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绵羊支原体肺炎病原巢式PCR检测方法的建立与应用
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作者 杨华 周华倩 +5 位作者 黄新 齐宇 余乾 张文喆 杨永林 侯扶琴 《安徽农业科学》 CAS 2024年第4期74-77,共4页
[目的]建立一种诊断绵羊支原体肺炎病原的巢式PCR方法,确定肺炎支原体感染的靶器官。[方法]根据GenBank网站上登录的绵羊支原体16S rRNA基因序列,设计并合成2对引物,以肺炎支原体菌株基因组DNA为模板,经过PCR反应条件的优化,通过测序验... [目的]建立一种诊断绵羊支原体肺炎病原的巢式PCR方法,确定肺炎支原体感染的靶器官。[方法]根据GenBank网站上登录的绵羊支原体16S rRNA基因序列,设计并合成2对引物,以肺炎支原体菌株基因组DNA为模板,经过PCR反应条件的优化,通过测序验证扩增产物的正确性,建立了绵羊支原体肺炎病原的巢式PCR检测方法,进而应用建立的方法完成临床阳性病料肺脏、肺淋巴、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、皮肤、小肠和外周血检测以及疑似样本肺脏组织的检测。[结果]建立的巢式PCR方法可扩增出864 bp的特异性目的片段,肺脏和肺淋巴为绵羊肺炎支原体感染的靶器官,临床样本巢式PCR检出率与支原体培养鉴定结果的符合率为100%。[结论]建立的绵羊支原体肺炎病原巢式PCR检测方法可用于临床样本的实验室诊断。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 巢式PCR 检测方法
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“醒脑开窍”针刺法对老年卒中相关性肺炎发病影响的巢式病例对照研究
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作者 肖璐 许欣宜 +4 位作者 缪长宏 吴芳颖 宋艳兴 李桂伟 石存忠 《天津中医药大学学报》 CAS 2024年第7期589-594,共6页
[目的]探讨真实环境下“醒脑开窍”针刺法对老年急性脑梗死(ACI)患者卒中相关性肺炎(SAP)发生率的影响。[方法]在ACI队列研究基础上,采用巢式病例对照研究方法,经倾向性匹配评分(PSM)均衡混杂因素,匹配因素包括美国国立卫生研究院卒中量... [目的]探讨真实环境下“醒脑开窍”针刺法对老年急性脑梗死(ACI)患者卒中相关性肺炎(SAP)发生率的影响。[方法]在ACI队列研究基础上,采用巢式病例对照研究方法,经倾向性匹配评分(PSM)均衡混杂因素,匹配因素包括美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)以及吞咽困难,设置卡钳值为0.01,按照1∶4的比例进行匹配。随后利用Logistic回归分析针灸对老年SAP的发病影响,分析中医证型对SAP的发病影响及针灸对不同证型ACI患者SAP的发病影响。[结果]研究最终选取病例组48例、对照组155例患者进入研究,使用“醒脑开窍”针刺法后老年SAP发病风险降低76%(P<0.001)。多因素Logistic回归分析发现,在60~69、70~79、≥80岁年龄段中,“醒脑开窍”针刺法均是影响SAP发生的显著因素;“醒脑开窍”针刺法可以显著降低阴虚风动证ACI患者SAP的发病率[OR=0.12,95%CI(0.05,0.25),P<0.0001]。此外,无论ACI患者是否发生昏迷[基于格拉斯哥昏迷评分法(GCS)评分定义],“醒脑开窍”针刺法均可以减少SAP的发生。[结论]“醒脑开窍”针刺法可以降低ACI患者SAP的发生率,尤其是对阴虚风动证患者更为明显,预防效果尚需要进一步前瞻性研究加以证实。 展开更多
关键词 卒中相关性肺炎 “醒脑开窍”针刺法 巢式病例对照研究 倾向性评分
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油茶巢式交配子代油脂相关性状的遗传分析
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作者 王安妮 王开良 +5 位作者 柴静瑜 钟慧奇 滕建华 张磊 俞文仙 林萍 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期379-388,共10页
