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利用工程大肠杆菌生产不同类型的游离脂肪酸 被引量:4
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作者 李玲玲 刘强 +2 位作者 郑艳宁 秦文 咸漠 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期158-162,共5页
游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对食品风味能够产生重要的影响,生产更多类型的FFAs能够更好的满足食品工业的需求。通过在大肠杆菌(E.coli)中分别过量表达7种不同的硫酯酶基因,7个用于生产FFAs的重组菌株被成功构建。并对重组菌株的... 游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对食品风味能够产生重要的影响,生产更多类型的FFAs能够更好的满足食品工业的需求。通过在大肠杆菌(E.coli)中分别过量表达7种不同的硫酯酶基因,7个用于生产FFAs的重组菌株被成功构建。并对重组菌株的FFAs生产条件进行了优化,确定最佳的培养条件为:以15g/LNa2HPO4和7.5g/LKH2PO4作为培养基中的磷酸盐浓度,采用0.25mmol/L的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)在30℃进行诱导培养。在优化的培养条件下,7个重组菌株的FFAs通过气相色谱(GC)进行了定性和定量分析。结果显示,过量表达BTE、AtFatA、‘tesA的重组菌株LL1、LL2、LL4均显著提高了FFAs的产量,其中LL1取得了346.4mg/L最高的FFAs产量。进一步对LL1、LL2、LL4的FFAs组成进行分析表明,BTE、AtFatA、‘TesA具有不同的底物特异性,能够用来生产C12~C18等不同链长和饱和度的FFAs。因此,通过微生物代谢工程可以获得天然动植物油脂中不存在的更多类型的FFAs。 展开更多
关键词 游离脂肪酸 工程大肠杆菌 硫酯酶
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大肠杆菌工程菌利用玉米浆发酵产L-乳酸的研究 被引量:6
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作者 李坤朋 许雅洁 +1 位作者 赵锦芳 王金华 《中国酿造》 CAS 2012年第12期64-67,共4页
在以玉米浆为有机氮源,葡萄糖结晶废糖液为碳源的发酵培养基上对大肠杆菌工程菌HBUT-L进行了4L发酵产L-乳酸研究,确定了HBUT-L在玉米浆发酵培养基中能生长,并且可高效快速地将葡萄糖发酵转化成L-乳酸。乳酸产量达到108.3g/L,50h内发酵结... 在以玉米浆为有机氮源,葡萄糖结晶废糖液为碳源的发酵培养基上对大肠杆菌工程菌HBUT-L进行了4L发酵产L-乳酸研究,确定了HBUT-L在玉米浆发酵培养基中能生长,并且可高效快速地将葡萄糖发酵转化成L-乳酸。乳酸产量达到108.3g/L,50h内发酵结束,L-乳酸光学纯度在99%以上,糖酸转化率在97%以上,产率为2.16g(/L.h),是无机盐发酵培养基产率的79.7%。为HBUT-L利用玉米浆发酵产L-乳酸,降低生产成本及其工业化提供参考。 展开更多
关键词 大肠杆菌工程 玉米浆 发酵 L-乳酸
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基因敲除提高大肠杆菌工程菌生产异丁醇产量的研究 被引量:5
3
作者 郭媛 林丽华 +3 位作者 郭玲 庞浩 彭建新 黄日波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期170-175,共6页
探究pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株对大肠杆菌工程菌发酵生产异丁醇的影响。运用Red重组系统敲除大肠杆菌BW25113的pflB、frdAB、fnr和AdhE基因,构建pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株E.coliBW25113H,结合本实验室已经... 探究pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株对大肠杆菌工程菌发酵生产异丁醇的影响。