柿叶总黄酮抑制巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的作用研究

目的探讨柿叶总黄酮对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇脂质蓄积的影响及其潜在机制。方法体外培养THP-1细胞,160nmol/L佛波酯诱导分化为巨噬细胞,与50μg/mL ox-LDL孵育建立巨噬细胞源性泡沫细胞模型,分别用不同浓度的柿叶总黄酮(0、0.5、1、2、4μg/mL)处理。油红O染色检测细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量,qPCR和Western blot分别检测SR-A和ABCA1 mRNA和蛋白表达情况。结果柿叶总黄酮能显著性抑制巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积,减少细胞内游离胆固醇(FC)、总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)含量,降低相关蛋白SR-A的摄取以及促进胆固醇外排关键蛋白ABCA1表达。结论柿叶总黄酮通过降低相关蛋白SR-A的摄取以及促进胆固醇外排关键蛋白ABCA1表达,减少细胞内胆固醇含量,抑制巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积。

刺梨汁对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响

目的 :探讨刺梨汁的抗动脉粥样硬化机制。 方法 :在刺梨汁参与下 ,氧化的极低密度脂蛋白 (Ox- VL DL)与小鼠腹腔巨噬细胞孵育一段时间 ,通过测定细胞胆固醇含量和观察细胞形态改变 ,分析刺梨汁对 Ox- VL DL 促泡沫细胞形成的影响。 结果 :较低浓度的刺梨汁能明显抑制 Ox- VL DL 对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯的堆积 (P<0 .0 0 1) ,并呈浓度依赖性。刺梨汁浓度为 2 μl/m l和 4μl/ml时 ,Ox- VL DL 堆积的细胞胆固醇酯含量分别被抑制了 5 9.8%和 90 .1%。形态学观察显示 ,经刺梨汁处理的巨噬细胞猩红阳性染色显著减少。 结论 :刺梨汁通过抑制Ox- VL DL 的促泡沫细胞形成来实现其抗动脉硬化的功能。

巨噬细胞源性泡沫细胞适配子PM1的特异性

目的研究特异性寡核苷酸适配子PM1与巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变结合的特异性,为动脉粥样硬化的体内靶向治疗提供实验依据。方法对适配子PM1进行FITC标记,荧光显微镜分别观察适配子与血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞、巨噬细胞源性泡沫细胞结合情况。采用高脂方法建立兔动脉粥样硬化模型,利用PCR方法和荧光显微镜观察适配子与动脉粥样硬化病变结合情况。结果适配子PM1与巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变组织高度特异性结合,但不结合血管平滑肌细胞、巨噬细胞、内皮细胞和正常动脉组织。结论筛选出的适配子PM1能特异性结合巨噬细胞源性泡沫细胞和动脉粥样硬化病变。

肥大细胞改变THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇含量及抑制胆固醇流出

目的:以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,探讨肥大细胞(MC)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量、分配和流出的影响及机制。方法:THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞在MC颗粒释放物存在或缺乏下与高密度脂蛋白3(HDL3)共育。高效液相色谱检测泡沫细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和酯化胆固醇(EC)含量,用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,运用逆转录聚合酶链反应检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA水平,采用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测HDL3及apoA-Ⅰ的降解。结果:MC组泡沫细胞内TC、FC明显高于对照组(TC对照组为527.3 mg/g,MC组为917.9 mg/g);EC/TC比值低于对照组(7.6%vs47.5%);细胞内胆固醇流出少于对照组(26.92%±2.6%vs40.98%±3.4%,P<0.05);而泡沫细胞ABCA1的mRNA水平与对照组无明显差异。MC颗粒释放物处理HDL3后,聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,约有28%的apoA-Ⅰ被降解,在分子量26 kD左右处出现了新的条带,产生了1个26 kD的小多肽。结论:肥大细胞可通过降解HDL3及apoA-Ⅰ抑制细胞内胆固醇流出而增加细胞内胆固醇蓄积,这个作用与ABCA1表达无直接关系。

