早期生长反应基因1对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响

背景:体内外研究已证实肺巨噬细胞合成和分泌肿瘤坏死因子α等参与肺组织局部损伤和炎症反应,但具体发生机制仍不明确。目的:观察核转录因子早期生长反应基因1对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响。设计、时间及地点:随机分组设计,于2004-06/2006-12在湘雅医学院病理学系完成。材料:标准石英粉尘(SiO2)为Sigma公司产品;早期生长反应基因1抗体为Santa Cruz公司产品;小鼠巨噬细胞系RAW264.7购自中科院上海生物细胞研究所细胞库。方法:实验将巨噬细胞分为正常对照组、二氧化硅刺激组、Egr-1+二氧化硅组和IgG+二氧化硅组,前两组加无血清培养基,后两组分别加入5,10,20mg/L不同浓度的Egr-1和IgG抗体干预。主要观察指标:酶联免疫吸附实验检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α蛋白的水平;反转录-聚合酶链反应检测细胞内肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果:①与二氧化硅刺激组相比,不同浓度Egr-1+二氧化硅组细胞上清中肿瘤坏死因子α蛋白水平均下降(P<0.01),且10mg/L组与5,20mg/L组相比,差异有显著性意义(P<0.05)。不同浓度IgG+二氧化硅组相比,上清液中肿瘤坏死因子α蛋白水平差异无显著性意义(F=1.008,P=0.438)。②二氧化硅刺激组肿瘤坏死因子αmRNA表达高于正常对照组(P<0.01),而Egr-1+二氧化硅组mRNA表达低于二氧化硅刺激组和IgG+二氧化硅组(P<0.01)。结论:二氧化硅致巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α增加可能通过激活核转录因子早期生长反应基因1介导的信号通路而实现。

急性胰腺炎大鼠肺组织与肺泡巨噬细胞早期生长反应基因-1的表达

目的:研究观察早期生长反应基因-1 (EGR-1)在急性胰腺炎(AP)大鼠肺组织与原代培养肺泡巨噬细胞(AM)中表达的作用.方法:将♂Wistar大鼠40只,随机均分为4组,分别于胆总管内逆行注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液.3 h后处死动物,取血分离血清,并剪取胰腺及肺组织.检测血清TNF-α和IL-1β水平,胰腺组织病理评分,肺组织湿质量/干质量比,并对肺组织进行EGR-1免疫组化染色.原代培养AM分成4组,分别采用不同浓度胰弹性蛋白酶进行刺激,免疫细胞化学染色法检测EGR-1在AM的表达,并检测培养液中TNF-α和IL-1β浓度.RT-PCR分别检测AM,EGR-1,TNF-α,IL-1βmRNA表达.结果:肺组织EGR-1表达随AP病情加重而呈增强趋势,并与血清TNF-α和IL-1β水平、胰腺组织病理评分、肺组织湿质量/干质量比均呈显著正相关(r=0.63,0.58,0.59,0.61,P<0.01)AM中EGR-1蛋白.mRNA表达程度与TNF-α和IL-1β蛋白(r=0.64、0.51,P<0.01)以及mRNA水平均呈显著正相关(r=0.62,0.59,P<0.01).结论:EGR-1可能在AP并发肺损伤中起重要作用,其机制可能与其介导炎性细胞因子生成有关.

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并高血压患者血清巨噬细胞炎症蛋白-1α和高敏C反应蛋白的表达