运用Red重组系统敲除大肠杆菌BW25113的pflB、frdAB、fnr和AdhE基因,构建pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株E.coliBW25113H,结合本实验室已经构建的表达质粒pSTV29-alsS-ilvC-ilvD-kdcA,并检测该工程菌在1L发酵罐的发酵过程中的生物量、突变菌株的稳定性、异丁醇产量及有机酸含量的变化情况。成功获得pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株BW25113H。发酵结果表明,该工程菌能以较长时间,较高比生长速率保持对数生长期,其稳定性较好,异丁醇产量增加了40%。成功构建pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株BW25113H,结合非自身发酵途径使异丁醇的产量由3 g/L提升至4.2 g/L。 展开更多
关键词 大肠杆菌工程 基因敲除 异丁醇 非发酵途径 RED重组系统
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大肠杆菌工程菌利用甘蔗糖蜜发酵产L-乳酸研究 被引量:5
4
作者 赵锦芳 薛葳蕤 +2 位作者 张晓敏 王永泽 王金华 《湖北农业科学》 2016年第24期6541-6545,共5页
大肠杆菌HBUT-L来源于HBUT-D,因此具有快速利用蔗糖的特性。对HBUT-L利用蔗糖及甘蔗糖蜜发酵产L-乳酸的特性进行了研究。结果表明,该菌株在96 h的发酵过程中,可将100 g/L的蔗糖转化生成60.0 g/L乳酸,转化率达到74.0%,杂酸产量少,具有工... 大肠杆菌HBUT-L来源于HBUT-D,因此具有快速利用蔗糖的特性。对HBUT-L利用蔗糖及甘蔗糖蜜发酵产L-乳酸的特性进行了研究。结果表明,该菌株在96 h的发酵过程中,可将100 g/L的蔗糖转化生成60.0 g/L乳酸,转化率达到74.0%,杂酸产量少,具有工业化开发潜力。在玉米浆培养基中可以直接添加未经处理的甘蔗糖蜜,发酵周期持续224 h,发酵液所得乳酸产量为87.0 g/L,发酵液残糖为28.6 g/L,但乳酸产率极低,仅为0.389 g/(L·h),后续将对甘蔗糖蜜预处理工艺进行研究,进一步提高乳酸发酵速度和产量。 展开更多
关键词 大肠杆菌工程 甘蔗糖蜜 发酵 L-乳酸
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D-乳酸大肠杆菌工程菌的驯化及其补料发酵研究 被引量:4
5
作者 文瑶 周玮 +3 位作者 付相敏 赵筱 王金华 王永泽 《湖北农业科学》 2016年第18期4771-4775,共5页
以前期构建的D-乳酸大肠杆菌(Escherichia coli)工程菌LHY02为出发菌株,通过在乳酸盐中对菌株进行驯化的方式来解除乳酸根对菌体的抑制作用;采用葡萄糖分批补加方式缓解高含量葡萄糖的阻遏效应,拟进一步提高大肠杆菌发酵产D-乳酸的产量... 以前期构建的D-乳酸大肠杆菌(Escherichia coli)工程菌LHY02为出发菌株,通过在乳酸盐中对菌株进行驯化的方式来解除乳酸根对菌体的抑制作用;采用葡萄糖分批补加方式缓解高含量葡萄糖的阻遏效应,拟进一步提高大肠杆菌发酵产D-乳酸的产量、生产强度和糖酸转化率。结果表明,驯化后的菌株LHY201在16%的葡萄糖发酵中D-乳酸产量比驯化前提高了36.7%。LHY201结合葡萄糖进行补料发酵(补料方式为8%+8%+4%),乳酸产量、发酵时间、糖酸转化率以及生产强度分别为185.7 g/L、48 h、93.8%、3.87 g/L/h,D-乳酸光学纯度达到99.6%,相比一次性添加20%葡萄糖的分批发酵,乳酸产量和糖酸转化率分别提高了21.1%和21.2%,发酵周期缩短了一半。 展开更多
关键词 大肠杆菌工程 D-乳酸 驯化 补料发酵
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CGA-N46基因大肠杆菌工程菌的构建与表达 被引量:2
6
作者 李瑞芳 薛雯雯 《科学技术与工程》 2008年第15期4055-4059,共5页
嗜铬粒蛋白N端31-76位氨基酸组成的多肽CGA-N46具有很强的抑制白念珠菌活性,具有重要的研究价值。通过基因工程技术构建了能表达CGA-N46蛋白的大肠杆菌工程菌BL21(DE3,pET-N46),诱导表达后,进行SDS-PAGE及western-blotting。结果表明在I... 嗜铬粒蛋白N端31-76位氨基酸组成的多肽CGA-N46具有很强的抑制白念珠菌活性,具有重要的研究价值。通过基因工程技术构建了能表达CGA-N46蛋白的大肠杆菌工程菌BL21(DE3,pET-N46),诱导表达后,进行SDS-PAGE及western-blotting。结果表明在IPTG诱导下,CGA-N46蛋白基因在BL21(DE3,pET-N46)中获得表达,表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在。 展开更多
