我国马流感病毒分子生物学诊断方法及基因工程疫苗的研究进展

马流感(Equine influenza,EI)是由马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)引起马属动物的一种高度传染性疾病,给全球马属动物产业造成重大经济损失。本文论述了我国马流感病毒分子生物学诊断方法,包括常规PCR方法、荧光PCR方法、环介导等温扩增技术等,并就其基因工程疫苗研究进行了着重阐述,以期为该病的诊断和防控提供参考。

基因工程疫苗在动物疾病防治中的前景

随着生物科技的不断革新,动物疫病的防治手段也越来越多,但在兽医临床当中,疫苗仍然是重要的防护手段。传统疫苗的研制受到微生物体外培养以及安全性等多方面的限制,在使用中存在着较大的风险,而随着现代生物技术和手段的发展,利用基因工程技术研发的疫苗,具有更高的安全性和稳定性,同时还具备大批量生产的可能性,进一步降低了生产的成本,是未来动物疾病防治的主流发展趋势。本文对基因工程疫苗进行了简单的阐述,同时分析了基因工程疫苗所具有的优势和劣势,以及当前的应用现状,并就此分析了其在动物疾病防治当中的发展前景,以供相关人士参考。

基因工程疫苗在畜禽疫病防制中的应用

随着现代生物科技的发展,基因工程疫苗在畜禽疫病防制领域发挥着重要的意义。与传统疫苗相比,基因工程疫苗具有更高的安全性、稳定性和免疫效果好的特性,被广泛应用于畜禽疫病防制中。本文主要论述基因工程亚单位疫苗、重组活载体疫苗、基因缺失疫苗和核酸(DNA)疫苗在疫病防制中的具体应用,以期为我国畜牧业的健康发展提供有益的参考和借鉴。

种猪繁育与育肥场猪瘟E2基因工程疫苗免疫效果的调查与研究

为探究猪瘟E2基因工程亚单位疫苗相比于传统猪瘟C株弱毒疫苗(脾淋源)在免疫与生产上的优势,本文以汉中某一地方品种种猪场和代养场为调查对象,选择一批繁育母猪和育肥仔猪分别免疫猪瘟E2基因工程亚单位疫苗和猪瘟活苗,对比结果发现,母猪免疫猪瘟E2亚单位疫苗后哺乳仔猪断奶成活率平均提高了16.3%;且接种的两种猪瘟疫苗对育肥仔猪的免疫效果差异极显著(P<0.01),其中E2亚单位疫苗相比于猪瘟活疫苗能够明显提高育肥仔猪抗体阻断率和降低离散度,有助于育肥仔猪的健康生长,这为规模化猪场在选择猪瘟疫苗时提供重要参考依据。

基因工程疫苗在兽医领域的应用

基因工程疫苗即利用DNA重组技术,将病原的保护性抗原编码基因片段定向插入载体或表达系统中,使之能够实现体内或体外的高效表达进而制成疫苗,如亚单位疫苗、重组活载体疫苗、基因缺失疫苗和核酸疫苗等。相较于传统疫苗,基因工程疫苗能不断刺激机体免疫系统产生长期免疫;避免因病原体变异而造成免疫逃避;一个质粒载体可克隆多个抗原基因组成多价疫苗,提高了疾病的防治效率和效果,是未来的主要发展和研究方向之一。文章对基因工程疫苗在兽医领域的研究进展进行了概述,旨在为相应研究与实践提供一定参考。

动物疾病防治中应用基因工程疫苗的研究分析

在动物疾病的防治实践工作中,基因工程疫苗目前已经得到了普遍的采用。相比于传统类型的动物疫苗而言,基因工程疫苗具有治疗效率提升、疫苗批量生产、可靠性以及安全性更高等显著技术优势。现阶段的养殖动物感染疾病潜在风险因素正在不断增多,客观上体现了深入探索研究基因工程疫苗技术的必要性。因此,本文重点探析了基因工程疫苗运用于动物疾病防治领域的技术实施优势,结合动物疾病防治的实践需求来促进现有技术完善。