仙人掌多糖对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇蓄积及其相关基因表达的影响

采用PMA和ox–LDL构建THP–1巨噬细胞源性泡沫细胞模型,观察不同浓度(5、10、15 nmol/L)仙人掌多糖(ODP–Ia)对泡沫细胞内脂质、胆固醇蓄积以及介导胆固醇流出的ABCA1、ABCG1、SR–BI基因表达的影响。结果显示:THP–1巨噬细胞泡沫化后胞内蓄积了大量脂质,高剂量(15 nmol/L)ODP–Ia能够显著减少胞内脂质、胆固醇蓄积,并增强ABCA1、ABCG1、SR–BI m RNA及蛋白表达(与单独ox–LDL处理组比较,P<0.05),但效果均次于阳性对照依折麦布组(P<0.05),低、中剂量(5、10 nmol/L)ODP–Ia作用效果均不显著。本研究结果表明,ODP–Ia可通过增强ABCA1、ABCG1、SR–BI基因表达来减少胞内胆固醇蓄积。

脂联素对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及胆固醇含量的影响及机制

目的探讨脂联素对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及胆固醇含量的影响及其可能的机制。方法体外培养RAW264.7细胞,加入20 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育48 h,将其诱导成泡沫细胞,加入不同浓度(0、1、5、10μg/mL)的脂联素干预24 h,RT-PCR测定ABCA1 mRNA的表达,高效液相色谱测定细胞内胆固醇含量。观察脂联素对泡沫细胞中ABCA1表达的影响。结果脂联素显著增加RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1 mRNA的表达(P<0.05),并增加细胞内胆固醇含量,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论脂联素可以增加巨噬源性泡沫细胞ABCA1转录水平,促进胆固醇流出,延缓AS的发生发展。

Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子的初步研究

目的利用Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子。方法通过80mg/L氧化性低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞为泡沫细胞;聚合酶链反应扩增文库;生物素-链霉亲和素磁珠分离法构建单链DNA文库;以巨噬细胞源性泡沫细胞为靶细胞,巨噬细胞和血管平滑肌细胞为反筛细胞,利用Cell SELEX技术筛选与巨噬细胞源性泡沫细胞结合的寡核苷酸序列,并对最后一轮筛选结果进行克隆测序。结果 PCR的退火温度对PCR产物的量有显著的影响,退火温度由65℃提高为72℃时的产物量明显增加。利用生物素-链霉亲和素磁珠分离法获得了纯度高、产量大的ssDNA文库;经过18轮筛选后,成功获得了28个与预期大小相同的ssDNA序列。结论利用Cell SELEX技术筛选出了巨噬细胞源性泡沫细胞的适配子,为研发用于动脉粥样硬化的早期无创诊断试剂和靶向治疗药物奠定了基础。

同型半胱氨酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的形成及细胞内胆固醇流出的影响。方法首先以160 nmol·L-1的佛波酯(PMA)刺激THP-1单核细胞48 h使其分化为巨噬细胞,继之用含0、50、100、200μmol·L-1的Hcy和100 mg·L-1的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育24 h,使其转化为泡沫细胞。采用油红O染色进行泡沫细胞定性分析,泡沫细胞面积计数法进行半定量分析,总胆固醇和游离胆固醇测定法进行定量分析。结果经PMA处理48 h后,呈簇集状悬浮状态的单核细胞分化为形态不规则、有伪足并贴壁的巨噬细胞,继之经Hcy和ox-LDL处理后的细胞中出现了大量红染的脂滴,细胞呈现泡沫化改变;细胞面积计数法显示实验组较对照组而言泡沫细胞阳性率升高(P<0.05),以100μmol·L-1Hcy组最明显(P<0.05);酶终点法测定胆固醇流出结果显示,实验组的胆固醇酯相对值明显高于对照组(P<0.05)。结论成功建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型,Hcy减少了细胞内胆固醇的流出,在动脉粥样硬化的发生发展中扮演重要作用。

