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党参多糖对Ana-1巨噬细胞和小鼠的免疫调节作用 被引量:20
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作者 史宝忠 胡建燃 +1 位作者 李平 徐凯 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期114-118,共5页
以中药党参为材料,研究其多糖成分对小鼠巨噬细胞Ana-1 和小鼠的免疫活性的影响。通过MTT 实验,检测党参多糖对Ana-1 细胞增殖的影响。利用ELISA 实验,检测不同浓度的党参多糖对Ana-1 细胞释放TNF-α和IL-1β的影响。用不同剂量的党参... 以中药党参为材料,研究其多糖成分对小鼠巨噬细胞Ana-1 和小鼠的免疫活性的影响。通过MTT 实验,检测党参多糖对Ana-1 细胞增殖的影响。利用ELISA 实验,检测不同浓度的党参多糖对Ana-1 细胞释放TNF-α和IL-1β的影响。用不同剂量的党参多糖灌胃小鼠,分别测定小鼠脾脏指数、淋巴细胞增殖活力以及血清中TNF-α和IL-1β的含量。体外实验结果显示党参多糖不影响Ana-1 细胞的增殖,却显著提高TNF-α和IL-1β的分泌,并呈浓度依赖关系。体内实验结果显示:与对照组相比,党参多糖中、高剂量组小鼠胸腺指数、淋巴细胞增殖指数以及血清中TNF-α和IL-1β的含量均显著增高,呈剂量依赖关系。因此,党参多糖能够有效提高小鼠巨噬细胞Ana-1 的免疫活力,增强小鼠的免疫功能。 展开更多
关键词 党参多糖 ana-1 细胞 TNF-Α IL-1Β 免疫调节
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三物白散对Ana-1巨噬细胞免疫功能的影响 被引量:4
2
作者 王毛妮 周春祥 孙秀娟 《河南中医》 2008年第1期31-33,共3页
目的:探讨三物白散(SWB)对巨噬细胞免疫功能的影响。方法:选用小鼠Ana-1巨噬细胞株,观察SWB对Ana-1细胞增殖、吞噬、趋化能力的影响,用放射免疫检测法检测SWB作用后的Ana-1细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。结果:细胞增值实验,SW... 目的:探讨三物白散(SWB)对巨噬细胞免疫功能的影响。方法:选用小鼠Ana-1巨噬细胞株,观察SWB对Ana-1细胞增殖、吞噬、趋化能力的影响,用放射免疫检测法检测SWB作用后的Ana-1细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。结果:细胞增值实验,SWB中小剂量组与空白组相比差异显著(P<0.05);吞噬实验,SWB大剂量组与空白组相比差异显著(P<0.05),并呈现剂量依赖关系;趋化实验,SWB各剂量组与空白组相比差异显著,呈现剂量依赖关系;与空白对照组相比,SWB各剂量组IL-1β水平升高,大剂量组IL-1β表达差异显著(P<0.05);IL-6、TNF-α的表达无显著差异。结论:SWB体外可显著活化巨噬细胞,促进增殖、提高吞噬能力,上调Th1型细胞因子IL-1β的表达。 展开更多
关键词 三物白散 ana-1细胞株 细胞免疫功能 小鼠
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Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定
3
作者 王桂花 周向梅 +5 位作者 尹晓敏 杨利锋 周海云 张交儿 刘爱林 赵德明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期84-85,88,共3页
目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exo-somes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70... 目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exo-somes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定。结果:电镜下可以观察到提取的exosomes平均大小为50~100nm。免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45000、43000和70000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示ex-osomes膜表面和内部有明显的金颗粒。结论:Ana-1巨噬细胞分泌exosomes。 展开更多
关键词 ana-1细胞 小囊泡 免疫胶体金 免疫印迹
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小鼠ANA-1巨噬细胞不同极化状态下补体组分mRNA动态分析 被引量:2
4
作者 袁梦娇 商正玲 +1 位作者 马亚萍 吴家红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期782-786,共5页