【目的】探究油茶种内杂交和种间杂交的亲本选配机制,为油茶高含油率杂交育种选育提供指导。【方法】以油茶巢式交配设计的种内、种间杂交子代为材料,分别测定种仁含油率、木质素、纤维素和半纤维素含量,分析母本的一般配合力(GCA)、杂... 【目的】探究油茶种内杂交和种间杂交的亲本选配机制,为油茶高含油率杂交育种选育提供指导。【方法】以油茶巢式交配设计的种内、种间杂交子代为材料,分别测定种仁含油率、木质素、纤维素和半纤维素含量,分析母本的一般配合力(GCA)、杂交组合的特殊配合力(SCA),解析重要性状的遗传效应。【结果】12个家系的种仁含油率为17.83%~53.55%,木质素含量为4.68%~18.12%,纤维素含量为3.66%~13.04%,半纤维素含量0.54%~12.20%。种仁含油率、木质素、纤维素和半纤维素含量的差异在组合间和母本内父本间达到了显著水平。含油率和木质素、半纤维素含量呈显著负相关关系,其相关系数为-0.489和-0.297。长林4号种仁含油率的GCA最高,达到1.57。各组合的SCA分析表明,含油率SCA为-6.38~4.28,其中含油率SCA高且其余3个性状SCA低的种内杂交组合有40×95和4×18。种间杂交组合含油率的SCA普遍较低,仅53×小2较高,为2.77。除木质素外,含油率、纤维素、半纤维素含量主要受显性效应控制,非加性方差大于加性方差,说明以这3个性状为目标的杂交育种中评估亲本的SCA比GCA更重要。4个性状的单株遗传力范围为10.84%~58.35%,家系遗传力为4.23%~.21.35%,均受到较强的环境效应影响。【结论】以配合力为参考指标,结合各组合的表型数据,选出可用于油茶高含油杂交种质创制的优良种内杂交组合40×95和4×18,种间杂交组合53×小2。 展开更多
关键词 普通油茶 小果油茶 巢式交配设计 油脂性状 配合力 遗传力
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猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法的建立
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作者 于浩洋 王彩霞 +5 位作者 仇松寅 刘晓飞 景宏丽 吴绍强 冯春燕 林祥梅 《中国动物检疫》 CAS 2024年第1期95-101,共7页
猪Linda病毒能引起仔猪先天性震颤,严重危害养猪业的发展,目前在我国暂未发现感染病例。本研究根据猪Linda病毒Core-E~(ms)基因序列,设计并合成巢式RT-PCR引物,通过对退火温度、引物浓度等进行优化,建立了猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方... 猪Linda病毒能引起仔猪先天性震颤,严重危害养猪业的发展,目前在我国暂未发现感染病例。本研究根据猪Linda病毒Core-E~(ms)基因序列,设计并合成巢式RT-PCR引物,通过对退火温度、引物浓度等进行优化,建立了猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法。结果显示,该方法具有良好的特异性,与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应;敏感性好,对慢病毒阳性对照品的最低检出限为10~1 copies/μL,比普通RT-PCR灵敏10倍。使用该方法检测模拟病毒样品,发现最低检出限为10~1 TU/mL,与荧光定量RT-PCR方法一致。本研究首次建立了可检测猪Linda病毒的巢式RT-PCR方法,其特异性强、灵敏度高,为在口岸以及条件有限的场地对猪Linda病毒进行精准且快速的检测提供了有效技术手段,也为防范Linda病毒传入提供了有力技术支撑。 展开更多
关键词 猪Linda病毒 巢式RT-PCR 检测方法 非典型瘟病毒
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犬弓形虫巢式PCR检测方法的建立及初步应用
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作者 柳方远 李双星 +3 位作者 印春生 吉婧 朱明哲 刘业兵 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期129-134,共6页
弓形虫病是一种重要的人兽共患病,犬是弓形虫重要的中间宿主,有必要建立一种快速、灵敏的犬弓形虫病检测方法。根据GenBank中弓形虫529 bp基因重复序列设计巢式PCR引物,通过优化反应条件建立巢式PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方... 弓形虫病是一种重要的人兽共患病,犬是弓形虫重要的中间宿主,有必要建立一种快速、灵敏的犬弓形虫病检测方法。根据GenBank中弓形虫529 bp基因重复序列设计巢式PCR引物,通过优化反应条件建立巢式PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法对牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬新孢子虫的基因扩增无条带;灵敏度试验结果显示,该方法最低可以检出0.134 pg的弓形虫基因,比目前国标PCR方法高100倍。对感染弓形虫犬的组织样品检测发现,巢式PCR能在感染犬的不同组织中检测出弓形虫基因。建立的犬弓形虫巢式PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为该病的检测奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 巢式PCR