关键词 嗜铬粒蛋白 CGA-N46 大肠杆菌工程 构建 表达
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大肠杆菌氨基酰化酶工程菌的固定化研究 被引量:1
7
作者 胡家俊 刘志刚 +3 位作者 刘英 杨波 胡征 潘华珠 《化学与生物工程》 CAS 2010年第10期55-58,共4页
分别以聚乙烯醇(PVA)、海藻酸钠(SA)及PVA-SA为固定化载体对大肠杆菌氨基酰化酶工程菌进行固定。结果表明,PVA-SA固定化凝胶颗粒具有较好的机械强度和稳定性。确定PVA-SA的最佳包埋条件如下:PVA质量分数为8%、SA质量分数为1%、固定剂为p... 分别以聚乙烯醇(PVA)、海藻酸钠(SA)及PVA-SA为固定化载体对大肠杆菌氨基酰化酶工程菌进行固定。结果表明,PVA-SA固定化凝胶颗粒具有较好的机械强度和稳定性。确定PVA-SA的最佳包埋条件如下:PVA质量分数为8%、SA质量分数为1%、固定剂为pH值6.7的3%硼酸-1%氯化钙,此条件下制备的固定化细胞的酶回收率为91.46%。固定化细胞于4℃保存7 d、再室温保存14 d后,其酶活力为初始对照的90.76%,而游离细胞只有初始对照的29.69%。 展开更多
关键词 大肠杆菌氨基酰化酶工程 固定化细胞 酶活力
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中和剂对大肠杆菌工程菌HBUT-L16发酵产L-乳酸的影响
8
作者 文瑶 周玮 +2 位作者 刘枣 王永泽 王金华 《中国酿造》 CAS 北大核心 2016年第9期43-46,共4页
该文对前期构建的产高光学纯度L-乳酸的大肠杆菌工程菌HBUT-L进行了耐乳酸钠的驯化,并对驯化前后菌株发酵产L-乳酸的中和剂进行了选择和对比。结果表明,经过28代驯化后的菌株HBUT-L16以Ca(OH)_2 作中和剂时发酵效果较Na OH为中和剂时效... 该文对前期构建的产高光学纯度L-乳酸的大肠杆菌工程菌HBUT-L进行了耐乳酸钠的驯化,并对驯化前后菌株发酵产L-乳酸的中和剂进行了选择和对比。结果表明,经过28代驯化后的菌株HBUT-L16以Ca(OH)_2 作中和剂时发酵效果较Na OH为中和剂时效果好,L-乳酸产量、糖酸转化率及生产强度分别提高了6.6%、5.6%、44.4%。与驯化前菌株HBUT-L的发酵结果相比,HBUT-L16以Ca(OH)_2 为中和剂进行发酵时,乳酸产量提高了4.4%,糖酸转化率提高了2.8%,生产强度增加了26.71%;而以Na OH为中和剂时,对驯化前后菌株的发酵效果影响不大,由此推测耐乳酸钠的驯化主要通过提高工程菌对乳酸根的耐受性而非钠离子的耐受性,来提高L-乳酸的产量。 展开更多
关键词 大肠杆菌工程 工广乳酸 驯化 中和剂
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重组大肠杆菌产耐高温β-糖苷酶发酵条件优化
9
作者 卢楠 冯惠勇 王立晖 《河北工业科技》 CAS 2013年第1期54-59,共6页
β-糖苷酶ttβGLY是Thermus thermophilus产生的一种耐高温酶,该酶具有较高的乳糖水解活性和转糖基活性。通过对重组大肠杆菌发酵生产β-糖苷酶ttβGLY条件的研究发现,优化后的培养基组成如下:蛋白胨14g/L,酵母粉7g/L,乳清13.3g/L,NaCl ... β-糖苷酶ttβGLY是Thermus thermophilus产生的一种耐高温酶,该酶具有较高的乳糖水解活性和转糖基活性。通过对重组大肠杆菌发酵生产β-糖苷酶ttβGLY条件的研究发现,优化后的培养基组成如下:蛋白胨14g/L,酵母粉7g/L,乳清13.3g/L,NaCl 10g/L,KH2PO43g/L,K2HPO45g/L,MgSO4.7H2O 1g/L。种子培养基组成如下:蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,葡萄糖4g/L,NaCl 10g/L,CaCO35g/L。种龄12h,接种量8%,装量40mL/250mL三角瓶,于37℃发酵24h,菌体干重10.010g/L,酶活可达2.384U/mL,分别是优化前的4.4倍和2.4倍。 展开更多
关键词 基因工程大肠杆菌 β-糖苷酶 培养基 发酵条件 优化
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孕猪应用大肠杆菌基因工程苗和恩诺沙星预防仔猪腹泻 被引量:3