目的:观察小鼠ANA-1巨噬细胞不同极化状态下补体相关组分的mRNA动态变化。方法:分别以LPS(1μg/ml)、IL-4(20 ng/ml)体外刺激小鼠ANA-1细胞,于刺激后3、8、12及24 h时间点收获细胞,Trizol法提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测IL-... 目的:观察小鼠ANA-1巨噬细胞不同极化状态下补体相关组分的mRNA动态变化。方法:分别以LPS(1μg/ml)、IL-4(20 ng/ml)体外刺激小鼠ANA-1细胞,于刺激后3、8、12及24 h时间点收获细胞,Trizol法提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测IL-1β、CCL2、Arg-1的表达,判断细胞极化情况,检测胞内C3、Cf B、CRIg、C1q补体分子mRNA的动态表达。结果:细胞极化情况:刺激3 h后LPS组IL-1β、CCL2的mRNA表达上调,12 h达高峰(2^(-△△Ct)分别为297.0±31.0和19.9±3.3);在IL-4组中以Arg-1mRNA表达上调显著,于24 h达高峰(2^(-△△Ct):27.3±9.1),提示LPS组细胞向M1方向极化,IL-4组向M2方向极化。细胞内补体mRNA的动态:两极化组的相应补体组分均表现为不同程度的上调,其中:C1q、C3在M2极化组刺激8 h后显著上调,刺激12 h时达高峰(2^(-△△Ct)分别为94.9±12.9和11.3±2.4);Cf B因子在M1极化组中显著上调,以刺激12 h表达上调达高峰(2^(-△△Ct)为61.4±6.2);CRIg在两组中均在24 h时表达上调且具有显著性差异(P<0.05)。结论:LPS/IL-4刺激3 h后,ANA-1细胞分别向M1、M2方向极化;不同补体组分mRNA的表达在两组中均上调但表达谱不同,其中C1q、C3和CRIg在M2极化组中上调更为显著,而Cf B因子在M1极化组中显著上调;除CRIg外,C1q、C3及Cf B因子均在刺激12 h时上调达高峰,上述结果提示补体组分的变化可能与极化的巨噬细胞功能有关。 展开更多
关键词 ana-1 细胞极化 补体组分mRNA
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巨噬细胞株分泌的RCAS1对正常小鼠骨髓单个核细胞凋亡的影响
5
作者 聂芳娜 张伟华 +4 位作者 张秀莲 范星火 陈玮 侯素敏 刘晨 《山西医科大学学报》 CAS 2008年第1期26-28,共3页
目的研究巨噬细胞株分泌的RCAS1对正常小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)凋亡的影响。方法RT-PCR方法检测巨噬细胞株RCAS1基因表达,10例正常小鼠骨髓基质细胞RCAS1基因表达作为正常对照组。流式细胞术检测8例经巨噬细胞株培养上清作用后正常小... 目的研究巨噬细胞株分泌的RCAS1对正常小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)凋亡的影响。方法RT-PCR方法检测巨噬细胞株RCAS1基因表达,10例正常小鼠骨髓基质细胞RCAS1基因表达作为正常对照组。流式细胞术检测8例经巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡,8例经正常小鼠骨髓基质细胞培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡作为正常对照组。对8例巨噬细胞株RCAS1的表达强度与8例经巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡率进行相关分析。结果巨噬细胞株RCAS1 mRNA的表达强度为(1.98±0.24),明显高于正常对照组(0.84±0.21)(P<0.01)。②巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡率为(16.66±1.97)%,明显高于正常对照组(2.10±0.25)%(P<0.01)。③巨噬细胞株RCAS1mRNA的表达强度与巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡率呈正相关(r=0.95,P<0.01)。结论巨噬细胞株高表达RCAS1,RCAS1对正常小鼠BMMNC有促凋亡作用。 展开更多
关键词 凋亡 基因表达 细胞株 RCAS1
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金黄色葡萄球菌PV杀白细胞素S组分体外诱导单核白血病细胞株THP-1巨噬细胞的研究 被引量:1
6
作者 强雅雯 马筱玲 周馨 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第12期1243-1247,共5页