绵羊包虫病基因工程疫苗(Eg95)免疫试验

目的验证绵羊包虫病基因工程疫苗(Eg95)对新疆羊源棘球蚴病预防效果。方法应用新西兰农牧科学院沃勒斯维尔动物研究中心提供的绵羊包虫病基因工程疫苗(Eg95),对新生新疆细毛羊、巴音布鲁克羊、山羊羔羊进行二免、三免、四免,以间接ELISA法作血清抗体动态检测,在免疫42d、180d、365d、730d进行人工感染,于感染后180d剖解试验羊;试验羊二免后在包虫病的高发区放牧饲养180d、365d730d后剖解试验羊,检查免疫组与对照组羊的肝脏和肺脏荷囊数量,统计保护率(减囊率)。结果1.Eg95有体征反应,属于正常疫苗反应;2.免疫组与对照组血清IgG的OD值之比?2;3.二免后42d,人工感染的保护率:新疆细毛羊90.5%,山羊100%;4.二免后180d,人工感染的保护率:新疆细毛羊94.6%,山羊82.2%;自然感染的保护率:新疆细毛羊88.1%,巴音布鲁克羊83.6%。5.二免后365d,人工感染的保护率:新疆细毛羊97.4%;自然感染的保护率:新疆细毛羊83.6%,巴音布鲁克羊83.3%。6.二免后730d,人工感染的保护率:新疆细毛羊86.%;自然感染的保护率:87.1%;7.三免后180d,人工感染的保护率:新疆细毛羊99.2%。8.三免后365d,人工感染的保护率:新疆细毛羊95.6%,自然感染的保护率95.1%。9.四免后365d,人工感染的保护率:新疆细毛羊97.7%,自然感染的保护率95.5%。结论Eg95对新疆羊源棘球蚴病具有预防作用,免疫程序为新生羊羔初次2次,间隔期1个月(或4周),其后每年加强一次。

ASDP/ASDE3作为乙型肝炎基因工程疫苗新型复合佐剂的效果及安全性

以中药当归[Angelica sincnsis(Oliv) Diels]研制的新型复合免疫佐剂——ASDP/ASDE3与哺乳动物细胞系表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)合用,经动物试验表明,其免疫佐剂效果明显优于现用的氢氧化铝胶佐剂,免疫动物血清抗-HBs水平及阳转率均比后者高,且疫苗的ED50可降低3～4倍。动物多途径局部及整体给药的急性毒性试验均显示毒性很小,说明ASDP/ASDE3是一种值得深入研究的新型免疫佐剂。

以免疫球蛋白为载体的抗O型口蹄疫病毒基因工程疫苗的构建

以自体免疫球蛋白作为外源抗原的载体来研制疫苗是一条研制安全、高效疫苗的新途径。将猪IgGH链基因中的CDR3区缺失 ,剩余的两个片段分别连接到pBluescriptⅡSK(+)和 pBluescriptⅡKS(+)上 ,其中一片段再与编码FMDVVP1两个拷贝的 141～ 16 0位氨基酸残基和一个拷贝的 2 0 0～ 2 13位氨基酸残基构成的串联片段2 0AA～ 14AA～ 2 0AA的核苷酸片段相连。然后将它们切下与质粒表达载体 pET2 8b相连 ,构建出融合表达质粒pET2 8b FH ,经限制酶酶解及DNA序列分析证明该融合基因各连接点及读框正确。转入大肠杆菌BL2 1(DE3) plysS表达出一分子量为 6 4kD的蛋白质。经ELISA检验证明 ,大肠杆菌细胞中表达的融合蛋白有O型FMDV抗原活性。将该融合蛋白肌肉注射免疫豚鼠和猪 ,攻毒实验表明 ,疫苗pET2 8b FH对豚鼠产生了保护作用 ,保护率为 6 6 % ,对猪也有保护作用。

猪囊虫病基因工程疫苗的研制及应用

从猪带绦虫六钩蚴 c DNA文库中筛选目的基因并进行克隆表达 ,重组抗原用血清学方法和猪体免疫试验进行鉴定 ,筛选保护性抗原基因。将具有免疫保护作用的重组抗原纯化 ,并与免疫刺激复合物佐剂结合 ,制成猪囊虫病基因工程疫苗。对工程菌的培养发酵、重组抗原的下游纯化及疫苗的配制、疫苗的中间试制进行了研究 ,确定了一套比较完善的生产工艺。应用昆明小鼠建立了猪囊虫病的实验动物模型 ,应用该模型进行上述疫苗的免疫预防试验 ,免疫 1次和 2次的免疫保护率分别为 96.9%和 98.4 %。本动物的免疫预防试验显示 ,疫苗安全性好 ,免疫保护率达 92 .2 % ,且免疫组发现的囊虫多数已死亡。在流行区进行了田间试验和区域试验。免疫猪未有不良反应 ,囊虫感染率分别由 2 0 %降为 1 .1 %和 5.4 %降为 0 .2 1 %。用该疫苗对人工感染的囊虫病猪进行免疫治疗 ,发现在感染早期的治疗效果较好。免疫动物的体液免疫和细胞免疫的检测结果显示 ,该疫苗刺激机体产生抗体的时间早、持续时间长、效价高 ;可显著提高淋巴细胞转化率及 E-RFC和 Ea-RFC细胞、ANAE+细胞和粗粒型 ANAE+细胞、抑制 /杀伤性 T细胞亚群的数量。以上结果表明 ,用大肠杆菌表达的重组抗原制备的猪囊虫病基因工程疫苗安全、高效 ,且成本低廉 ,可规模化生产 ,