目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea syndrome,OSAHS)对高血压(hyper-tension,HT)患者血清巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)和高敏C反应蛋白(high-sensitiv-ity c-reactive protein,hs-CRP)水平以及对心脏功能的影响。方法选取经多导睡眠监测仪确诊OSAHS患者、OSAHS合并高血压患者,及经心血管内科初诊原发性高血压患者共86例,分为OSAHS组29例、OSAHS+HT组30例和HT组27例,另设对照组(C组)30例,进行彩色多普勒超声心动图检查,测定血清MIP-1α、hs-CRP浓度。结果HT组、OSAHS+HT组收缩压、舒张压、脉压差均较OSAHS组显著升高(P<0.05)。OSAHS组、OSAHS+HT组、HT组E峰速度(E velocity,EV)均明显低于C组(P<0.05),且OSAHS+HT组、HT组与OSAHS组比较仍有统计学差异(P<0.05)。OSAHS组、OSAHS+HT组、HT组A峰速度(A velocity,AV)均较C组显著升高(P<0.05)。OSAHS+HT组血清MIP-1α水平显著高于HT组(P<0.05)。血清MIP-1α水平与A峰成负相关(r=-0.238,P=0.08),与E/A成正相关(r=0.307,P=0.02)。结论OSAHS能诱导患者血清MIP-1α水平改变,且较血清hs-CRP变化出现更早,如合并高血压病则更为明显;血清MIP-1α水平升高与心脏舒张功能降低相关。

高血压性脑出血患者血清高迁移率族蛋白-1、凝溶胶蛋白、胰岛素样生长因子-1和巨噬细胞移动抑制因子水平变化及其对病情和预后的评估价值

目的探讨血清高迁移率族蛋白(HMGB)-1、凝溶胶蛋白(GSN)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)水平变化及其高血压性脑出血患者病情和预后的临床价值。方法选取于2014年8月至2016年1月就诊的高血压性脑出血患者84例为观察组,将观察组患者根据其神经系统损害情况分为轻度(19例)、中度(42例)、重度(23例)亚组。将同期80例来进行健康体检的志愿者选为对照组。比较观察组与对照组、各亚组患者血清中HMGB-1、GSN、IGF-1和MIF水平,分析各指标与患者预后的关系。结果观察组患者的HMGB-1、MIF水平明显高于对照组患者(P<0.001)。观察组患者的GSN、IGF-1水平明显低于对照组患者(P<0.001)。轻度、中度、重度亚组的脑出血患者血清中GSN、IGF-1、HMGB-1和MIF水平比较差异有显著性(P<0.001)。轻度亚组患者血清中GSN、IGF-1的水平最高其次为中度亚组最低为重度亚组的患者。轻度亚组患者血清中MIF、HMGB-1水平最低其次为中度亚组最高为重度亚组的患者。观察组患者中预后良好的患者46例,预后较差的患者38例。预后良好患者的HMGB-1和MIF水平明显低于预后不良的患者(P<0.001);而GSN和IGF-1水平明显高于预后不良的患者(P<0.001)。结论 IGF-1、GSN、MIF、HMGB-1与高血压性脑出血患者的病情发展密切相关,检测上述指标能够有效评估患者的病情和预后。

肺结核患者治疗前后血清甘露糖结合凝集素、巨噬细胞炎症蛋白-1α及C反应蛋白水平变化及其临床意义

目的分析肺结核(TB)患者治疗前后血清甘露糖结合凝集素(MBL)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、C反应蛋白(CRP)水平变化及意义。方法收集2018年5月至12月医院收治的活动性TB患者140例(活动性TB组),选取同期收治的非活动性TB患者70例作为非活动性TB组,酶联免疫吸附法测定TB患者治疗前后血MBL、MIP-1α水平,放射免疫法法测定CRP水平,分析三者表达在TB病情变化过程中的变化及其相关关系。结果活动性TB患者治疗前血MBL、MIP-1α、CRP高于非活动性TB(P<0.05),治疗后,活动性TB患者血MBL、MIP-1α、CRP均低于同组治疗前(P<0.05);MBL鉴别活动性与非活动性TB AUC为0.871,SE为0.031,95%CI为0.818~0.913,cutoff值为2445.58 ng/mL时,诊断灵敏度为99.29%,特异性为72.86%,约登指数为0.721;MIP-1α鉴别两者AUC为0.884,SE为0.022,95%CI为0.832~0.924,cutoff值为30.19 pmol/L时,灵敏度为81.43%,特异性为87.14%,约登指数为0.685;CRP鉴别两者AUC为0.737,SE为0.038,95%CI为0.672~0.795,cutoff值为22.30 mg/L时,诊断灵敏度为87.14%,特异性为54.29%,约登指数为0.414;MBL与MIP-1α、CRP均呈正相关(r=0.455、0.403,P均<0.001),MIP-1α与CRP呈正相关(r=0.375,P<0.05)。结论活动性TB患者血清MBL、MIP-1α、CRP均呈异常高表达,与机体免疫活动密切相关,活动性TB高于非活动性TB,抗结核治疗后,活动性TB MBL、MIP-1α、CRP降低,三者表达呈正相关关系,有望作为TB病情进展及疗效预测的依据。