目的目前关于金黄色葡萄球菌PV杀白细胞素S组分(LukS-PV)体外诱导人源单核白血病细胞株THP-1巨噬细胞研究较少。文中主要探讨LukS-PV能否体外诱导人源THP-1巨噬细胞极化。方法佛波酯体外诱导THP-1为THP-1巨噬细胞,THP-1经佛波酯刺激48 h... 目的目前关于金黄色葡萄球菌PV杀白细胞素S组分(LukS-PV)体外诱导人源单核白血病细胞株THP-1巨噬细胞研究较少。文中主要探讨LukS-PV能否体外诱导人源THP-1巨噬细胞极化。方法佛波酯体外诱导THP-1为THP-1巨噬细胞,THP-1经佛波酯刺激48 h、72 h后,流式检测细胞表面标志物CD11b、CD14。采用0.1、0.2、0.4μmol/L的LukS-PV作用THP-1巨噬细胞,分别为0.1μmol/LLukS-PV组、0.2μmol/LLukS-PV组和0.4μmol/LLukS-PV组,另采用佛波酯诱导THP-1巨噬细胞为对照组。流式细胞术检测各组24 h、48 h CD80、CD206的表达,qRT-PCR检测细胞IL-12、TNF-α、TGF-β的mRNA表达水平。结果0.1μmol/LLukS-PV组、0.2μmol/LLukS-PV组、0.4μmol/LLukS-PV组细胞表面CD80表达量较对照组明显增高(P<0.01),0.2μmol/L LukS-PV组表达量最高(P<0.01)。0.2μmol/L LukS-PV组24h IL-12、TNF-αmRNA表达水平(7.32±0.91、5.29±0.51)较对照组(0.71±0.11、0.73±0.14)明显升高(P<0.01),48 h时IL-12、TNF-αmRNA表达水平(11.16±0.78、6.70±0.68)较对照组亦明显升高(P<0.01)。0.2μmol/L LukS-PV组24h、48h细胞表面CD80的表达较对照组明显升高(P<0.000)。结论LukS-PV能够刺激人源THP-1巨噬细胞向M1极化。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌PV杀白细胞素S组分 细胞 单核白血病细胞株THP-1 流式细胞 体外诱导
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毒热平注射液对流感病毒感染小鼠巨噬细胞株释放细胞因子的影响 被引量:3
7
作者 张艳丽 李秀萍 +2 位作者 王宁萍 摆茹 顾立刚 《宁夏医科大学学报》 2009年第5期561-563,共3页
目的研究毒热平注射液对流感病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1分泌炎症因子和趋化因子的影响。方法用100 TCID50流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1后换用不同浓度含药维持液继续培养,分别于药物作用... 目的研究毒热平注射液对流感病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1分泌炎症因子和趋化因子的影响。方法用100 TCID50流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1后换用不同浓度含药维持液继续培养,分别于药物作用后的6、12和24 h收集细胞上清液,用ELISA方法测定并分析药物对IL-6、MIP-1α和RANTES的含量影响。结果①在病毒感染的6、12、24 h三个时间点,各细胞因子的分泌均较正常细胞对照组显著增高(P<0.05)。②毒热平注射液可剂量依赖性地下调病毒感染巨噬细胞异常增高的IL-6、MIP-1α和RANTES分泌水平。结论毒热平注射液能调节病毒感染巨噬细胞的细胞因子分泌,通过细胞因子网络发挥抗病毒感染作用。 展开更多
关键词 毒热平 流感病毒 细胞 ana-1
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90 K/Mac-2 BP 基因沉默增强 HIV-1感染的单核巨噬细胞凋亡 被引量:3
8
作者 傅春燕 蒋虹 +3 位作者 薛婧 丛喆 陈霆 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第5期10-14,共5页
目的研究人单核巨噬细胞株U937的90K/Mac-2BP基因沉默后其mRNA和蛋白水平的表达及其对HIV-1感染单核巨噬细胞凋亡的影响。方法用人单核巨噬细胞株U937作为细胞模型,用R5嗜性的HIV-1全长感染性质粒包装并获得HIV-1病毒,待HIV-1感染U937细... 目的研究人单核巨噬细胞株U937的90K/Mac-2BP基因沉默后其mRNA和蛋白水平的表达及其对HIV-1感染单核巨噬细胞凋亡的影响。方法用人单核巨噬细胞株U937作为细胞模型,用R5嗜性的HIV-1全长感染性质粒包装并获得HIV-1病毒,待HIV-1感染U937细胞5 d后,细胞经PE-Annexin V,PerCP-7-AAD染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用基因沉默技术,将U937细胞中的90K/Mac-2BP基因沉默后,再经HIV-1感染,5 d后检测细胞凋亡情况。结果正常人单核巨噬细胞株U937,经HIV-1感染后细胞凋亡率为(16.27±0.30)%,而90K/Mac-2BP基因沉默后的U937细胞,经HIV-1感染后细胞凋亡率分别增加至(31.26±0.35)%、(25.76±0.30)%、(23.69±0.33)%,具有统计学差异(P<0.05)。结论 90K/Mac-2BP的表达水平能调节HIV-1感染的单核巨噬细胞凋亡。 展开更多
关键词 人单核细胞株 细胞-2结合蛋白 HIV-1 凋亡
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CRP促进THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1的表达 被引量:1
9
作者 王悦 陈连凤 +2 位作者 王晋峰 方全 严晓伟 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第12期1377-1380,共4页