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超灵敏高特异性巢式PCR检测方法的建立及其在大黄鱼(Larimichthys crocea)弧菌病早期预警中的应用
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作者 魏雪莲 包红玉 +5 位作者 李继姬 施慧 陶震 段鑫冰 叶莹莹 郭宝英 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1008-1018,共11页
由哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)及溶藻弧菌(V.alginolyticus)等病菌感染导致的弧菌病是大黄鱼养殖中最常见、最具危害性的疾病之一,然而目前针对发病后的遏制手段有限,因此亟待建立高灵敏度、高特异性... 由哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)及溶藻弧菌(V.alginolyticus)等病菌感染导致的弧菌病是大黄鱼养殖中最常见、最具危害性的疾病之一,然而目前针对发病后的遏制手段有限,因此亟待建立高灵敏度、高特异性的病原检测技术以实现病害早期预警。在普通两轮巢式PCR引物的基础上,对这3种弧菌分别设计一套三轮巢式PCR引物,通过扩增条件优化、特异性检验及灵敏度测定,确定了能精准检测3种弧菌的方法,达到了扩增产物单一、参考菌假阳性检出率为0、靶序列最低检出灵敏度分别为2.50 copies/μL(哈维氏弧菌)、3.12 copies/μL(副溶血弧菌)、2.53 copies/μL(溶藻弧菌)等效果。利用开发的检测方法,检测了2021~2023年度浙江、福建一带大黄鱼养殖样本,所有样本均检测出哈维氏弧菌和溶藻弧菌,副溶血弧菌未检出。结果显示浙江、福建一带大黄鱼弧菌病主要是由哈维氏弧菌和溶藻弧菌引起。开发的检测方法有望应用于大黄鱼等养殖物种弧菌病的早期预警和常规检测。 展开更多
关键词 巢式PCR 大黄鱼 弧菌病 病原检测
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糖尿病患者酮症酸中毒危险因素的巢式病例对照研究
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作者 刘晨红 赵英娜 +1 位作者 刘艳存 么颖 《中华急危重症护理杂志》 CSCD 2024年第9期773-778,共6页
目的探讨糖尿病患者酮症酸中毒(diabetic ketoacidosis,DKA)的危险因素。方法选取自2022年起在天津市某三级甲等医院自愿参与糖尿病高血糖危象风险等级评估相关项目的糖尿病患者为研究对象,截至2023年7月发生DKA的患者200例为病例组,按... 目的探讨糖尿病患者酮症酸中毒(diabetic ketoacidosis,DKA)的危险因素。方法选取自2022年起在天津市某三级甲等医院自愿参与糖尿病高血糖危象风险等级评估相关项目的糖尿病患者为研究对象,截至2023年7月发生DKA的患者200例为病例组,按照性别、年龄进行1:1匹配,选择200例随访期间未发生DKA的患者为对照组。采用单因素和多因素Logistic回归模型对糖尿病患者DKA的危险因素进行统计分析。结果病例组中男106例,年龄为(52.14±19.38)岁,对照组中男108例,年龄为(52.17±19.39)岁。多因素Logistic回归显示,住院时间长、有急性感染史、随机血糖高、糖化血红蛋白异常、肝功能异常、肾功能异常的糖尿病患者更易发生DKA;有家族史、饮食规律的糖尿病患者更不易发生DKA。结论家族史、饮食规律性、住院时间、急性感染史、随机血糖、糖化血红蛋白、肝功能、肾功能是发生DKA的影响因素,可为临床工作者早期识别DKA提供参考依据。 展开更多
关键词 糖尿病 酮症酸中毒 危险因素 巢式病例对照研究 护理
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直接巢式PCR结合测序检测5-HT1A基因C-1019G多态性的方法的建立
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作者 王川均 杨玉娟 +1 位作者 何震宇 潘伟 《生物医学》 2024年第4期645-651,共7页
目的:5-HT1A基因C-1019G多态性与多种神经精神疾病如抑郁症、精神分裂症、焦虑症等的发生风险、症状严重程度及治疗效果存在关联。本研究旨在建立一种直接巢式PCR结合测序检测该位点的方法。方法:以口腔上皮细胞粗处理物为材料,通过直... 目的:5-HT1A基因C-1019G多态性与多种神经精神疾病如抑郁症、精神分裂症、焦虑症等的发生风险、症状严重程度及治疗效果存在关联。本研究旨在建立一种直接巢式PCR结合测序检测该位点的方法。方法:以口腔上皮细胞粗处理物为材料,通过直接巢式PCR扩增包含5-HT1A基因C-1019G位点的靶片段,PCR产物经桑格测序鉴定基因型。结果:所检样本均能扩增出预期大小的PCR产物,测序峰图清晰。结论:成功建立了一种直接巢式PCR结合测序鉴定5-HT1A基因型的方法,有良好的应用前景。