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作者 肖国敏 杨昌武 +1 位作者 周庆海 裴才荣 《畜牧与兽医》 北大核心 2000年第4期27-27,共1页
关键词 仔猪腹泻 大肠杆菌基因工程疫苗 恩诺沙星 孕猪
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孕母猪口服大肠杆菌工程苗预防仔猪黄白痢的效果 被引量:1
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作者 崔焕磷 谢灯养 《广东畜牧兽医科技》 1995年第1期34-35,共2页
孕母猪口服大肠杆菌工程苗预防仔猪黄白痢的效果崔焕磷,谢灯养(广三保养猪有限公司广州510640)诱导仔猪发生黄、白痢的原因诸多,例如:母猪免疫抗体水平低,营养不良,采食霉变饲料,环境卫生差,产房的温度、湿度过高或过低... 孕母猪口服大肠杆菌工程苗预防仔猪黄白痢的效果崔焕磷,谢灯养(广三保养猪有限公司广州510640)诱导仔猪发生黄、白痢的原因诸多,例如:母猪免疫抗体水平低,营养不良,采食霉变饲料,环境卫生差,产房的温度、湿度过高或过低等等,都会引起仔猪消化系统机能紊乱... 展开更多
关键词 孕母猪 大肠杆菌工程 仔猪 黄白痢 预防 猪病
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高产琥珀酸重组大肠杆菌的构建及厌氧发酵 被引量:2
12
作者 赵锦芳 华渤文 +2 位作者 王永泽 赵筱 王金华 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期6-10,共5页
以野生型大肠杆菌Escherichia coli W为出发菌株,利用Red同源重组系统分别敲除了乳酸脱氢酶基因(ldhA)、乙醇脱氢酶基因(adhE)、丙酮酸甲酸裂解酶基因(pflB)、丙酮酸氧化酶基因(poxB)和乙酸激酶基因(ackA),再通过无氧生长进化筛选过程,... 以野生型大肠杆菌Escherichia coli W为出发菌株,利用Red同源重组系统分别敲除了乳酸脱氢酶基因(ldhA)、乙醇脱氢酶基因(adhE)、丙酮酸甲酸裂解酶基因(pflB)、丙酮酸氧化酶基因(poxB)和乙酸激酶基因(ackA),再通过无氧生长进化筛选过程,构建得到在厌氧条件下能有效生长,并以琥珀酸为主要发酵产物的重组大肠杆菌WS100(△ldhA,△adhE,△pflB,△poxB,△ackA)。利用15 L发酵罐进行厌氧发酵测定显示,经72 h发酵,菌体密度OD600最大值可提高至6.48,琥珀酸产量达到70.13 g/L,琥珀酸的生产强度为0.98 g/(L.h),葡萄糖-琥珀酸转化率为76%。发酵液中副产物含量低,乙酸含量为5.34 g/L,乳酸产量仅为0.15 g/L,未检测到甲酸和乙醇生成。结果表明,厌氧条件下,该工程菌可有效利用低营养成分的无机盐培养基,在不表达任何外源基因的条件下可稳定高产琥珀酸,具有极大的工业化开发前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌工程 琥珀酸 基因敲除 厌氧发酵
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病原菌多糖基因簇在大肠杆菌中的克隆
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作者 王雯 孙鹏 +2 位作者 徐敏锐 徐威 吴军 《生物技术通讯》 CAS 2014年第6期753-759,共7页
目的:构建稳定的外源病原菌多糖基因簇克隆载体,为在糖基工程大肠杆菌中利用外源性多糖O-糖基化修饰靶标蛋白奠定基础。方法:PCR扩增大肠杆菌O157、甲型副伤寒沙门菌CMCC50973和铜绿假单胞杆菌CMCC10110的O-多糖合成基因簇,将多糖... 目的:构建稳定的外源病原菌多糖基因簇克隆载体,为在糖基工程大肠杆菌中利用外源性多糖O-糖基化修饰靶标蛋白奠定基础。方法:PCR扩增大肠杆菌O157、甲型副伤寒沙门菌CMCC50973和铜绿假单胞杆菌CMCC10110的O-多糖合成基因簇,将多糖基因簇与细菌人工染色体pCC1BAC连接后,分别转化O-多糖合成缺陷的大肠杆菌W3110,并用相应多糖抗血清ELISA检测重组大肠杆菌是否利用外源O-多糖生成脂多糖(LPS),从而验证外源多糖基因簇克隆载体在大肠杆菌内是否能够生成相应的O-多糖;在此基础上,将构建的3种外源多糖基因簇克隆载体分别转化表达O-寡糖转移酶和蛋白底物菌毛蛋白PilE的糖基工程大肠杆菌,用相应的抗血清进行Western印迹检测,以验证克隆的O-多糖能否修饰蛋白底物PilE。