目的探讨C反应蛋白(CRP)对单核细胞株(THP-1)来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)蛋白和mRNA的表达及相关信号转导通路的影响。方法用佛波醇脂诱导THP-1分化为巨噬细胞。用不同浓度CRP在体外干预,分别采用RT-PCR和... 目的探讨C反应蛋白(CRP)对单核细胞株(THP-1)来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)蛋白和mRNA的表达及相关信号转导通路的影响。方法用佛波醇脂诱导THP-1分化为巨噬细胞。用不同浓度CRP在体外干预,分别采用RT-PCR和细胞酶联免疫测定干预后巨噬细胞LOX-1抗原蛋白和mRNA的表达。同时观察当NF-κB、AP-1和MARK信号通路抑制剂存在时,CRP对LOX-1抗原和mRNA表达的影响。结果CRP促进巨噬细胞LOX-1蛋白和mRNA表达增加。NF-κB的抑制剂BAY11-7085能抑制CRP对LOX-1蛋白和mRNA表达的诱导作用。结论CRP能在转录及转录后水平诱导THP-1来源的巨噬细胞表达LOX-1,这种调节作用可能是通过NF-κB信号传导通路实现的。 展开更多
关键词 CRP 细胞 THP-1细胞株 NF—κB
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清透邪热方对甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达的影响 被引量:4
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作者 冯丽谦 杨丽丽 +2 位作者 李明真 孙雨 刘涛 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期289-294,共6页
目的研究清透邪热方体外抗甲型H1N1流感病毒效应机制。方法将清透邪热方制备成0.388、0.194、0.097、0.0485、0.024 25mg/mL不同浓度,用H1N1甲型流感病毒感染小鼠Ana-1巨噬细胞,给予不同浓度清透邪热方及达菲进行干预,检测肿瘤坏死因子... 目的研究清透邪热方体外抗甲型H1N1流感病毒效应机制。方法将清透邪热方制备成0.388、0.194、0.097、0.0485、0.024 25mg/mL不同浓度,用H1N1甲型流感病毒感染小鼠Ana-1巨噬细胞,给予不同浓度清透邪热方及达菲进行干预,检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)和白细胞介素-6(IL-6)表达,Toll样受体7(TLR7)及其下游髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达。结果清透邪热方能够抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TNF-α、IP-10、IL-6的表达;其中清透邪热方0.024 25mg/mL组降低H1N1病毒感染组TNF-α、IL-6显著(P<0.01);清透邪热方0.097mg/mL组降低IP-10显著(P<0.01)。清透邪热方能够抑制H1N1流感病毒感染后Ana-1细胞后TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高;其中清透邪热方0.048 5mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7mRNA、MyD88mRNA表达显著(P<0.01);清透邪热方0.024 25mg/mL组抑制H1N1病毒感染组NF-κB mRNA表达显著(P<0.01);清透邪热方0.048 5mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7蛋白表达升高显著(P<0.01),清透邪热方0.388mg/mL组抑制H1N1病毒感染组MyD88蛋白、NF-κB蛋白表达显著(P<0.01)。结论清透邪热方通过抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高,减少TNF-α、IP-10和IL-6表达,起到抗病毒作用。 展开更多
关键词 清透邪热方 甲型H1N1流感病毒 小鼠ana-1细胞 TLR-7/MyD88/NF-κB通路
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环孢素A对Th1细胞转录因子T-bet的影响
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作者 樊海波 张秀莲 +4 位作者 张伟华 范星火 陈玮 侯素敏 刘晨 《山西医药杂志(上半月)》 CAS 2008年第3期214-216,共3页