Objective: The C-1019G polymorphism of the 5-HT1A gene has been associated with the risk of occurrence, symptom severity, and treatment outcome of a variety of neuropsychiatric disorders, such as depression, schizophrenia, and anxiety disorders. The aim of this study was to establish a direct nested PCR combined with sequencing to detect this locus. Methods: The target fragment containing the C-1019G locus of the 5-HT1A gene was amplified by direct nested PCR using crude processed oral epithelial cells, and the PCR product was genotyped by Sanger sequencing. Results: PCR products of expected size were amplified from all the samples tested, and the sequencing peaks were clear. Conclusion: A direct nested PCR combined with sequencing method was successfully established to identify the genotypes of 5-HT1A gene, which has good prospects for application. 展开更多
关键词 5-HT1A基因 C-1019G多态性 直接巢式PCR 测序
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常用IUD脱落或下移不良事件风险因素巢式病例对照研究
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作者 林洁 周健 《中国计划生育学杂志》 2024年第4期755-758,共4页
目的:探讨常用宫内节育器(IUD)发生脱落或下移不良事件的风险因素。方法:采用巢式病例对照研究方法,以2015-2020年参加IUD首诊排查登记且放置数量位为前10位的IUD类型的使用对象为基础建立队列,回顾或前瞻性的收集相应检查结果,其中发生... 目的:探讨常用宫内节育器(IUD)发生脱落或下移不良事件的风险因素。方法:采用巢式病例对照研究方法,以2015-2020年参加IUD首诊排查登记且放置数量位为前10位的IUD类型的使用对象为基础建立队列,回顾或前瞻性的收集相应检查结果,其中发生IUD脱落或下移不良事件的对象994例,按照1∶3的方法匹配对照,采用条件logistic回归模型筛选出发生脱落或下移不良事件的可疑风险因素。结果:IUD类型、剖宫产史、副作用以及哺乳均为影响因素。脱落或下移的风险GCu200(OR=2.01,95%CI 1.36~2.96)、GCu220(OR=1.60,95%CI 1.08~2.37)、OCu200(OR=2.00,95%CI 1.25~3.22)、TCu220C(OR=1.56,95%CI 1.10~2.23)、固定式(OR=2.00,95%CI 1.36~2.95)、活性165(OR=2.43,95%CI 1.62~3.64)、活性γ(OR=1.77,95%CI 1.21~2.59)和元宫200(OR=1.45,95%CI 1.02~2.06)高于活性γ(记忆合金);GCu220(OR=1.67,95%CI 1.07~2.60)和固定式(OR=1.66,95%CI 1.06~2.61)高于HCu280;GCu220(OR=0.66,95%CI 0.45~0.97)、HCu280(OR=0.50,95%CI 0.31~0.79)、TCu220C(OR=0.64,95%CI 0.45~0.92)和元宫200(OR=0.60,95%CI 0.42~0.85)低于活性165;有剖宫产史(OR=1.29,95%CI 1.09~1.52)、置器后发生副作用(OR=3.55,95%CI 2.80~4.49)及哺乳使用者(OR=4.62,95%CI 1.09~19.63)发生脱落或下移的风险增高。结论:应针对风险因素选择适合的IUD种类、型号并重视后期随访,以提高育龄妇女生殖健康水平。 展开更多
关键词 宫内节育器 脱落 下移 风险因素 巢式病例对照研究
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刍议活动性肺结核早期检验中半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法的应用研究
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作者 咸丽 《系统医学》 2024年第2期87-89,109,共4页