丹参酮ⅡA对ox-LDL诱导的小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞蛋白质组的影响

目的应用双向电泳和质谱技术研究丹参酮ⅡA对ox-LDL诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞蛋白质组的影响,探讨丹参酮ⅡA调脂和抗动脉粥样硬化作用的分子机制。方法分离纯化获得人血清低密度脂蛋白(LDL),用CuSO_4进行氧化得到ox-LDL,与RAW264.7细胞共孵育,形成的泡沫细胞用含20 mg/L丹参酮ⅡA继续培养24 h作为丹参酮组,不含丹参酮ⅡA的溶液培养24 h作为对照组,经超声破碎细胞,离心,取上清进行蛋白质定量,丹参酮ⅡA组和对照组蛋白质等量上样,进行双向电泳,电泳完毕后用硝酸银染色得到不同样品的蛋白质组图谱。经Labscan软件进行差异蛋白质组分析,选取蛋白质表达量差异超过2倍的蛋白质作为差异蛋白。经胶内酶解及质谱分析,得到肽质量指纹图谱,通过Mascot数据库搜索,结合2-D图谱上蛋白质的分子量、等电点信息鉴定蛋白质。结果丹参酮组钙网蛋白、波形蛋白、过氧化物酶2、CuZn-超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)、亮氨酸拉链蛋白、stabilin-1、造血细胞系特异性蛋白表达量增加,而GTP蛋白、ATP合酶、mimitin、IL-5、热休克蛋白70(HSP70)、翻译控制肿瘤蛋白、氯离子通道蛋白1表达量降低。结论丹参酮ⅡA通过降低GTP蛋白和HSP70表达以及提高钙网蛋白表达改善泡沫细胞对脂代谢的调控功能;通过提高stabilin-1表达和降低ATP合酶表达调节细胞的吞噬能力;通过提高亮氨酸拉链蛋白和波形蛋白表达促进脂与脂蛋白的代谢;通过提高过氧化物酶2和CuZn-SOD表达起到清除氧自由基和抗脂质过氧化作用;通过降低mimitin和IL-5表达以及提高造血细胞系特异性蛋白表达而具有抗炎和抗细胞凋亡作用;通过降低氯离子通道蛋白1和翻译控制肿瘤蛋白表达具有抗肿瘤作用。因此可以认为丹参酮ⅡA可能具有调节血脂和抗动脉粥样硬化作用,在临床上可以用于心脑血管疾病的治疗。

NgBR对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运的影响

目的通过转染小干扰RNA(siRNA)沉默RAW264.7细胞源性泡沫细胞神经轴突生长抑制因子B受体(Ng BR)表达,研究Ng BR对泡沫细胞胆固醇逆转运(RCT)的影响,探索从RCT途径抗动脉粥样硬化(As)的新方法,为冠心病的临床防治提供新思路。方法利用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞,油红O染色进行鉴定。将泡沫细胞分为四组:空白对照组、siRNA阴性对照组、Ng BR-siRNA1转染组(si Ng BR-1组)、Ng BR-siRNA2转染组(si Ng BR-2组)。利用siRNA沉默泡沫细胞Ng BR基因表达,并利用real-time PCR和Western blot对其进行干扰效率鉴定。随后采用real-time PCR检测各组细胞肝X受体α(LXRα)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)及三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)mRNA表达,Western blot检测各组细胞相应蛋白含量,液闪计数仪检测胆固醇流出率。结果 ox-LDL成功诱导泡沫细胞形成;si Ng BR-1组和si Ng BR-2组Ng BR mRNA及其蛋白明显下调(P<0.05);si Ng BR-1组和si Ng BR-2组LXRα、ABCA1和ABCG1的mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05),胆固醇流出显著减少(P<0.05)。结论 Ng BR可以增加巨噬细胞源性泡沫细胞RCT的调控基因LXRα及其下游基因ABCA1、ABCG1的表达,从而减弱或者避免As的发生和发展,为冠心病的临床防治提供理论依据。

干扰素-γ对单核—巨噬细胞源性泡沫细胞ACAT-1表达的影响

目的观察干扰素-γ对THP-1、THP-1源性巨噬细胞泡沫细胞酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)表达的影响。方法将THP-1细胞与PMA孵育48小时使之分化为巨噬细胞,继以100mg/mlOx-LDL处理24小时使之形成泡沫细胞。将THP-1细胞、巨噬细胞、泡沫细胞分别用300U/mlIFN-γ干预24小时。RT-PCR检测ACAT-1mRNA水平,WesternBlot检测其蛋白表达。结果THP-1细胞分化成巨噬细胞以及形成泡沫细胞时ACAT-1mRNA及蛋白含量增加(P<0.05),而后两种细胞之间无显著性差异。与各自的对照组相比,经IFN-γ作用后三种细胞ACAT-1mRNA及蛋白表达均增强(P<0.05)。结论IFN-γ诱导单核、巨噬细胞、泡沫细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达,这可能是其促进动脉粥样硬化的机制之一。