结果:与阴性对照菌相比,带有大肠杆菌O157的O-多糖合成基因簇克隆载体和带有甲型副伤寒沙门菌CMCC50973的O-多糖合成基因簇克隆载体的重组菌ELISA呈阳性,提示大肠杆菌O157和甲型副伤寒沙门菌CMCC50973的O-多糖合成基因簇在大肠杆菌中被利用生成了相应的LPS;而带有铜绿假单胞杆菌CMCC10110的O-多糖合成基因簇克隆载体的重组菌W3110/BAC-10110则ELISA呈阴性。West?ern印迹结果显示,只有带有O157型大肠杆菌O-多糖合成基因簇克隆载体的糖基工程大肠杆菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-pglL/BAC-O157在相对分子质量40×103~58×103处出现了特异条带,表明菌毛蛋白PilE被大肠杆菌O157型O-多糖O-糖基化修饰。结论:建立了大肠杆菌O157、甲型副伤寒沙门菌CMCC50973的O-多糖合成基因簇大片段的克隆载体,克隆的O157型O-多糖合成基因簇可实现O157型多糖对菌毛蛋白PilE的修饰,从而为在大肠杆菌中建立稳定的利用外源病原菌多糖修饰靶标蛋白的糖基工程大肠杆菌提供了技术基础。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 O-157型大肠杆菌O-多糖合成基因簇 甲型副伤寒沙门菌O-多糖合成基因簇 铜绿假单胞杆菌O-多糖合成基因簇 糖基工程大肠杆菌
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高产PSA的基因工程菌株构建
14
作者 常化难 甄庚尧 +8 位作者 王崇川 李宁 周焕霞 曹建帮 高学秀 徐艳秋 李昊 朱德强 刘新利 《生物过程》 2024年第3期132-141,共10页
聚唾液酸(PSA)是一种具有重要生物功能的高分子多糖,广泛存在于自然界和人体中。由于其低免疫原性和良好的生物降解性,PSA被认为是一种理想的药物控释材料。本研究以大肠杆菌K87为出发菌株,通过过表达Neu5AC合成路径中的关键基因neuD,... 聚唾液酸(PSA)是一种具有重要生物功能的高分子多糖,广泛存在于自然界和人体中。由于其低免疫原性和良好的生物降解性,PSA被认为是一种理想的药物控释材料。本研究以大肠杆菌K87为出发菌株,通过过表达Neu5AC合成路径中的关键基因neuD,构建了高效合成PSA的基因工程菌株。通过摇瓶发酵和发酵罐发酵实验,验证了不同拷贝数neuD基因对PSA产量的影响。结果表明,高拷贝数表达载体能显著提高PSA的产量,其中E. coli K87-6菌株在5 L发酵罐中PSA产量达8.4 g/L,比出发菌株提高27%。本研究构建的高效合成PSA的基因工程菌株在工业生产中具有广泛的应用前景。Polysialic acid (PSA) is a high-molecular-weight polysaccharide with significant biological functions, widely found in nature and the human body. Due to its low immunogenicity and good biodegradability, PSA is considered an ideal material for drug delivery systems. In this study, Escherichia coli K87 was used as the starting strain to construct genetically engineered strains for efficient PSA production by overexpressing the key gene neuD in the Neu5AC synthesis pathway. The effects of different copy numbers of the neuD gene on PSA yield were verified through shake flask and fermenter experiments. The results showed that high-copy-number expression vectors significantly increased PSA yield, with the E. coli K87-6 strain achieving a PSA yield of 8.4 g/L in a 5 L fermenter, which is 27% higher than the starting strain. The genetically engineered strains constructed in this study have broad application prospects in industrial production. 展开更多