目的评估半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的应用效能。方法选取2022年9月—2023年9月于平邑县结核病防治所就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象,采用Xpert MTB/RIF技术、涂片抗酸染色法检验... 目的评估半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的应用效能。方法选取2022年9月—2023年9月于平邑县结核病防治所就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象,采用Xpert MTB/RIF技术、涂片抗酸染色法检验及简单法固体培养法同时检测90例疑似肺结核患者痰标本,对检测结果进行比较。结果以固体培养结果作为金标准,痰培养阳性率85.56%,阴性率14.44%。Xpert MTB/RIF阳性率84.44%、阴性率15.56%。涂片抗酸染色法检验阳性率48.88%、阴性率51.11%。Xpert MTB/RIF检验的灵敏度97.40%、准确度96.67%、阳性预测值98.68%以及阴性预测值85.71%均高于涂片抗酸染色法检验50.64%、52.22%、88.64%、17.39%,差异有统计学意义(χ^(2)=43.768、46.722、5.922、22.546,P均<0.05)。结论与涂片抗酸染色法相比,在活动性肺结核早期检验中采用半巢式全自动实时荧光定量PCR检测(Xpert MTB/RIF)的应用效能更高。 展开更多
关键词 涂片抗酸染色法 活动性肺结核 早期检验 巢式全自动实时荧光定量PCR检测(Xpert MTB/RIF)
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水产养殖巢式设计遗传力计算及其在SPSS上的实现
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作者 高振锟 顾汉东 +1 位作者 和飞 刘超 《黑龙江水产》 2024年第2期205-209,共5页
巢式设计是水产育种中重要的遗传设计之一,其遗传力计算涉及平方和类型的选择、固定模型或随机模型的选择及模型修改等,如果处理因素纳入顺序不对,则通过SPSS图形对话框操作不能完成巢式设计方差分析。文章以教材数据为例,介绍巢式设计... 巢式设计是水产育种中重要的遗传设计之一,其遗传力计算涉及平方和类型的选择、固定模型或随机模型的选择及模型修改等,如果处理因素纳入顺序不对,则通过SPSS图形对话框操作不能完成巢式设计方差分析。文章以教材数据为例,介绍巢式设计方差分析的基本原理,利用SPSS软件中对话框粘贴程序进行编程,并通过一般线性模型过程进行方差组分估计及遗传力计算操作演示,并对模型选择、平方和类型选择及巢式设计方差分析SPSS编程的必要性等进行讨论说明,可为教学和科研提供实践参考。 展开更多
关键词 巢式设计 遗传力 平方和类型 模型修改 SPSS软件
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乌鳢水泡病毒(SHVV)巢式PCR检测方法的建立与应用
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作者 娄剑锋 公翠萍 +3 位作者 肖自东 刘晓丹 胡大雁 劳顺健 《科学养鱼》 2024年第1期57-59,共3页
巢式PCR是建立在普通PCR方法基础之上的一种改进型方案,广泛用于病毒基因的检测。但是,目前还没有建立巢式PCR检测乌鳢水泡病毒的报道。本研究通过获取感染乌鳢水泡病毒的杂交鳢组织,获得病毒的相关基因,利用巢式PCR相关技术,通过体系... 巢式PCR是建立在普通PCR方法基础之上的一种改进型方案,广泛用于病毒基因的检测。但是,目前还没有建立巢式PCR检测乌鳢水泡病毒的报道。本研究通过获取感染乌鳢水泡病毒的杂交鳢组织,获得病毒的相关基因,利用巢式PCR相关技术,通过体系的建立和反应程序的优化,建立一种检测乌鳢水泡病毒的方法,为及时发现并快速诊断乌鳢水泡病毒提供一项重要的技术手段。 展开更多
关键词 巢式PCR 病毒基因 反应程序 乌鳢 快速诊断 普通PCR 杂交鳢 检测方法
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城镇成年居民静态行为与心血管事件关系的巢式对照研究
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作者 王振伟 李怡洒 司念 《菏泽医学专科学校学报》 2024年第1期75-79,共5页