蛋白激酶C对SDF-1诱导巨噬细胞趋化及血管内皮生长因子转录的调节作用

目的探讨基质细胞衍生因子(SDF-1)对体外培养的大鼠巨噬细胞的趋化作用和对培养的巨噬细胞株U937细胞血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达的作用,以及蛋白激酶C(PKC)对其的影响。方法用Boyden小室法观察人SDF-1对培养的大鼠脾巨噬细胞的趋化效应,以及蛋白激酶C抑制剂氯化白屈菜季铵碱对其趋化反应的影响;用RT-PCR方法观察浓度为100ng/ml的SDF-1作用12h后人U937细胞VEGF的表达以及氯化白屈菜季铵碱对其作用的影响。结果SDF-1对体外培养的大鼠巨噬细胞表现出剂量依赖的趋化作用,100ng/ml时作用最强,趋化细胞数为(398±159)个/视野;不同浓度的氯化白屈菜季铵碱预处理后均能抑制巨噬细胞的趋化反应,10μmol/L时抑制作用最强,SDF-1的趋化细胞数下降至(68±31)个/视野。SDF-1能使U937细胞VEGF的mRNA转录水平提高20%;当氯化白屈菜季铵碱预处理后,此促进效应受到明显抑制,氯化白屈菜季铵碱浓度为10μmol/L时作用最强,仅可检测到微量VEGF。结论SDF-1通过其受体CXCR4实现对巨噬细胞的趋化作用和促VEGF表达的作用,PKC参与调控该过程。

狼疮性肾炎患者尿单核-巨噬细胞趋化蛋白-1和转化生长因子-β_1检测的临床意义

目的探讨狼疮性肾炎(LN)患者尿单核-巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和转化生长因子-β_1 (TGF-β_1)检测的临床意义。方法对57例经肾活检证实为LN患者的尿MCP-1和TGF-β_1水平进行检测,24名健康者为正常对照组。结果与正常对照组比较,57例LN患者尿MCP-1和TGF-β_1增高(P<0.05),LN-Ⅳ型尿MCP-1和TGF-β_1明显高于LN-Ⅱ和LN-Ⅲ型(P<0.05),LN-Ⅴ和LN-Ⅵ型尿MCP-1无改变(P>0.05),而尿TGF-β_1增高(P<0.05);在活动期和非活动期LN患者尿MCP-1和TGF-β_1水平高于正常对照组(P<0.01),活动期尿MCP-1和TGF-β_1水平明显高于非活动期(P<0.05);LN-Ⅳ型尿MCP-1和TGF-β_1水平与24 h尿蛋白定量、血肌酐呈明显正相关(r=0.621、0.711,P<0.05;r=0.568、0.631,P<0.05)。LN-Ⅱ、LN-Ⅲ、LN-Ⅴ、LN-Ⅵ型尿MCP-1和TGF-β_1与24 h尿蛋白定量和血肌酐无明显相关性(P>0.05);尿MCP-1水平与肾脏活动指数成正相关(r=0.681,P<0.05),尿TGF-β_1与慢性化指数密切相关(r=0.605,P<0.05)。结论尿MCP-1和TGF-β_1水平可作为反映LN病情变化,判断病理类型的重要指标。