关键词 聚唾液酸 基因工程大肠杆菌 neuD 发酵
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产D-乳酸重组大肠杆菌ptsG基因的敲除及其混合糖同步发酵 被引量:7
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作者 丁小云 顾健健 +3 位作者 王永泽 赵锦芳 王金华 赵筱 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期221-226,共6页
为构建能够同时高效利用五碳糖和六碳糖发酵产D-乳酸的重组大肠杆菌工程菌,以能高效利用五碳糖发酵产D-乳酸的大肠杆菌工程菌E.coli JH13为出发菌株,通过Red同源重组技术敲除葡萄糖跨膜转运基因pts G。实验结果表明,pts G缺陷菌株E.coli... 为构建能够同时高效利用五碳糖和六碳糖发酵产D-乳酸的重组大肠杆菌工程菌,以能高效利用五碳糖发酵产D-乳酸的大肠杆菌工程菌E.coli JH13为出发菌株,通过Red同源重组技术敲除葡萄糖跨膜转运基因pts G。实验结果表明,pts G缺陷菌株E.coli JH15在10%混合糖(5%葡萄糖和5%木糖)培养基中发酵,可同时利用五碳糖和六碳糖以完成发酵;而对照菌葡萄糖消耗完才利用木糖,发酵结束还有18 g/L木糖残留;JH15乳酸产量为83.04 g/L,相比于对照菌株提高了25.86%;在稻草秸秆水解液中发酵,JH15同时利用葡萄糖、木糖和L-阿拉伯糖,乳酸产量为25.15 g/L,转化率为86.42%。JH15作为能利用混合糖同步发酵产D-乳酸的大肠杆菌工程菌,它的成功构建为利用廉价的木质纤维素水解物为原料发酵生产D-乳酸提供参考依据。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌工程 D-乳酸 ptsG基因 RED同源重组 混合糖
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抗噬菌体工程菌的筛选 被引量:6
16
作者 李彦英 方宏清 陈惠鹏 《生物技术通讯》 CAS 2003年第6期515-516,共2页
噬菌体污染常引起溶菌,造成人力物力浪费。应用自发突变的原理成功地从溶菌液中筛选到抗噬菌体的工程 菌株;在发酵罐中培养,该菌株生长行为和表达水平没有变化。
关键词 工程大肠杆菌 噬菌体 白发突变 突变原理 抗噬菌体工程
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利用五碳糖产高纯度L-乳酸的大肠杆菌基因工程菌的构建 被引量:9
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作者 赵锦芳 许丽媛 +2 位作者 王永泽 赵筱 王金华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期328-337,共10页
【目的】本研究以已敲除多个产杂酸酶基因的大肠杆菌(Escherichia coli)乙醇工程菌SZ470(ΔfrdBCΔldhAΔackAΔfocA-pBΔpdhR::pBp6-pBrbs-aceEF-lpd)为起始菌株,进一步敲除其乙醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase,ADH)基因,同时插... 【目的】本研究以已敲除多个产杂酸酶基因的大肠杆菌(Escherichia coli)乙醇工程菌SZ470(ΔfrdBCΔldhAΔackAΔfocA-pBΔpdhR::pBp6-pBrbs-aceEF-lpd)为起始菌株,进一步敲除其乙醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase,ADH)基因,同时插入带有自身启动子的乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)的L-乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LLDH)基因,构建可利用五碳糖同型发酵L-乳酸重组大肠杆菌。【方法】利用λ噬菌体Red重组系统构建乙醇脱氢酶基因(adhE)缺失菌株Escherichia coli JH01,并克隆P.acidilactici的ldhL基因,利用染色体插入技术将其整合到JH01基因组,构建产L-乳酸大肠杆菌基因工程菌Escherichia coliJH12,利用无氧发酵15 L发酵罐测定重组菌株L-乳酸产量。