猪囊虫病基因工程疫苗的体液与细胞免疫反应

为了探讨以 Ｉ Ｓ Ｃ Ｏ Ｍ 作佐剂的猪囊虫病基因工程疫苗的免疫机理，对其诱导的体液免疫与细胞免疫反应进行了测定。用上述疫苗免疫 ９ 头试验猪，采用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测体液免疫反应及通过淋巴细胞转化试验、 Ａ Ｎ Ａ Ｅ染色试验、 Ｅ玫瑰花环形成试验等检测细胞免疫反应；用该疫苗和铝胶苗分别免疫昆明小鼠各 ２０ 只，分别检测体液免疫反应和 Ｔ 淋巴细胞抑制／杀伤亚群的动态变化。体液免疫的检测结果显示，免疫后 ７ 天即出现抗体，２１ 天后抗体全部转阳，持续的时间不少于 １９３ 天，效价明显高于铝胶苗；细胞免疫检测结果显示，免疫猪外周血 Ｔ淋巴细胞转化率、 Ａ Ｎ Ａ Ｅ＋ 细胞和粗粒型 Ａ Ｎ Ａ Ｅ＋ 细胞、 Ｅ Ｒ Ｆ Ｃ和 Ｅａ Ｒ Ｆ Ｃ细胞显著升高，免疫小鼠 Ｔ淋巴细胞抑制／杀伤亚群显著升高；与铝胶苗及对照组比较，差异极显著。以上结果表明猪囊虫病基因工程疫苗可同时激发动物的体液免疫和细胞免疫反应，增强了机体的免疫调节功能及杀伤性 Ｔ 淋巴细胞功能。

兔病毒性出血症基因工程疫苗的研究进展

兔病毒性出血症俗称兔瘟，它是由兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV）引起的一种急性、烈性、高度接触性、致死性传染病。1984年中国首次报道了该病。RHDV曾是兔的一种毁灭性传染病，因给养兔业带来巨大的经济损失而备受养兔业的关注。1989年，世界动物卫生组织（OIE）将该病正式列为B类传染病，我国将其列为二类传染病。

转基因植物基因工程疫苗

对转基因植物生产疫苗的方法进行了介绍 ,概括了转基因植物疫苗的主要优点和存在的问题 ,总结了 10年来转基因植物疫苗的研究进展 ,并对未来的发展方向进行了讨论。

猪囊虫病基因工程疫苗用于免疫治疗的研究

应用猪囊虫病基因工程疫苗分别对实验性猪囊虫病和自然感染的猪囊虫病进行分组治疗 ,以探讨该疫苗的免疫治疗作用。 10头人工复制的囊虫病猪 ,随机分成 3组。第 1组 4头猪 ,于感染后 1个月注射该疫苗 ,连续 3次 ,间隔 15天 ;第 2组 4头猪 ,于感染后 2个月注射疫苗 ,同上连续 3次 ;第 3组 2头猪 ,不注苗。第 1组注射疫苗后 1个月循环抗原滴度开始降低 ,2 .0、2 .5及 3 .5个月各有 1头猪CA转阴 ,5个月OD值分别为 0 .14、0 .0 9、0 .17、0 .38。第 2组和第 3组各猪血清OD值一直维持在 1.0以上。感染后 5个月剖检 ,第 1组 4头猪均末检出囊虫 ;第 2组 4头猪在咬肌、膈肌、腰肌、股内侧肌、肩胛外侧肌等部位均检测到囊虫 ,检测部位 40cm2 面积发现囊虫 3～ 7个 ,有部分虫体已钙化 ,胆汁孵化率为 15 .4% ;第 3组各猪也在各检测部位检测到囊虫 ,40cm2 的囊虫数为 6～ 9个 ,胆汁孵化率 90 .4%。 2 5头自然感染的囊虫病猪 ,按OD值大小分 3组进行免疫治疗 ,连续注射疫苗 3次 ,每次间隔 15天 ,6个月后剖检。OD值在 0 .6 8～ 0 .90的 7头猪均未检测到囊虫 ,OD值在 0 .91～ 1.10的8头猪和OD值在 1.11～ 1.5 4的 10头猪分别有 5头和 2头猪未检测到囊虫。