目的研究环孢素A(CsA)对小鼠骨髓型正常巨噬细胞株Ana-1诱导Th1细胞转录因子T-bet的影响,探讨CsA在再生障碍性贫血(再障)治疗中的免疫抑制作用。方法①反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ana-1细胞株培养上清作用后正常小鼠外周血单个... 目的研究环孢素A(CsA)对小鼠骨髓型正常巨噬细胞株Ana-1诱导Th1细胞转录因子T-bet的影响,探讨CsA在再生障碍性贫血(再障)治疗中的免疫抑制作用。方法①反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ana-1细胞株培养上清作用后正常小鼠外周血单个核细胞(PBMC)T-betmRNA的表达。②RT-PCR方法检测Ana-1细胞株培养上清加CsA作用后正常小鼠PBMCT-betmRNA的表达。结果①加入Ana-1细胞株培养上清后,T-betmRNA的表达水平为1.54±0.03,较对照组(1.03±0.06)增多(P<0.05);②加入Ana-1细胞株培养上清和CsA后,T-betmRNA的表达为0.66±0.02,较加入Ana-1细胞株培养上清组(1.54±0.03)减少(P<0.05)。结论CsA抑制巨噬细胞诱导T-bet的生成,可能是其在再障治疗中发挥免疫抑制作用的途径之一。 展开更多
关键词 亲环素A 贫血 再生障碍性 小鼠 巨噬细胞株ana-1
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Induction of apoptosis and change of bcl-2 expression in macrophage Ana-1 cells by all-trans retinoic acid
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作者 YIN DE LING XIU HAI REN +5 位作者 SHI ZHONG BU YA LAN WU LI ZHEN JIANG ZHI JIANG WU WEI HU GANG PEI (Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China)(Correspondence: Dr. G. Pei, Shanghai Institute of Cell Biology Chine 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1996年第2期137-144,共8页
Macrophage cells play an important role in the initiation and regulation of the immune response. All-trans retinoic acid (ATRA) and its natural and synthetic analogs (retinoids) affect a large number of biological pro... Macrophage cells play an important role in the initiation and regulation of the immune response. All-trans retinoic acid (ATRA) and its natural and synthetic analogs (retinoids) affect a large number of biological processes.Recently , retinoids have been shown promise in the therapy and prevention of various cancers. However, many interesting questions related to the activities of retinoids remain to be answered: (Ⅰ) Molecular mechanisms by which retinoids exert their effects; (Ⅱ) why the clinical uses of retinoids give undesirable side effects of varying severity with a higher freqllency of blood system symptoms; (Ⅲ)little is known for its impacts on macrophage cells etc. We set up this experiment, therefore, to examine the apoptosis of ATRA on macrophage Ana-1 cell line. Apoptosis of the cells was quantitated, after staining cells with propidium iodide (PI), by both accounting nuclear condensation and flow cytometry. When the cells were treated with ATRA at or higher than 1 μM for more than 24 h, significant amount of the apoptotic cells was observed. Induction of apoptosis of Ana-1 cells by ATRA was in time- and dose-dependent manners, exhibiting the similar pattern as the apoptosis induced by actinomycin D (ACTD). ATRA treatment of Ana-1 cells also caused the changes of the mRNA levels of apoptosis-associated gene bcl-2, as detected by Northern blot analysis. The temporal changes of bcl-2 expression by ATRA was also parallel to that by ACTD. In conclusion,ATRA can induce apoptosis in macrophage cells, which may be helpful in understanding of immunological functions retinoids. 展开更多
