抗肺炎链球菌工程多肽抗菌活性研究

目的检测制备纯化的抗肺炎链球菌工程多肽(Ph-SP)的体内外抗菌活性。方法将重组质粒转化入工程菌TG 1表达工程多肽(Ph-SP),经离子交换柱纯化后,通过体外抗菌试验和体内感染保护试验检测其抗菌活性。结果体内外抗菌实验结果显示工程多肽(Ph-SP)对肺炎链球菌有较强的杀菌效力。按标化相对分子质量换算,分别是青霉素及万古霉素抗菌效力的200倍和50倍。结论构建的Ph-SP在体外及体内都呈现出对肺炎链球菌的靶向杀伤活性,为临床治疗肺炎链球菌感染提供了新的思路和发展方向,具有临床应用潜力。

抗金黄色葡萄球菌工程多肽体内外抗菌活性研究

目的 评价我室制备的抗金黄色葡萄球菌工程多肽 (Ph- SA)对耐甲氧西林 /苯唑西林金黄色葡萄球菌 (MRSA )的体内外抗菌活性。方法 采用琼脂二倍稀释法测定 Ph- SA对 6 9株临床分离病原菌的最小抑菌浓度(minim al inhibitory concentration,MIC) ;采用腹腔感染后经尾静脉注射药物方法测定 Ph- SA及对照药物对小鼠的体内保护作用。结果 体外抗菌试验结果显示 Ph- SA对金黄色葡萄球菌呈现强抗菌作用 ,对金黄色葡萄球菌的甲氧西林 /苯唑西林耐药株和敏感株的 MIC50 分别为 8mg/L 和 0 .5 mg/L,按相对分子质量差异换算 ,强于万古霉素 12倍和 4 8倍 ;体内抗菌试验结果显示 :Ph- SA对 MRSA菌株 ATCC BAA- 4 2抗菌效力极强 ,按相对分子质量差异换算 ,至少强于万古霉素 5 9倍。结论 Ph- SA对耐甲氧西林 /苯唑西林金黄色葡萄球菌体内外均呈现极强的抗菌活性 ,具有潜在的临床应用价值。

抗肺炎链球菌工程多肽的制备研究

目的:制备和纯化抗肺炎链球菌工程多肽(Ph-SP)。方法:将重组质粒转化入工程菌TGl表达工程多肽,经透析、离子交换柱纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白,微平板法测定蛋白浓度。结果:经透析、离子交换柱纯化后可获得较为单一的目的蛋白,蛋白浓度为0.18mg/ml。结论:本文的操作流程可以获得相对单一的目的蛋白。

抗耐药金黄色葡萄球菌工程多肽—一种人工构建的抗菌蛋白质分子机器

目的 将两个不同种来源 ,不同生物活性的蛋白质结构域构建成为一种具有靶向抗菌活性的工程多肽。方法 利用质粒重组 ,将金黄色葡萄球菌 Agr D信息素 (8肽 )基因连接在大肠菌素 Ia水性孔道结构域 (K5 4 4 -I6 2 6 )羧基端基因上 ,将重组的质粒转化入工程菌生产构建的工程多肽 ,离子交换柱纯化后经体外抗菌试验检测其抗菌活性。结果 构建的工程多肽具有强于青霉素类抗生素上百倍的抗耐药金黄色葡萄球菌的活性。结论 构建的工程多肽表现出了两个结构域前体都不具备的靶向抗金黄色葡萄球菌活性 。

进一步加快基因工程产品产业化步伐

1996年,上海将有6个基因工程产品进入产业化;2000年,则有7～8个基因工程产品出台,年销售额可望达到7亿元。基因工程产品附加价值很高,故而发展竞争激烈——北方的北京、长春、天津和哈尔滨,南方的深圳、珠海和中山等地紧锣密鼓地发展基因工程产品的研制开发,气势咄咄逼人,美国、古巴、立陶宛等国的基因工程药物业已进入中国市场。时不我待,要抢滩前景看好的国内外市场,上海就应——