兽用基因工程疫苗的研究现状及其生物安全性问题

基因工程疫苗的研究发展日新月异,已从理论研究进入到实际生产应用,成为生物制品产业发展的一种趋势。文章就兽用基因工程疫苗的种类和研究进展,及在应用基因工程疫苗过程中可能出现的潜在生物安全问题作一简要概述。

猪囊虫病基因工程疫苗的研制

从猪带绦虫六钩蚴ｃＤＮＡ 文库中筛选目的基因并进行克隆表达，重组抗原用血清学方法和猪体免疫试验进行鉴定。将具有免疫保护作用的重组抗原纯化，与免疫刺激复合物疫苗佐剂混合，制备成猪囊虫病基因工程疫苗，免疫仔猪并攻虫。该疫苗安全、无毒副作用，免疫猪减虫率９２．２％ ，完全保护率５５．５％ ，且免疫组发现的囊虫多数已死亡。以上结果表明用大肠杆菌表达的重组抗原制备的猪囊虫病基因工程疫苗安全、高效、成本低廉、可规模化生产，有望成为预防猪囊虫病的一种新型生物制剂。

兔出血症病毒2型SC株VP60基因工程疫苗研制及其与传统兔出血症病毒疫苗的交叉保护作用

兔出血症病毒2型毒株于2020年在我国首次发现并报道,目前尚无有效的疫苗可用于对该毒株的防控。针对我国兔出血症病毒2型SC毒株VP60蛋白,构建获得表达该毒株VP60蛋白的重组杆状病毒rBAC-RHDV2-VP60。以rBAC-RHDV2-VP60为疫苗毒种,接种昆虫细胞,表达获得重组VP60蛋白。以氢氧化铝胶为佐剂制成RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗,结合前期制备的传统RHDV型WF株VP60基因工程疫苗,分别免疫2~3月龄健康易感兔,1.0 mL/只;免疫后21 d,检测2种疫苗分别对国内RHDV2流行株和传统RHDV毒株的免疫保护力。结果显示,用SC株攻毒,免疫RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗的家兔,免疫组无死亡,而免疫生理盐水的对照组全部死亡;免疫传统RHDV WF株VP60基因工程疫苗的家兔,免疫兔6/10死亡,对照组兔全部死亡;用WF株攻毒,免疫RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗的家兔,免疫组死亡7/10,而免疫生理盐水的对照组全部死亡;免疫传统RHDV WF株VP60基因工程疫苗的家兔,免疫兔无死亡,对照组兔全部死亡;提示传统RHDV型WF株疫苗不能对国内流行毒株RHDV2 SC毒株产生有效的免疫保护,RHDV2 SC株VP60基因工程疫苗也不能对国内传统RHDV毒株产生有效的免疫保护,两型毒株间交叉保护作用较低。本研究中针对我国流行RHDV2 SC毒株研制的基因工程疫苗对有效预防和控制国内流行的RHDV2将发挥重大作用。

转基因植物生产基因工程疫苗技术

用转基因植物生产有用的外源蛋白是一个有吸引力的廉价生产系统 ,它可能替代传统的外源蛋白生产体系。通过外源基因的瞬时表达或稳定表达方式 ,多种基因工程疫苗已在植物中表达成功 ,并保持良好的免疫原性。本文概要介绍了国内外利用转基因植物生产疫苗的研究现状 ,并对转基因植物生产疫苗的潜在优势。

技术领域主题发现研究——以基因工程疫苗领域为例

本文梳理基于专利文献进行技术领域主题发现的研究方法发展进程,提出一套高效获取专利技术主题词、生成战略坐标图的研究流程,并以基因工程疫苗技术为例,对我国基因工程疫苗技术主题分布及发展趋势进行实证分析。研究结果显示,采用本文构建的共词分析流程和方法,利用专利共词聚类和战略坐标图能较好地识别技术主题及其发展现状。