巨噬细胞炎症蛋白-1α对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖反应的影响

目的 比较类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis,RA)、骨关节炎 (osteoarthritis ,OA)和创伤后手术(post traumatic ,PT)患者滑膜细胞产生巨噬细胞炎症蛋白 1 α(MIP 1α)、MIP 1β和活化正常T细胞表达和分泌调节因子 (RANTES)的差异 ,探讨MIP 1α在体外能否诱导RA滑膜成纤维细胞增殖反应。方法 收集RA、OA和PT患者滑膜组织。采用胶原酶消化法获得滑膜细胞 ,采用组织块贴壁法获得滑膜成纤维细胞。滑膜细胞培养上清中MIP 1α、MIP 1β和RANTES检测采用ELISA法。滑膜成纤维细胞增殖反应采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 (MTT法 )。结果 RA、OA和PT患者的滑膜细胞在体外不能自发产生MIP 1α、MIP 1β和RANTES。用LPS(5 μg/ml)和白介素 1α(rhIL 1α ,5 0U/ml)刺激滑膜细胞后 ,RA患者滑膜细胞可产生较高的MIP 1α和RANTES ,并明显多于OA和PT患者滑膜细胞产生的量 ,而滑膜细胞产生MIP 1β量在 3种类型患者中无明显差异。MIP 1α可诱导RA滑膜成纤维细胞增殖反应 ,并且在一定浓度范围内 (2～ 5 0ng/ml)具有浓度依赖性。结论 RA滑膜细胞在体外产生MIP 1α和RANTES的量明显高于OA和PT患者 ,MIP 1α诱导RA滑膜成纤维细胞的增殖反应。提示MIP 1α在RA的发病机制中可能起重要作用。

巨噬细胞炎症蛋白-1α和高敏C-反应蛋白在高血压合并阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者中的表达及意义

目的探讨高血压(hypertension,HT)合并阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)患者血清中巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)和高敏C-反应蛋白(hs-CRP)含量变化对疾病发展和疗效预测的意义。方法选择162例受试者,其中健康受试者40例,单纯HT患者42例,OSAHS患者37例,HI合并OSAHS(HT+OSAHS)患者43例,比较各组患者血清中MIP-1α和hs-CRP含量。根据睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)将高HT+OSAHS组患者分为轻度、中度和重度三个亚组,比较各亚组患者血清中MIP-1α和hs-CRP含量。将HT+OSAHS患者进行氨氯地平联合替米沙坦治疗,比较治疗前后患者血清中MIP-1α和hs-CRP含量,并且观察患者临床疗效。结果 HT+OSAHS组患者血清中MIP-1α和hs-CRP含量高于其他三组,与正常健康人群受试组相比,差异具有显著性(P<0.01)。OSAHS患者病情越严重,血清中MIP-1α和hs-CRP含量越高。HT+OSAHS组患者经治疗3个月后,病情得到显著改善,血清中MIP-1α和hs-CRP含量显著降低,与治疗前相比,差异有显著性(P<0.05)。结论 OSAHS与HI的发病机制可起到协同作用,同时促使患者血清中MIP-1α和hs-CRP含量升高,因此检测血清中MIP-1α和hs-CRP含量,对于评估和预测HT+OSAHS组患者的严重程度和治疗效果有一定的临床意义。

早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸下调富含半胱氨酸蛋白61抑制大鼠血管平滑肌细胞迁移

目的观察早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞中早期生长反应因子1和富含半胱氨酸蛋白61表达的影响,初步探讨早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞迁移的机制。方法体外培养血管平滑肌细胞并转染早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸,采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学法检测转染后不同时间点对照组与实验组血管平滑肌细胞中早期生长反应因子1及富含半胱氨酸蛋白61的mRNA和蛋白的表达变化,划痕法测定血管平滑肌细胞迁移距离。结果早期生长反应因子1及富含半胱氨酸蛋白61的mRNA和蛋白在对照组、诱骗组及诱骗对照组中均有表达。在不同时间点,诱骗组早期生长反应因子1及富含半胱氨酸蛋白61的mRNA和蛋白的表达均低于对照组(P<0.05)。转染后48 h,对照组、诱骗组及诱骗对照组血管平滑肌细胞的迁移距离分别为105.23±7.81μm、58.65±12.68μm、106.47±7.60μm,诱骗组血管平滑肌细胞的迁移距离明显低于其他两组(P<0.01)。结论对体外培养的血管平滑肌细胞转染早期生长反应因子1特异诱骗寡核苷酸可以抑制早期生长反应因子1及富含半胱氨酸蛋白61的mRNA和蛋白表达,从而抑制血管平滑肌细胞的迁移。