关键词 全反式视网膜酸 诱导 细胞 ana-1细胞 B细胞 细胞凋亡 BCL-2基因表达 抗癌药物 免疫功能
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结核分枝杆菌低氧反应蛋白的原核表达及对巨噬细胞ANA-1功能的影响 被引量:1
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作者 杨雨婷 李玉洁 杨国平 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第5期7-13,共7页
目的原核表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)Rv2626c基因编码的低氧反应蛋白(hypoxic response protein 1, HRP1),并分析该蛋白对小鼠巨噬细胞ANA-1(简称ANA-1细胞)功能的影响及作用机理。方法将Rv2626c基因克隆至表达... 目的原核表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)Rv2626c基因编码的低氧反应蛋白(hypoxic response protein 1, HRP1),并分析该蛋白对小鼠巨噬细胞ANA-1(简称ANA-1细胞)功能的影响及作用机理。方法将Rv2626c基因克隆至表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-Rv2626c,转入表达菌株BL21,诱导表达HRP1,经亲和层析法纯化和Western blot鉴定。使其作用于ANA-1细胞,用CCK8法检测ANA-1细胞的增殖活力,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡情况,Griess法及ELISA法分别检测一氧化氮(nitric oxide, NO)产生水平和肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)的分泌情况,同时采用核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)抑制剂Bay 11-7082、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)抑制剂U0126、SB 203580预处理ANA-1细胞后,检测NO、TNF-α、IL-1β变化情况。结果成功构建重组表达质粒pET-28a-Rv2626c,获得目的蛋白HRP1。与空白组相比,不同浓度的HRP1作用于ANA-1细胞后,细胞增殖活力未受抑制(P<0.05),凋亡率无明显差异,但培养细胞上清液中的NO、TNF-α及IL-1β含量均显著增加(P<0.05);若用Bay 11-7082及U0126预处理的ANA-1细胞,其NO及TNF-α的分泌量明显减少(P<0.001)。结论 HRP1对ANA-1细胞无细胞毒性,并可通过激活ANA-1细胞内NF-κB及MAPK信号通路促进其分泌具有抗菌效应的NO及TNF-α,增强其固有免疫效应,可作为结核疫苗候选优势抗原。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 低氧反应蛋白 细胞ana-1 细胞因子
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巨噬细胞集落刺激因子和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠乳腺癌4T1细胞迁移及血管内皮生长因子A表达的影响 被引量:2
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作者 古晓东 李飞栋 王玉 《肿瘤研究与临床》 CAS 2014年第8期510-513,共4页
目的 探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对乳腺癌4T1细胞迁移及血管内皮生长因子(VEGF)-A表达的影响.方法 分别用5、10 ng/ml M-CSF和GM-CSF处理小鼠乳腺癌4T1细胞株,采用实时荧光定量PCR方... 目的 探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对乳腺癌4T1细胞迁移及血管内皮生长因子(VEGF)-A表达的影响.方法 分别用5、10 ng/ml M-CSF和GM-CSF处理小鼠乳腺癌4T1细胞株,采用实时荧光定量PCR方法检测4T1细胞中细胞因子VEGF-AmRNA表达量的变化.