【结果】工程菌JH12在15 L发酵罐中以6%的葡萄糖为碳源进行发酵,发酵到36 h的过程中葡萄糖的消耗速率为1.46 g/(L.h),乳酸生产强度为1.14 g/(L.h),乳酸的产量达到41.13 g/L。发酵产物中未检测到琥珀酸、甲酸的生成,仅有少量乙酸生成,L-乳酸纯度达95.69%(L-乳酸在总发酵产物的比率)。工程菌JH12以6%的木糖为碳源进行发酵,发酵到36 h的过程中葡萄糖的消耗速率为0.88 g/(L.h),乳酸生产强度为0.60 g/(L.h),乳酸的产量达到34.73 g/L。发酵产物中杂酸少,乳酸的纯度高达98%。【结论】本研究通过基因敲除、染色体插入及无氧进化筛选获得一株产L-乳酸的大肠杆菌工程菌JH12,该菌株不需利用外源质粒,稳定性好,可利用五碳糖进行发酵,发酵产物中杂酸少,L-乳酸的纯度高。本研究为L-乳酸大肠杆菌工程菌的构建提供一定的技术支持,同时也为大肠杆菌L-乳酸的工业化生产提供了参考依据。 展开更多
关键词 大肠杆菌工程 L-乳酸 同源重组 染色体插入 五碳糖
原文传递
工程菌产酶制备GABA测定条件的优化 被引量:1
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作者 张珂 薛正莲 《安徽工程大学学报》 CAS 2012年第1期29-31,35,共4页
基于Berthelot显色反应,采用正交设计法优化了测定大肠杆菌工程菌谷氨酸脱羧酶转化L-谷氨酸生成γ-氨基丁酸含量的条件.实验确定的最佳测定条件为:2.0mL 0.2mol/L pH6.0的醋酸缓冲液(内含0.1mmol/L的PLP,0.2mol/L的L-谷氨酸,稀释70倍),... 基于Berthelot显色反应,采用正交设计法优化了测定大肠杆菌工程菌谷氨酸脱羧酶转化L-谷氨酸生成γ-氨基丁酸含量的条件.实验确定的最佳测定条件为:2.0mL 0.2mol/L pH6.0的醋酸缓冲液(内含0.1mmol/L的PLP,0.2mol/L的L-谷氨酸,稀释70倍),再依次加0.2mmol/L的硼酸缓冲液(pH9.0)1.0mL,0.5mL 6.0%重蒸苯酚和5.0mL 10%次氯酸钠,沸水浴加热10min后,迅速冰浴20min,待溶液出现蓝绿色后,加入60%(v/v)乙醇溶液4.0mL在640nm测定吸光值,绘制出标准曲线来计算GABA的含量.结果表明,该方法简便实用,相对误差小,适合实验室样品的快速检测. 展开更多
关键词 Γ-氨基丁酸 谷氨酸脱羧酶 大肠杆菌工程 比色法
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我国基因工程药物的研制与生产
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作者 罗明典 《科学中国人》 1996年第7期34-35,共2页
凡通过基因工程技术建构的微生物、动物、植物通称为工程生物,由它们生产的药物有工程药物之称。随着现代生物技术,特别是基因工程的发展,那些有益于人类的工程生物技术,逐渐进入了实用化或产业化,工程微生物和工程药物变得更普遍。
关键词 基因工程药物 研制与生产 工程 重组链激酶 工程大肠杆菌 肿瘤坏死因子 基因工程技术 细胞因子 BFGF 现代生物技术
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木糖发酵生产高纯度D-乳酸大肠杆菌工程菌LHY02的构建 被引量:4
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作者 鲁泓鹰 何虎 +2 位作者 刘枣 王永泽 王金华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期91-96,共6页
高效利用木糖发酵生产D-乳酸或其他生物质产品,是充分利用木质纤维素的一个关键问题。以高效利用木糖产L-乳酸的Escherichia coli WL204为出发菌株,采用RED基因置换技术将ldh L基因置换为ldh A基因,获得一株能利用木糖产D-乳酸的大肠杆... 高效利用木糖发酵生产D-乳酸或其他生物质产品,是充分利用木质纤维素的一个关键问题。以高效利用木糖产L-乳酸的Escherichia coli WL204为出发菌株,采用RED基因置换技术将ldh L基因置换为ldh A基因,获得一株能利用木糖产D-乳酸的大肠杆菌工程菌株Escherichia coli LHY02,该菌株利用10%木糖发酵,D-乳酸产量达到84.4 g/L,产物光学纯度达到99.5%。此外,该菌株仍然具有较好的利用葡萄糖产D-乳酸的能力。 展开更多
关键词 木糖 D-乳酸 大肠杆菌工程 RED基因置换技术
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