单细胞五重巢式PCR检测DMD基因

目的:探索建立单细胞多重巢式PCR检测杜氏肌营养不良症(DMD)基因外显子17、19、44、45、48的技术,及应用于植入前遗传学诊断(PGD)的前景。方法;获取正常男性单个淋巴细胞和无DMD家族史的单个胚胎细胞,行DMD基因外显子17、19、44、45、48的五重巢式PCR,分析扩增成功率、假阳性率和假阴性率。结果:20个单个淋巴细胞5个外显子扩增成功率为97％(97/100)、假阳性率为4％(1/25)、假阴性率为0％(0/25),20个单个胚胎细胞5个外显子扩增成功率为80％(80/100)、假阳性率为0％(0/25)。结论:本文建立的单细胞DMD基因外显子17、19、44、45、48的五重巢式PCR技术具有较高扩增成功率和特异性,应用于DMD的PGD具有现实的可能性。

模板制备方法对单细胞PCR检测DMD基因的影响

旨在探讨模板制备方法对单细胞 PCR准确性的影响 ,采用 KOH/ DTT和液氮冻融煮沸两种不同方法裂解单个淋巴细胞 ,行 DMD基因外显子 17、19、4 4、4 5、4 8五重巢式 PCR.用 KOH/DTT法裂解的细胞扩增成功率为 98% ( 147/ 150 ) ,失败率为 2 % ( 3/ 150 ) ;用液氮冻融煮沸法裂解的细胞扩增成功率为 78% ( 117/ 150 ) ,失败率为 2 2 % ( 33/ 150 ) ,差异有显著性 (χ2 =2 8.4 ,P <0 .0 1) .结果表明单细胞 PCR模板制备与 PCR扩增失败有密切关系 ,选用合适的细胞裂解方法可提高单细胞

IgH基因重排在B淋巴瘤微小残留病中的应用

目的 探讨IgH基因重排在B细胞淋巴瘤临床诊治中的应用。方法 应用半巢式PCR技术对IgH基因的CDRⅡ区和CDRⅢ区进行基因重排检测。共检测 4 5例骨髓标本。其中正常标本 8例 ,淋巴瘤标本 37例 (B细胞淋巴瘤 2 7例 ,T细胞淋巴瘤 10例 )。结果 8例正常标本未检测到FR2A或FR3A的重排 ;2 7例B细胞淋巴瘤中 ,2 3例 (85 .2 % )可检测到FR2A或FR3A重排 ,其中FR2A重排 16例 (5 9.3% ) ,FR3A重排 2 0例 (74 .1% ) ,FR2A、FR3A均有重排者 13例 (48.1% ) ;10例T淋巴瘤中FR2A重排 1例 ,FR3A重排 3例。骨髓穿刺检查 :2 7例B淋巴瘤中 5例原幼淋细胞 >5 % ,FR2A和FR3A阳性各 4例 ;2 2例原幼淋细胞 <5 %者 ,FR2A阳性 12例 ,FR3A阳性 16例。

急性呼吸系统疾病暴发疫情多重巢式PCR检测分析

目的对3起不明原因的聚集性急性呼吸系统疾病暴发疫情的标本进行多重巢式PCR检测,及时筛查SARS病毒、高致病性人禽流感H5N1亚型病毒并检测其他亚型流感病毒、副流感病毒、支原体、肺炎衣原体等病原体,探讨该方法在聚集性急性呼吸系统疾病调查中的应用意义。方法采用多重巢式PCR方法对3起疫情的咽拭标本进行可引起急性呼吸系统疾病的23种病原体进行筛查。结果医院甲不明原因肺炎聚集性病例9例,对9例咽拭标本进行筛查,肺炎衣原体感染6例;学校乙不明原因肺炎聚集性病例69例,对13份咽拭标本进行检测,B型流感嗜血杆菌(HIB)感染7例;学校丙不明原因肺炎聚集性病例12例,对12份咽拭标本进行检测,HIB感染5例。结论多重巢式PCR方法可快速有效地筛查引起聚集性急性呼吸系统疾病暴发疫情的病原体,为有效遏制疫情及进一步处理提供线索。

利用母体外周血中胎儿DNA行产前诊断研究进展

母体外周血浆中存在一定数量的游离的胎儿DNA已为许多学者所证实,为非侵入性产前诊断提供了一个有广泛应用前景的途径 综述胎儿DNA在母体外周血中的特点。