巨噬细胞炎性蛋白1α、碱性成纤维细胞生长因子对肺癌脑转移临床诊疗的意义

目的通过检测血浆巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平与肺癌脑转移的关系,为肺癌脑转移的临床诊断及疗效评价提供依据。方法收集肺癌脑转移患者(脑转移组)21例、肺癌其他器官转移患者(其他器官转移组)29例、健康者(健康对照组)21例。检测3组研究对象血浆MIP-1α、bFGF水平,检测脑放疗前后脑转移组患者血浆MIP-1α、bFGF水平,使用Pearson相关分析法明确各组血浆MIP-1α与bFGF的表达是否存在相关性。结果脑转移组患者MIP-1α、bFGF水平均高于其他器官转移组及健康对照组,其他器官转移组患者MIP-1α、bFGF水平均高于健康对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。脑放疗后脑转移组患者MIP-1α、bFGF水平均较脑放疗前明显降低,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。在脑转移组和其他器官转移组中,MIP-1α与bFGF不存在相关性(P﹥0.05);在健康对照组中,MIP-1α与bFGF呈正相关(r=0.615,P=0.003)。结论MIP-1α、bFGF可能是肺癌脑转移相关的因子;MIP-1α、bFGF可以作为肺癌脑转移患者脑放疗效果评价的指标;MIP-1α、bFGF在肺癌脑转移患者中的表达不存在相关性。

大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1、巨噬细胞炎症蛋白-2α基因表达的变化

目的 :探讨大鼠脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)、巨噬细胞炎症蛋白 1α (MIP 1α)mRNA表达的变化规律。方法 :SD大鼠 42只 ,随机分为 7组 ,采用改良Allen’s脊髓损伤打击模型 ,以逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)法测定伤段脊髓MCP 1、MIP 1αmRNA表达情况。结果 :正常脊髓组织内存在MCP 1、MIP 1αmR NA的表达 ,脊髓损伤后MCP 1、MIP 1αmRNA表达逐渐增强 ,MCP 1在伤后 2 4h达到高峰 ,MIP 1α伤后 6h达到高峰。结论 :MCP 1、MIP 1α存在于正常的脊髓组织内 ,脊髓损伤后MCP 1、MIP 1α表达迅速增强 ,提示参与了继发性脊髓损伤过程 ,并可能是损伤因素。

巨噬细胞炎性蛋白1α mRNA在人炎症牙髓组织中的表达及意义

目的:探讨炎症牙髓中巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)的表达,揭示MIP-1α在牙髓炎发生及发展中的可能作用。方法:选择正常牙髓组织及炎症牙髓组织各4例,采用HE染色观察正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织形态学改变,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织中MIP-1α的表达。结果:正常牙髓组织镜下可见成纤维细胞、胶原纤维、毛细血管及组织细胞;炎症牙髓组织可见血管扩张充血,淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞和中性粒细胞浸润,受损区可见毛细血管增生和胶原纤维的形成。正常牙髓组织中MIP-1αmRNA表达率为0;而炎症牙髓组织中MIP-1αmRNA表达率为100%,各例相对表达量分别为1.07、1.11、1.21和0.96。经确切概率法分析,炎症牙髓与正常牙髓组织中MIP-1αmRNA水平比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:MIP-1α在正常牙髓组织中无表达,而在炎症牙髓组织中有表达,MIP-1α参与了牙髓的炎症反应。

同型半胱氨酸诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

探讨同型半胱氨酸是否可诱导人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,使培养的人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸 ,采用逆转录聚合酶链反应和免疫细胞化学方法观察其巨噬细胞炎性蛋白 1α的表达。结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞可表达巨噬细胞炎性蛋白 1α。暴露于同一浓度 (0 .1mmol L)同型半胱氨酸 ,分别孵育 4、8和 16h ,其巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、3.2 6倍和 3.35倍 ;免疫细胞化学发现 ,上述各组巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 71± 0 .0 0 6、0 .0 81± 0 .0 0 6和 0 .12 8± 0 .0 0 9,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。暴露于不同浓度 (0 .1mmol L、0 .5mmol L和 1mmol L)的同型半胱氨酸 ,孵育 8h后 ,各组巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、4 .35倍和 4 .5 7倍 ,巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 81± 0 .0 0 6、0 .110± 0 .0 0 9和 0 .118± 0 .0 0 8,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。结果提示 ,同型半胱氨酸可诱导人脐静脉内皮细胞表达高水平的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA和蛋白。