目的 采用巢式对照研究法分析城镇成年居民静态行为与心血管事件的关系。方法 按照巢式对照研究法,选取2018年4月—2021年4月本市常住城镇成年居民3053人作为研究队列予以随访跟踪,随访截止时间为2022年4月,将队列内发生心血管事件的患... 目的 采用巢式对照研究法分析城镇成年居民静态行为与心血管事件的关系。方法 按照巢式对照研究法,选取2018年4月—2021年4月本市常住城镇成年居民3053人作为研究队列予以随访跟踪,随访截止时间为2022年4月,将队列内发生心血管事件的患者82例作为不良事件组,以1:5的比例匹配未发生心血管事件者410例进行对照,作为无事件组。收集两组一般资料,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血红蛋白(Hb)、血钙、血磷及空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)水平与收缩压(SBP)、舒张压(DBP),分析静态行为时间与相关指标的关系。利用多因素Logistic回归分析方法,分析城镇成年居民静态行为与心血管事件之间的关系。结果 不良事件组BMI及TC、TG、LDL-C、FPG、HbAlc、SBP、DBP水平高于无事件组,HDL-C水平低于无事件组(P<0.05)。不良事件组静态行为时间≤2 h/d、(2~4)h/d的占比分别为10.98%、15.85%,低于无事件组的36.83%、32.20%,且不良事件组静态行为时间(4~6)h/d、>6 h/d的占比分别为25.61%、47.56%,高于无事件组的12.93%、18.05%(P<0.05)。患者静态行为时间与BMI、TC、TG、LDL-C、FPG、HbAlc、SBP、DBP呈正相关(r=0.535、0.402、0.431、0.406、0.638、0.796、0.671、0.609,P <0.05),与HDL-C呈负相关(r=-0.418,P <0.05)。通过分析显示,与静态行为时间≤2h/d者相比,(2~4)h/d、(4~6)h/d、>6 h/d者的心血管事件发生风险增高(OR=1.985、2.688、4.680,P均<0.05)。结论 城镇成年居民静态行为时间越长,发生心血管事件风险越高,以静态行为超过2h/d时,心血管事件发生风险有所增高,超过6h/d时明显增高,且其与BMI、血脂、血糖、血压水平存在相关性。 展开更多
关键词 城镇成年居民 静态行为 心血管事件 巢式对照研究 血脂 血糖
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巢式PCR技术在输入性疟疾监测中的应用 被引量:25
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作者 周水茂 王重新 +2 位作者 吴凯 毛重喜 杨燕 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期43-45,共3页
目的评价巢式PCR技术在高疟区回国人员疟疾监测中的应用价值。方法收集2007-2009年自非洲、东南亚等疟疾流行区回国人员中疟疾现症患者及其他无症状高危人群的滤纸血,采用巢式PCR技术检测疟原虫ssRNA基因,并与血片镜检结果进行比对。结... 目的评价巢式PCR技术在高疟区回国人员疟疾监测中的应用价值。方法收集2007-2009年自非洲、东南亚等疟疾流行区回国人员中疟疾现症患者及其他无症状高危人群的滤纸血,采用巢式PCR技术检测疟原虫ssRNA基因,并与血片镜检结果进行比对。结果巢式PCR检测53例血检确诊的疟疾现症患者均为阳性,两法的阳性符合率为100%,其中PCR检出恶性疟、间日疟混合感染6例,高于镜检检出的3例。检测疟疾流行区返回的高危人群157人,镜检阳性3例,阳性率1.91%;巢式PCR阳性5例,阳性率为3.18%;其中,镜检阳性、巢式PCR阴性的1例,镜检阴性、巢式PCR阳性的3例,两种方法的阳性符合率为66.7%,阴性符合率为98.1%,两法检测结果一致的血样占检测血样的97.5%。结论巢式PCR技术对输入性疟疾的监测具有实用价值。 展开更多
关键词 输入性疟疾 巢式PCR 回国人员
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巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究 被引量:20
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作者 张龙现 蒋金书 +3 位作者 刘群 宁长申 朱引洁 吴绍强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期509-514,共6页
隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵... 隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR(Primary PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325bp和820bp。优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验。建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2 86×103个/ml和≤2 86个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化,其起始PCR和巢式PCR粪便中卵囊最低检测值分别为2 86×107个/g和≤2 86个/g。有望发展为试剂盒。 展开更多