Ph-SA对金黄色葡萄球菌δ溶血素分泌影响的初步研究

目的 通过检测Ph- SA作用后,金黄色葡萄球菌δ溶血素分泌的变化,初步探究Ph- SA的作用机理。方法 实验分未处理、Ph- SA处理、青霉素处理三组,当菌的光吸收值A595达到0 .2时,加入相应的药物,分时段采集样品,用高效液相色谱法检测样品中δ溶血素的分泌量。结果 同一时间点比较,Ph- SA处理组δ溶血素分泌量明显低于其他两组(P均<0 .0 5 )。结论 Ph- SA除了形成孔道杀菌外,还可能具有抑制agr系统而降低细菌外毒素分泌的作用。

重组融合蛋白Ph-PA对绿脓杆菌体内体外抗菌活性的初步研究

目的制备和纯化抗绿脓杆菌工程多肽Ph-PA,并检测其对绿脓杆菌的体内外抗菌活性。方法经离子交换柱纯化收集Ph-PA后,通过体外抗菌试验和体内感染保护试验并与现有抗生素对比,检测其抗菌活性。结果体内外抗菌实验结果显示Ph-PA对绿脓杆菌有较强的抗菌作用,且表现出相对的靶向特异性,对绿脓杆菌ATCC27853的最小抑菌浓度(MIC)为4μg/mL。按照相同相对分子质量进行标化后比较,Ph-PA的抗菌活性至少是哌拉西林的2200倍,头孢他啶的220倍。结论Ph-PA在体外及体内对绿脓杆菌都表现出较强的抗菌活性,为治疗绿脓杆菌感染提供了新的思路,具有临床应用潜力。

抗真菌肽CGA-N46基因多顺反子表达载体的构建与鉴定

目的:为提高抗真菌肽CGA-N46表达量,对该基因多顺反子表达进行研究。方法:以pEASY-Blunt为克隆载体,以"pET-30a rbs序列-起始密码子-CGA-N46编码序列-终止密码子"为外源片段,利用同尾酶Nhe I、Spe I和Xba I,构建了含有上述外源片段1、3、5、8拷贝的重组载体pT-CAN46、pT-3CAN46、pT-5CAN46和pT-8CAN46;将pEASY-Blunt上的外源基因片段亚克隆至pET-30a的rbs序列下游,构建了CGA-N46基因1、3、5、8顺反子的重组表达载体pET-CAN46、pET-3CAN46、pET-5CAN46和pET-8CAN46;利用感受态转化法转化大肠杆菌Rosetta,进行了表达研究。结果:在IPTG诱导下,CGA-N46基因1、3、5、8顺反子重组表达载体均能表达CGA-N46单体,各重组表达载体表达CGA-N46的量在总蛋白中的百分含量分别为3.4%、5.0%、12.4%、17.1%。结果表明随着CGA-N46基因顺反子个数的增加,外源蛋白表达量也越来越多。其中,8顺反子表达量最高,实现了CGA-N46的高效表达。结论:多顺反子表达可以克服融合表达和串联表达肽类蛋白的不足;创建的多顺反子表达载体构建方法简化了传统基因工程构建方法的步骤,为基因工程有效提高小肽表达量奠定了基础。

细胞产品国家工程研究中心

细胞产品国家工程研究中心依托于中国医学科学院血液学研究所及所属泰达生命科学技术研究中心，主要从事细胞治疗产品、体内外分离与扩增干细胞、基因工程多肽药物等方面的研究开发，旨在加速干细胞工程技术开发及基因工程药物的科研成果向现实生产力转化。

浦东开发一月要闻

浦东开发一月要闻１９９６年５月１６日～６月１５日本刊记者曲辰１６日：浦东新区管委会和上海市经委联合举行在浦东的中央、市属工业企业座谈会，研究如何利用浦东的功能性政策和新一轮开发机遇，推进国有大中企业发展。交通银行浦东分行提供２６００万美元贷款，用于座...