组织因子对人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α的影响

目的探讨组织因子能否诱导人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,分组加入不同浓度的组织因子,采用酶联免疫吸附测定法巨噬细胞炎性蛋白1α蛋白的表达,用逆转录聚合酶链反应检测巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA的表达,并用单核细胞粘附率试验检测单核细胞粘附。结果组织因子呈剂量依赖性增加内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α蛋白,0.01、0.10、1.00及10.00 nmol/L组织因子分别使巨噬细胞炎性蛋白1α表达明显增加127%±14%、151%±11%、196%±13%及267%±43%。同时观察到组织因子促使单核细胞粘附率增加,并且粘附率与加入的组织因子浓度呈正相关。逆转录聚合酶链反应发现组织因子能促使巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA表达明显增加。结论组织因子能诱导内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α增强,这可能与组织因子致动脉粥样硬化作用机制有关。

脂质过氧化诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

为了解脂质过氧化损伤能否诱导内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,用不同浓度 (1、5和 10 μmol L)的联胺刺激培养人脐静脉内皮细胞脂质过氧化损伤 ,用硫代巴比妥酸荧光微量测定法测定样品中的丙二醛含量 ;用一步法提取RNA ,反转录多聚酶链反应检测巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA ;用免疫细胞化学法检测巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白的表达。结果发现 ,随联胺浓度增高 ,各组丙二醛含量依次增高 (P <0 .0 5 ) ,分别为对照组的 2 .0、5 .3和8.6倍 (F =138.6 4,P <0 .0 1)。正常内皮细胞表达较低水平的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA ,加联胺后各组巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达明显增加 ,分别是对照组的 4、6和 3.5倍。免疫细胞化学显示 ,巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白为棕黄色颗粒 ,主要分布于胞浆的核周区。图像分析结果显示各组细胞平均吸光度值增加 (P <0 .0 5 ) ,分别是对照组的 1.4、1.9和 1.3倍 (F =6 8.6 0 ,P <0 .0 1)。以上结果提示 ,联胺能引起内皮细胞脂质过氧化损伤 ,并诱导其产生巨噬细胞炎性蛋白 1α,吸引单核细胞粘附于内皮 ,并向内皮下间隙迁移 ,在动脉粥样硬化发生过程中可能起重要作用。

巨噬细胞抑制因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白3、糖类抗原19-9检测对胰腺癌患者预后的预测价值

目的探讨糖类抗原19-9(CA19-9)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)、巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)检测对胰腺癌患者预后的预测价值。方法选取82例胰腺癌患者作为观察组,另选取81例健康体检志愿者作为对照组。对比两组受试者MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平,分析胰腺癌患者预后的影响因素和MIC-1、IGFBP3、CA19-9单独及联合检测对胰腺癌患者预后的预测价值。结果观察组患者MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。82例胰腺癌患者根据预后情况分为好转组61例与预后不良组21例,好转组与预后不良组患者分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、MIC-1≥500 pg/ml、IGFBP3≥40 U/ml、CA19-9≥40 U/ml均为胰腺癌患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。MIC-1、IGFBP3、CA19-9联合检测预测胰腺癌患者预后的灵敏度和特异度分别为87.4%、71.9%,曲线下面积为0.816(95%CI:0.715~0.917),高于MIC-1、IGFBP3、CA19-9单独检测。结论MIC-1、IGFBP3、CA19-9水平升高均与胰腺癌患者预后不良密切相关,三者在胰腺癌患者预后预测中有较高的使用价值。