关键词 巢式PCR检测 隐孢子虫卵囊 人畜共患原虫病 临床样品 纯化 数量 奶牛粪便
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利用巢式PCR对海南槟榔(Areca catechu L.)黄化病的初步检测 被引量:19
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作者 周亚奎 甘炳春 +4 位作者 张争 隋春 魏建和 杨云 杨新全 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第22期381-384,共4页
通过对海南槟榔黄化病病原的研究,初步确定其病原物,对开展后续研究及防治策略提供依据。利用巢式PCR方法,对在海南3个市县采集的28个黄化病植株的不同组织进行了植原体检测,结果表明:在2个市县9个槟榔黄化病病株叶片中检测到了植原体,... 通过对海南槟榔黄化病病原的研究,初步确定其病原物,对开展后续研究及防治策略提供依据。利用巢式PCR方法,对在海南3个市县采集的28个黄化病植株的不同组织进行了植原体检测,结果表明:在2个市县9个槟榔黄化病病株叶片中检测到了植原体,而在根和茎中没有发现植原体。将扩增片段克隆后测序得到1249bp的完整植原体序列。利用MEGA3软件构建了系统发育进化树,同源性聚类发现其属于翠菊黄花组B亚组。初步判断发生在海南的槟榔黄化病是由于植原体引起。 展开更多
关键词 槟榔 黄化病 植原体 巢式PCR
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血清学指标联合小儿危重病例评分和Brighton儿童早期预警评分预测脓毒症患儿死亡的巢式病例对照研究 被引量:40
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作者 卢艳辉 刘振奎 +5 位作者 李世阳 王艳飞 李春梅 袁二伟 邢静 郭卫平 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2019年第15期1800-1806,共7页
背景脓毒症患儿在发病初期因临床表现缺乏特异性,常延误最佳治疗时机导致其预后不佳,病死率较高。此外,脓毒症患儿的一些临床症状常与其他疾病的症状相似,这无疑又增加了脓毒症的误诊率。早期确诊是改善脓毒症患儿并发症导致死亡的最有... 背景脓毒症患儿在发病初期因临床表现缺乏特异性,常延误最佳治疗时机导致其预后不佳,病死率较高。此外,脓毒症患儿的一些临床症状常与其他疾病的症状相似,这无疑又增加了脓毒症的误诊率。早期确诊是改善脓毒症患儿并发症导致死亡的最有效方法,因此,本研究旨在探索一种更精确的评估脓毒症患儿死亡的指标。目的评估血清学指标联合小儿危重病例评分(PCIS)、Brighton儿童早期预警评分(PEWS)预测脓毒症患儿死亡的价值。方法选取2015年12月—2016年12月在河北北方学院附属第一医院确诊的脓毒症患儿205例为研究对象。收集患儿一般资料、血清学指标及PCIS、Brighton PEWS。以入院确诊脓毒症/严重脓毒症为起点,死亡或出院为终点,采用巢式病例对照研究方法,将研究期间发生死亡的患儿定义为试验组。另外,每当队列内出现1例患儿死亡时,在该队列尚未死亡的患儿中按1∶1匹配同步选取性别、年龄(<3岁)、原发感染部位等条件相近或相同的患儿作为对照组。患儿死亡影响因素分析采用多因素Logistic回归分析;采用ROC曲线分析降钙素原(PCT)、清蛋白(Alb)、PCIS、Brighton PEWS预测脓毒症患儿死亡的价值。结果根据巢式病例对照研究设计最终共选出94例脓毒症患儿进行分析,试验组47例,对照组47例,病死率为22.9%。试验组1 h内应用抗菌药率、电解质紊乱发生率、休克发生率、MODS受累器官个数、PCT、Brighton PEWS大于对照组,机械通气时间长于对照组,Alb、PCIS小于对照组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,1 h内应用抗菌药〔OR=1.795,95%CI(1.723,1.870)〕、休克〔OR=1.673,95%CI(1.299,2.154)〕、MODS受累器官个数〔OR=2.132,95%CI(1.507,3.016)〕、PCT〔OR=1.392,95%CI(1.336,1.450)〕、PCIS〔OR=0.553,95%CI(0.477,0.641)〕、Brighton PEWS〔OR=2.536,95%CI(2.268,2.836)〕是脓毒症患儿死亡的影响因素(P<0.05)。Alb联合PCIS、Brighton PEWS预测脓毒症患儿死亡的AUC分别高于其单独预测脓毒症患儿死亡的AUC(P<0.05)。结论 Alb联合PCIS、Brighton PEWS对脓毒症患儿死亡有较好的预测能力,有望作为临床早期预测脓毒症患儿死亡的辅助指标之一。 展开更多
关键词 脓毒症 死亡 预测 血清学指标 小儿危重病例评分 Brighton儿童早期预警评分 巢式病例对照研究
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巢式PCR法在疟疾检测及虫种鉴别中的应用 被引量:20