苦瓜蛋白对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的形成及三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

为研究苦瓜蛋白对泡沫细胞形成的作用及其机制 ,用离心、超滤和色谱技术从苦瓜 (MomordicacharantiaL)果肉中提取苦瓜蛋白 (Momordicin) ,THP 1细胞经 16 0nmol/LPMA孵育 2 4h ,诱导其分化成巨噬细胞 ,然后用 2 5mg/L乙酰化低密度脂蛋白孵育 4 8h ,使其泡沫化 ,以观察苦瓜蛋白对泡沫细胞形成的影响。用高效液相色谱法分析细胞内胆固醇和胆固醇酯的变化 ,用逆转录—聚合酶链反应技术检测苦瓜蛋白对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响。结果发现 ,经苦瓜蛋白作用后 ,细胞内总胆固醇及胆固醇酯均显著减少 (对照组总胆固醇为 6 34± 2 1,苦瓜蛋白处理组为 2 5 7± 2 6 ,P <0 .0 1;对照组胆固醇酯为 339± 2 1,苦瓜蛋白处理组为 93± 9,P <0 .0 1)。胆固醇酯与总胆固醇比值从对照组的 6 2 .9%下降到 36 .2 %。同时 ,细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达显著上调 (P <0 .0 5 )。提示苦瓜蛋白抑制THP 1单核巨噬细胞源性泡沫细胞的形成可能与上调三磷酸腺苷结合盒转运体A1有关。

动脉粥样硬化与巨噬细胞源性泡沫细胞的相关研究进展

动脉粥样硬化(AS)是一种由基因、行为、环境等多因素引起的病理症状,可造成血管闭塞,从而引发心肌梗塞、猝死等严重的急性冠状动脉性疾病。巨噬细胞是机体防御系统的重要细胞成分之一,具有内吞脂质、释放免疫介质等能力,与AS的发生发展关系密切。抑制巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质聚积、减轻炎症反应可能对AS相关疾病的预防、治疗具有重大意义。本文综述了巨噬细胞及其吞噬氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)转化为泡沫细胞,以及药物对泡沫细胞形成过程的干预,说明巨噬细胞源性泡沫细胞是治疗AS相关疾病的关键。

化瘀祛痰方药对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1、CD36表达的影响

目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、CD36表达的影响,探讨该方药的作用机制,并比较方药全方及各拆方的疗效及调控作用。方法:体外培养THP-1细胞,佛波酯(PMA)使之巨噬化,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)使巨噬细胞泡沫化。细胞随机分为空白对照组、模型组、补气组、化瘀组、祛痰组和全方组。油红O染色观察细胞浆脂滴变化,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量分析ABCA1、CD36 mRNA水平。结果:模型组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.01);与模型组相比,全方组和祛痰组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低。RT-PCR结果提示模型组细胞ABCA1、CD36 mRNA水平显著升高;而化瘀祛痰方药及祛痰拆方含药血清可显著升高ABCA1 mRNA,显著降低CD36 mRNA水平。结论:化瘀祛痰方药及祛痰方可抑制ox-LDL诱导的THP-1细胞泡沫化,该作用可能与其上调ABCA1基因、下调CD36基因表达,从而减弱THP-1细胞对ox-LDL摄取有关。