清火败毒饮对巨噬细胞高迁移率族蛋白1表达的影响

目的:观察中药清火败毒饮方(qinghuobaiduyin,QHBDY)对晚期炎症因子高迁移率族蛋白1(high mobility group box chromosomal protein 1,HMGB1)在RAW264.7巨噬细胞中表达的影响,以了解其抗炎症反应的细胞内源性保护机制。方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,通过正常SD大鼠血清、烧伤SD大鼠血清和中药QHBDY治疗后SD大鼠血清干预细胞,应用RT-PCR技术检测细胞中HMGB1表达。结果:正常SD大鼠血清干预RAW264.7巨噬细胞后,HMGB1mRNA的表达量与正常RAW264.7巨噬细胞中HMGB1表达量差异无统计学意义(P>0.05);应用烧伤SD大鼠血清干预RAW264.7巨噬细胞,HMGB1的表达量在干预3 h增高后又降为低水平表达,至18 h后急剧增加,于36 h达到高峰,至48 h仍维持高水平表达;应用中药QHBDY治疗后SD大鼠血清干预RAW264.7巨噬细胞,HMGB1的表达量在干预3 h增高后又降为低水平表达,于24 h出现缓慢增加,但较烧伤SD大鼠血清干预组低,两组差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:烧伤血清能引起HMGB1在RAW264.7中的高表达;中药QHBDY治疗后SD大鼠血清能降低RAW264.7中HMGB1的表达。

早期生长反应因子-1及乙酰肝素酶在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的:探讨早期生长反应因子(Egr)-1与乙酰肝素酶(heparanase)蛋白在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达情况及相关性。方法:采用免疫组织化学SABC法检测58例BTCC组织及10例正常膀胱黏膜组织的Egr-1蛋白、heparanase的表达情况,并分析两者表达情况与BTCC临床病理特征的关系,以及两者在BTCC中表达的相关性。结果:Egr-1蛋白和heparanase蛋白在10例正常膀胱黏膜组织中不表达,在BTCC组织中阳性表达率分别为70.69%(41/58)和58.62%(34/58)。Egr-1蛋白及heparanase蛋白阳性表达率在不同年龄、性别、肿瘤大小及数目的患者之间差异无统计学意义(P>0.05);不同病理分级及临床分期患者Egr-1蛋白及heparanase蛋白表达率差别有统计学意义(P<0.01)。在BTCC中Egr-1蛋白与heparanase蛋白表达呈正相关(r=0.3875,P<0.01)。结论:Egr-1及heparanase蛋白的高表达在BTCC的发生、发展中起重要作用,与非肌层浸润型膀胱癌进展为肌层浸润型膀胱癌过程相关。

盐酸戊乙奎醚诱导早期生长反应蛋白1的表达及其对人血管平滑肌细胞的增殖作用

目的探讨早期生长反应蛋白1(EGR1)在人血管平滑肌细胞(CRL-1999)增殖过程中的作用,以及影响下游基因和盐酸戊乙奎醚对其表达的影响。方法慢病毒转染敲低CRL-1999细胞中EGR1表达,构建siEGR1-CRL-1999细胞,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western Blot,WB)法实验验证其表达降低,同时观察下游基因细胞周期调控蛋白D1(CCND1)的表达变化。采用EDU法检测siEGR1-CRL-1999细胞的增殖能力。不同时间点观察用盐酸戊乙奎醚处理的CRL-1999细胞和siEGR1-CRL-1999细胞内EGR1蛋白的表达情况,并用WB法检测上述细胞不同时间点的磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2蛋白表达。结果成功构建siEGR1-CRL-1999细胞;siEGR1-CRL-1999细胞增殖能力较对照组降低,且CCND1的表达相应减弱;盐酸戊乙奎醚能诱导提高CRL-1999细胞的EGR1表达水平,1 h后开始提高,2 h时达峰值,并持续至8 h时;p-ERK1/2表达在处理1 h后达峰值,并维持至2 h时,而EGR1的蛋白表达变化在时间上总落后于p-ERK1/2。结论EGR1通过CCND1影响CRL-1999细胞增殖,盐酸戊乙奎醚可能通过ERK1/2通路诱导EGR1表达。