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作者 师永霞 黄吉城 +5 位作者 苏锦坤 洪烨 李小波 郑夔 幸芦琴 郭波旋 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期263-266,共4页
根据疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸(SSU rRNA)基因序列设计疟原虫通用型和种特异性的引物,对60份血样进行巢式PCR检测及虫种鉴定,并与血样的吉氏染色镜检结果进行比较。巢式PCR检出40份疟原虫阳性血样,其中22份为恶性疟原虫(Plasmodium ... 根据疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸(SSU rRNA)基因序列设计疟原虫通用型和种特异性的引物,对60份血样进行巢式PCR检测及虫种鉴定,并与血样的吉氏染色镜检结果进行比较。巢式PCR检出40份疟原虫阳性血样,其中22份为恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)阳性、13份为间日疟原虫(P.vivax)阳性、3份为恶性疟原虫和间日疟原虫混合感染、1份为卵形疟原虫阳性(P.ovale)、1份未能分型。与镜检结果一致的血样为46份,占76.7%(46/60),其中恶性疟原虫阳性18份、间日疟原虫阳性11份和阴性17份。将两种检测结果不一致的血样进行扩增片段序列测定和实时荧光PCR分析,检测结果均与巢式PCR结果一致。卵形疟原虫阳性血样扩增片段的序列分析结果显示,该序列与卵形疟原虫SSU rRNA基因序列(GenBank登录号DQ845247)的对应部分同源性为100%,证实该病例为输入性卵形疟原虫感染病例。 展开更多
关键词 疟疾 巢式PCR 小亚单位核糖体核糖核酸
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引物浓度与退火温度不当导致巢式PCR非特异性扩增 被引量:17
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作者 刘阳 杨淑霞 +4 位作者 李敏惠 李丽梅 胡松 刘进 邹强 《成都医学院学报》 CAS 2008年第2期111-114,共4页
目的探索巢式PCR非特异性扩增的产生原因及消除方法。方法以巢式PCR扩增乙型肝炎病毒(HBV)Sgene为模型,分别使用不同退火温度组合与不同引物浓度组合进行巢式PCR扩增,观察并分析实验结果。结果降低引物浓度或提高退火温度均可消除巢式PC... 目的探索巢式PCR非特异性扩增的产生原因及消除方法。方法以巢式PCR扩增乙型肝炎病毒(HBV)Sgene为模型,分别使用不同退火温度组合与不同引物浓度组合进行巢式PCR扩增,观察并分析实验结果。结果降低引物浓度或提高退火温度均可消除巢式PCR的非特异性扩增,但提高退火温度有可能影响反应的扩增效率,导致产物量下降甚至得不到产物。结论巢式PCR发生非特异性扩增时,可以提高退火温度或降低引物浓度对反应体系进行优化。 展开更多
关键词 巢式PCR HBV S GENE 非特异性扩增
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孕产妇不良妊娠结局危险因素的巢式病例对照研究 被引量:31
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作者 黄莉 张莉 +8 位作者 李洪艳 谭珊 高晓 向仕婷 熊昌辉 易娟 林玲 李迪民 颜艳 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第9期106-109,共4页
目的探讨孕产妇不良妊娠结局的危险因素。方法采用巢式病例对照研究,将明确诊断为不良妊娠结局的44例孕产妇纳入病例组,按1:4频数匹配,随机抽取年龄和文化程度基本匹配而无不良妊娠结局的176例孕产妇纳入对照组,分析影响孕产妇不良妊... 目的探讨孕产妇不良妊娠结局的危险因素。方法采用巢式病例对照研究,将明确诊断为不良妊娠结局的44例孕产妇纳入病例组,按1:4频数匹配,随机抽取年龄和文化程度基本匹配而无不良妊娠结局的176例孕产妇纳入对照组,分析影响孕产妇不良妊娠结局发生的相关危险因素。结果湖南省长沙市不良妊娠结局的发生率为9.24%。多因素非条件Logistic回归分析结果显示:流产史(^OR=2.552,95%CI:1.278~5.097)、贫血(^OR=3.857,95%CI:1.610~9.243)和被动吸烟(^OR=2.730,95%CI:1.382~5.391)是不良妊娠结局的危险因素。结论湖南省长沙市不良妊娠结局的发生率处于中下水平。不良妊娠结局是多因素综合作用的结果,流产史、贫血和被动吸烟可能与不良妊娠结局有关,应加强产前健康教育,促进孕产妇养成良好的生活行为习惯和合理的饮食习惯,预防不良妊娠结局的发生。 展开更多
关键词 不良妊娠结局 危险因素 巢式病例对照研究
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