二氢杨梅素对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的观察二氢杨梅素（DMY）对鼠源巨噬细胞性泡沫细胞胆固醇流出的影响并探讨其可能机制。方法用50 mg/L的氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）孵育鼠源性巨噬细胞RAW264.7经48 h诱导细胞泡沫化。将泡沫细胞分为对照组（只加RPMI 1640的培养基培养）和DMY1~4组（分别用10、20、40和80μmol/L DMY处理）,培养24h。采用[3H]标记的胆固醇检测细胞胆固醇的流出率,高效液相色谱测定细胞内游离胆固醇（FC）、胆固醇酯（CE）和总胆固醇（TC）的水平,Western blot检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达。结果与对照组比较,20、40和80μmol/L DMY组细胞的胆固醇流出率均显著增加,细胞内FC、TC和CE水平及CE/TC的比值均显著减少,ABCA1的表达显著上调,均呈剂量依赖性（均P〈0.05）。与对照组比较,DMY（10μmol/L）组细胞胆固醇流出率,细胞内FC、TC和CE水平,ABCA1的表达差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论 DMY促进了鼠源巨噬细胞性泡沫细胞胆固醇流出,其机制可能与上调泡沫细胞中ABCA1的表达有关。

小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用

目的:研究小凹蛋白在清道夫受体AI介导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中的作用.方法:用75mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)与巨噬细胞共同孵育不同时间.清道夫受体AI反义寡核苷酸、P38阻断剂SB202190预处理巨噬细胞,然后给予75mg/Lox-LDL处理24h.Western blot法检测清道夫受体AI和小凹蛋白的表达.高效液相色谱法检测细胞内胆固醇的含量,油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况.结果:经75mg/Lox-LDL处理巨噬细胞不同时间,ox-LDL呈时间依赖性促进清道夫受体AI的表达,而呈时间依赖性抑制小凹蛋白的表达.用清道夫受体AI反义寡核苷酸抑制清道夫受体AI的表达,小凹蛋白的表达明显增加.该组细胞内胆固醇含量为(119±7)mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P<0.01),细胞内脂滴亦明显减少.P38MAPK抑制剂SB202190能明显抑制清道夫受体AI的表达,而增加小凹蛋白的表达.SB202190处理组细胞内胆固醇含量为(173±14)mg/g,与ox-LDL处理组比较显著减少(P<0.01),细胞内脂滴亦明显减少.结论:小凹蛋白与清道夫受体AI协同参与了ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的形成过程.

动脉粥样硬化敏感小鼠C_（57）BL／6J腹膜巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立

泡沫细胞的出现是动脉粥样硬化斑块中有特征性的病理形态改变。本实验选择对动脉粥样硬化形成较敏感的纯系小鼠Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ，取其腹膜巨噬细胞与１０ｍｇ·Ｌ－１氧化低密度脂蛋白共同孵育９６ｈ，建立了典型的巨噬细胞源性泡沫细胞模型。实验结果显示，培养的泡沫样细胞与在无脂蛋白培养基中培养的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠巨噬细胞和在氧化低密度脂蛋白中培养的昆明种小鼠巨噬细胞比较，脂质成分大量增多，出现脂质颗粒，细胞内总胆固醇增加，其中胆固醇酯含量大于游离胆固醇，符合泡沫细胞的定义。本实验从离休细胞培养方面探寻建立小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞的可能性，为动脉粥样硬化的形成机理分析和防治研究提供了一种可靠的病理细胞模型。

不对称二甲基精氨酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 观察不对称二甲基精氨酸（ADMA）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法 THP-1单核细胞给予160nmol/L佛波酯（PMA）孵育48h,诱导分化成巨噬细胞,与80mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）孵育24h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞,用油红O染色在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化.再以不同浓度ADMA（1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L）作用泡沫细胞24h,以20μmol/L ADMA作用泡沫细胞不同时间（0h,6h,12h,24h,48h）,酶比色法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果 ①单核细胞加人PMA诱导48h后,分化为巨噬细胞,再经ox-LDL诱导24h后转化为泡沫细胞.②与对照组相比,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L,30μmol/L的ADMA作用于,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24h后,细胞内胆固醇含量均明显增加（P＜0.01）,③与对照组相比,20μmol/L的ADMA作用于THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞12h,24h,48h,细胞内胆固醇含量均明显增加（P＜0.01）.结论 ①单核细胞株THP-1经PMA诱导后,可分化为巨噬细胞,再经ox-LDL诱导后,可转化为泡沫细胞.②ADMA可以增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇的含量.