切除卵巢+右侧股骨干骨折髓内固定术建立OP性骨折大鼠模型;将造模后的大鼠随机分为模型组、NOB高(NOB-H,30 mg/kg NOB)、中(NOB-M,20 mg/kg NOB)、低剂量(NOB-L,10 mg/kg NOB)组以及NOB-H+STING激活剂(DMXAA)组(30 mg/kg NOB+25 mg/kg DMXAA),并以仅暴露卵巢的18只大鼠作为假手术组。干预结束后,对大鼠骨折愈合状况进行评估;Micro-CT检测大鼠骨小梁微结构变化;试剂盒检测血清中骨代谢相关指标[碱性磷酸酶(ALP)、钙、磷]及炎症因子(TNF-α、IL-1β)水平;HE检测股骨组织形态学变化及骨小梁面积;Western blot检测STING/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组骨折线清晰,骨小梁结构紊乱、且间隙较大,TNF-α、IL-1β水平、STING、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加,骨小梁面积、ALP、钙、磷水平、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)和骨小梁厚度(Tb.Th)显著降低(P<0.05);与模型组相比,NOB-L组、NOB-M组、NOB-H组骨折线逐渐模糊,骨小梁结构排列有序,且间隙逐渐减少,指标变化趋势与模型组相反(P<0.05);STING激活剂减弱了NOB对OP大鼠的骨折愈合的促进作用,并增加大鼠炎症反应。结论NOB可减少OP性骨折大鼠炎症反应,促进其骨折愈合,可能与抑制STING/NF-κB信号通路有关。

川陈皮素调节Notch/NF-κB/NLRP3信号通路对类风湿关节炎大鼠炎性损伤的影响

目的探究川陈皮素(NOB)调节神经源性基因同源蛋白(Notch)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对类风湿关节炎(RA)大鼠炎性损伤的影响。方法将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、NOB低剂量组(NOB-L组,50 mg/kg)、NOB高剂量组(NOB-H组,100 mg/kg)、NOB高剂量+Notch激活剂Jagged1组(NOB-H+Jagged1组,100 mg/kg NOB+50 mg/kg Jagged1)。于给药第0天与末次给药后对各组大鼠进行关节炎指数评价。自给药第0天开始,每7天测定1次大鼠足趾肿胀度。计算各组大鼠胸腺和脾脏指数;HE染色观察每组大鼠踝关节滑膜足趾病理学变化;ELISA法检测各组大鼠血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平;RT-qPCR法测定各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA表达;Western blot检测各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NLRP3蛋白表达。结果1)RA的病情进展:与Control组相比,Model组大鼠关节炎指数和足趾肿胀度显著上升(P<0.05),滑膜组织病理学损伤严重。2)大鼠脏器指数及炎性因子变化:与Control组相比,Model组大鼠胸腺和脾脏指数显著上升(P<0.05),血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著上升(P<0.05)。3)Notch/NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达变化:与Control组相比,Model组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA和蛋白、p-NF-κB p65蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与Model组相比,NOB-L、NOB-H组相关指标变化趋势与上述相反(P<0.05),滑膜组织病理学损伤有所减轻。Jagged1减弱了NOB对RA大鼠炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论NOB可能通过下调Notch/NF-κB/NLRP3信号通路,减轻RA大鼠的炎性损伤。

基于微小RNA-146a探究川陈皮素对帕金森病模型的神经保护作用

目的通过建立帕金森病(Parkinson’s disease,PD)细胞和动物模型,揭示微小RNA-146a(miR-146a)介导川陈皮素(nobiletin)对PD的调控作用。方法分别构建PD细胞模型和PD小鼠模型作为研究样本,并接受不同浓度川陈皮素治疗。利用实时荧光定量PCR检测样本中miR-146a的表达水平,CCK-8法分析细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,使用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测小鼠血清和海马组织匀浆中炎症因子的表达水平,并利用旷场实验记录小鼠运动能力,分析miR-146a介导川陈皮素对PD的治疗功效。结果与对照组相比,PD细胞模型组中miR-146a的表达和细胞凋亡率随川陈皮素浓度的增加而下降,细胞增殖水平则相反,提示川陈皮素具有提高PD细胞增殖活力、抑制凋亡的作用。进一步选择川陈皮素高剂量组验证发现,异常表达miR-146a介导川陈皮素调控PD的进展,并通过PD小鼠运动能力、血清和组织中炎症因子的变化再次验证了川陈皮素对神经保护功能的分子机制。结论miR-146a在PD细胞模型中表达显著升高,川陈皮素可恢复神经细胞的活力。miR-146a通过介导川陈皮素调控神经细胞的生长及炎症因子的水平,恢复小鼠的正常运动功能,可能是治疗PD的潜在靶点。

陈皮中川陈皮素的提取分离及改性

以陈皮中川陈皮素的提取、分离纯化以及改性为目的,采用无水乙醇浸提陈皮得浸膏,以氯仿为萃取剂萃取浸膏,得到多甲氧基黄酮混合物,再以硅胶为吸附剂、乙酸乙酯和石油醚的混合液为洗脱剂,采用柱色谱法分离多甲氧基黄酮化合物,经高效液相色谱和气相色谱-质谱检测并与标准品对比,最终确证得到川陈皮素纯品。研究从川陈皮素到5-去甲基川陈皮素的合成路线,优化了改性条件,在浓盐酸与无水乙醇体积比为1∶9条件下,将川陈皮素加热回流反应24 h,可以得到纯度大于97%的5-去甲基川陈皮素。

柑橘黄酮川陈皮素的抗肿瘤作用研究

目的研究橘皮中提取的黄酮化合物川陈皮素的抗肿瘤作用:抑制小鼠移植瘤生长、与化疗药物的协同及抗肿瘤转移作用。方法采用多种肿瘤模型,川陈皮素ig给药。结果川陈皮素8～32mg/kg剂量对小鼠黑色素瘤B16的抑瘤率为42.24%～65.95%;对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率为38.84%～59.09%;对小鼠S180肉瘤的抑瘤率为36.02%～45.98%。川陈皮素与小剂量的紫杉醇、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)和阿霉素(ADR)联合用药时,表现明显的协同效应。川陈皮素对小鼠Lewis肺癌腋皮下接种肺转移的抑制率为33.63%～38.94%;对小鼠Colon26结肠癌腹腔接种腹膜转移的抑制率为37.74%～43.40%。结论川陈皮素具有一定的抗肿瘤生长作用,与临床常用化疗药物有协同作用,并可有效抑制实验性肿瘤转移。