划痕实验和Transwell实验检测用5 ng/ml M-CSF、5 ng/ml GM-CSF和10 ng/mlVEGF-A对4T1细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 经5、10ng/ml M-CSF分别处理4T1细胞后VEGF-AmRNA在12h和24 h的相对表达量分别为17.81±2.49和17.48±5.43、5.15±2.59和5.45±4.28;经5、10 ng/ml GM-CSF分别处理4T1细胞后VEGF-A mRNA在12h和24 h的相对表达量分别为9.77±2.39和7.61±2.80、6.53±2.41和6.30±2.89.与无细胞因子处理的对照组相比,除10 ng/ml GM-CSF处理4T1细胞24 h组VEGF-A mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)外,其他各组VEGF-A mRNA表达水平差异均有统计学意义(均P< 0.05),处理细胞12h时VEGF-A的表达较24 h时更明显(均P< 0.01).划痕实验显示M-CSF和GM-CSF可促进4T1细胞的迁移,但VEGF-A对4T1细胞的迁移无影响.Transwell实验发现,用M-CSF、GM-CSF和VEGF-A处理的实验组中4T1细胞的穿膜数量多于无细胞因子处理的对照组(均P< 0.05).结论 M-CSF和GM-CSF可促进小鼠乳腺癌4T1细胞迁移及VEGF-A的表达. 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 4T1细胞株 细胞集落刺激因子 粒-细胞集落刺激因子 血管内皮生长因子A 细胞迁移
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ox-LDL诱导的Raw264.7细胞炎症因子表达变化及PPARγSer273磷酸化调控作用观察 被引量:1
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作者 沈娜 方涛 +2 位作者 苏卫东 刘勇 李焕明 《山东医药》 CAS 2020年第24期27-31,共5页
目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株Raw264.7炎症因子的表达变化及PPARγSer273磷酸化的调控作用,探讨PPARγSer273磷酸化在动脉粥样硬化(AS)中的作用。方法取Raw264.7细胞并分为ox-LDL组和对照组,ox-... 目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株Raw264.7炎症因子的表达变化及PPARγSer273磷酸化的调控作用,探讨PPARγSer273磷酸化在动脉粥样硬化(AS)中的作用。方法取Raw264.7细胞并分为ox-LDL组和对照组,ox-LDL组以50 mg/L ox-LDL诱导,对照组不予处理,采用ELISA法检测两组细胞培养液中的TNF-α、IL-1β,Western blot法检测细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和PPARγSer273磷酸化蛋白,计算PPARγSer273磷酸化与PPARγ蛋白相对表达量的比值。取缺陷型Raw264.7细胞并分为4组,S273A+ox-LDL组细胞经PPARγSer273突变型质粒转染,并以50 mg/L ox-LDL诱导;S273A组细胞经PPARγSer273突变型质粒转染,但不予50 mg/L ox-LDL诱导;WT+ox-LDL组经PPARγ野生型质粒转染,并以50 mg/L ox-LDL诱导;WT组经PPARγ野生型质粒转染,但不予50 mg/L ox-LDL诱导;采用ELISA法检测细胞培养液中TNF-α和IL-1β分泌量,实时荧光定量PCR法检测细胞中TNF-α和IL-1βmRNA。结果ox-LDL组和对照组TNF-α的分泌量分别为229.43±10.92、186.85±16.12,IL-1β分泌量分别为69.68±6.87、54.80±3.27,PPARγSer273磷酸化与PPARγ蛋白相对表达量的比值为0.67±0.06、0.55±0.01,两组比较,P均<0.05。S273A+ox-LDL组、S273A组、WT+ox-LDL组、WT组TNF-α分泌量分别为333.05±41.44、251.47±24.73、445.68±31.63、373.64±37.59,TNF-αmRNA相对表达量分别为1.35±0.28、0.63±0.12、2.37±0.21、1.00±0.00,IL-1β分泌量分别为83.25±4.74、67.56±6.14、110.73±10.01、94.47±7.48,IL-1βmRNA相对表达量分别为1.18±0.09、0.67±0.13、1.55±0.15、1.00±0.00,S273A+ox-LDL组与WT+ox-LDL组比较,S273A组与WT组比较,P均<0.05。结论PPARγSer273磷酸化通过促进ox-LDL诱导的Raw264.7细胞炎症因子TNF-α和IL-1β的分泌和表达,促进了AS进程。 展开更多
关键词 氧化低密度脂蛋白 小鼠单核细胞白血病细胞株 RAW264.7细胞 肿瘤坏死因子α 细胞介素1β 过氧化物酶体增殖物激活受体γSer273 动脉粥样硬化
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脂多糖刺激RAW264.7和Ana-1形态改变及细胞因子表达的差异 被引量:2
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作者 石榴 方怡 +2 位作者 袁伟锋 李理 黄文杰 《国际呼吸杂志》 2009年第13期772-776,共5页
目的比较两株小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7和Ana-1经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导后在形态及细胞因子表达等方面的差异。方法MTT法检测不同终浓度(0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L)LPS作用后两株细胞增殖活力,确... 目的比较两株小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7和Ana-1经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导后在形态及细胞因子表达等方面的差异。方法MTT法检测不同终浓度(0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L)LPS作用后两株细胞增殖活力,确定最佳作用浓度。选择1mg/L.LPS刺激RAw264.7和Ana-1细胞,ELISA法分别于0h、4h、8h、12h、24h检测两株细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10的表达量。结果LPS终浓度为1mg/L时两株细胞存活率分别为(162.05±28.14)%、(159.92±20.43)%,显著大于同细胞其他浓度组别(P〈0.01);1mg/L LPS刺激后,两株细胞各细胞因子表达均为随时间呈先增多后减少趋势,峰值出现时间RAW264.7细胞早于Ana-1细胞。TNF—α的表达4h时RAW264.7细胞高于Ana-1(P〈0.01),8h、12h时低于后者(P〈0.05);IL-18的表达各时间点比较RAW264.7均高于Ana-1(P〈0.05);IL-6的表达各时间点比较RAW264.7均低于Ana-1(P〈0.05);IL-10的表达于刺激后4h,RAW264.7细胞高于Ana-1细胞(P〈0.05)。结论当LPS浓度为1mg/L时,Ana-1与RAW264.7细胞存活率均最强;经LPS刺激后,RAW264.7细胞TNF-α、IL-6、IL—1β、IL-10表达高峰早于Ana-1细胞,各细胞因子表达量各有侧重。研究者进行炎症相关实验时对Ana-1和RAW264.7的选择需考虑两者之间的差异。 展开更多
关键词 脂多糖 小鼠细胞 RAW264.7 ana- 1 细胞因子
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鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的原核表达及其对巨噬细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 翟凯新 刘丽婷 +3 位作者 陈晓文 陈越 高婧华 吴利先 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第11期1257-1261,共5页
目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对Ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上... 目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对Ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上,构建重组表达质粒pET-32a-ppe25,转入感受态细胞BL21(DE3)后,通过IPTG诱导表达融合蛋白PPE25-MAV。用Ni Resin FF纯化蛋白,并作用于巨噬系Ana-1细胞,流式细胞术(FCM)检测巨噬细胞凋亡率并且分析其变化。结果鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白表达载体构建成功,转化至BL21(DE3)后经IPTG诱导表达约59ku的蛋白,与预期大小相符;Western blot检测该蛋白能被His抗体识别。用纯化的PPE25-MAV蛋白作用小鼠巨噬系Ana-1细胞,与空白对照组相比,作用2h后细胞的早期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),细胞的晚期凋亡率和总凋亡率在0.5μg/ml与1μg/ml时均低于空白组(P<0.05),2μg/ml与5μg/ml的凋亡率与对照组比较差异无统计学意义;作用10h细胞的早期凋亡率仅在5μg/ml时升高(P<0.05),0.5、1和2μg/ml剂量组差异无统计学意义(P>0.05),细胞晚期凋亡率和总凋亡率在2μg/ml和5μg/ml时显著降低(P<0.05),0.5μg/ml和1μg/ml组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组质粒诱导表达的PPE25-MAV蛋白存在于上清和包涵体中,但主要以包涵体形式表达。纯化的PPE25-MAV蛋白对巨噬细胞凋亡有抑制作用,且主要作用于巨噬细胞的晚期凋亡阶段。 展开更多
关键词 鸟分枝杆菌 PPE25-MAV蛋白 ana-1细胞 细胞凋亡
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