转粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因真核表达质粒的构建及生物学活性鉴定

目的 构建小鼠转粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,转染红白血病细胞系FBL 3,并鉴定其活性。方法 采用分子克隆技术 ,构建mGM CSF真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,电穿孔法将其导入红白血病细胞系FBL 3,G4 18筛选G4 18抗性细胞 ,限制性稀释法筛选G4 18抗性细胞克隆。PCR和RT PCR方法鉴定GM CSF基因整合和稳定表达。骨髓造血祖细胞增殖实验和骨髓造血祖细胞集落刺激实验鉴定其生物学活性。结果 采用PCR方法扩增mGM CSFcDNA序列 ,BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后装入 pcDNA3质粒 ,构建真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,酶切和测序结果与预期相符 ,无插入、丢失、突变 ,方向正确。PCR和RT PCR结果显示 ,GM CSF基因整合到受体细胞染色体中并稳定表达。表达GM CSF的FBL 3 GM CSF细胞培养上清可明显刺激小鼠骨髓单个核细胞增殖 ,并能刺激干细胞形成克隆 ,形成克隆数为 (5 4 .6 7± 4 .83)个 ,形成率为 0 .5 4 7%。结论 构建mGM CSF真核表达质粒pcDNA3 GM CSF ,获得稳定表达该基因并具有生物学活性的细胞克隆 ,为制备转GM CSF基因瘤苗 。

猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测

GM-CSF在机体免疫系统中发挥重要的免疫调节作用。用PHA与LPS体外联合刺激猪外周血单个核细胞,采用RT-PCR技术成功克隆了猪GM-CSF基因。序列分析表明,该序列与NCBI/GenBank上登载的序列有两个碱基不同;将猪与人、牛、羊、狗、猫、鼠等动物的GM-CSF基因序列相比较,其一致性分别为82.1%8、5%、88.1%、82.8%、83.7%、70.5%,在氨基酸水平上一致性为70.3%7、0.9%7、8.1%、70.3%7、1.9%、54.4%。然后利用生物信息学和分子生物学软件,对猪GM-CSF的结构进行预测,结果表明,猪GM-CSF为一结构松散的球状蛋白分子。猪GM-CSF基因的成功克隆及其编码蛋白结构的预测为开发高效、低毒且性质稳定的猪GM-CSF产品奠定了基础。

携带鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因腺病毒载体对B16黑色素瘤的抑制作用

目的 :观察携带鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因腺病毒载体 ( Ad CMVGM- CSF)对B1 6黑色素瘤的致瘤性及抑制作用。方法 :将 B1 6黑色素瘤细胞与 Ad CMVGM- CSF在 37℃、5 %CO2 培养箱中孵育 ( RPMI- 1 640培养基 ) 2 h后注射到 C5 7BL/ 6小鼠右侧背部皮下 ( MOI=5 0 0 ) ,观察 Ad CMVGM- CSF对 B1 6黑色素瘤致瘤性的抑制作用 ;观察瘤内一次注射及二次注射对 B1 6黑色素瘤的抑制作用。结果 :Ad CMVGM- CSF能有效地抑制 B1 6黑色素瘤细胞的致瘤性 ,抑瘤率达 60 %;瘤内一次注射 Ad CMVGM- CSF可延缓肿瘤的生长 ,二次瘤内注射 Ad CMVGM- CSF能够强化抗肿瘤效果。结论 :Ad CMVGM-

鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转染小鼠黑色素瘤B16F1细胞

目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含量。采用 [3 HTdR]渗入法 ,测定DA1G细胞和转染后第一天收获的以 1:10对倍稀释到 1:6 40的上清液及 [3 HTdR]混合培养后 ,渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm) ,以分析表达产物的生物活性。结果 :转染B16F1细胞的mGM CSF基因得到有效表达。但随着时间的推移 ,表达由第 1天的 135ng/ml下降到第 5天的 42 .2ng/ml。渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm)随上清液的稀释而逐步下降 ,由 1:10稀释度的9371下降到 1:6 40时的 32 5 1。和DMEM混合培养的DA1G细胞的 [3 HTdR]渗入量 (cpm)仅为 472。结论 :脂质体作为基因转移载体可有效地介导mGM CSF基因转染B16F1细胞 。

重组鼠白细胞介素12与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因联合治疗小鼠B16黑色素瘤

目的:研究重组鼠白细胞介素12(AdCMVIL-12)与粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(AdCMVGM-CSF)的腺病毒载体联合应用对B16黑色素瘤的抗肿瘤作用。方法:将B16黑色素瘤细胞接种于C57/BL6小鼠右侧背部皮下后,待瘤体直径达5mm时将荷瘤小鼠随机分为4组,分别为AdCMVIL-12组、AdCMVGM-CSF组、AdCMVIL-12加AdCMVGM-CSF组(联合治疗组)和AdCMVLacZ组(对照组),每组12只,并于肿瘤组织局部分别多点注射相对应剂量的腺病毒载体,观察各组小鼠肿瘤的生长情况及其诱导的细胞免疫反应,检测各组小鼠血清IL-12和GM-CSF表达水平的变化。结果:病理学观察,联合治疗组肿瘤组织内可见大片凝固性坏死,有大量的淋巴细胞、巨噬细胞浸润。治疗30 d后,联合治疗组肿瘤平均体积为(60.73±11.36)mm3,与对照组、AdCMVIL-12组和AdCMVGM-CSF组[分别为(675.18±80.59)、(186.91±19.15)和(223.45±23.11)mm3]比较差异均有显著性(P<0.01)。同时,AdCMVIL-12与AdCMVGM-CSF联合基因治疗可有效延长IL-12和GM-CSF的表达时间,并且对B16黑色素瘤细胞具有很强的特异性杀伤作用,杀伤率为(69.53±9.20)%。结论:IL-12与GM-CSF联合基因治疗可增强荷B16黑色素瘤小鼠的抗肿瘤免疫反应,并能有效降低单独应用AdCMVIL-12的毒副作用。

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转移表达及对慢性乙型肝炎细胞免疫功能影响的实验研究

为了探讨人GM－CSF基因转移表达对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响，运用携带人GM－CSF基因的重组腺病毒转染慢性乙型肝炎患者PBMCs，表明以重组腺病毒为载体的人GM－CSF基因在转染细胞中，可持续表达1．26±0．065～2．09±011ngs·ml-1·24h－1水平26天左右。通过观察慢性乙型肝炎患者PBMCs在GM－CSF基因转架前后及分泌GM－CSF细胞和慢性乙型肝炎患者PBMCs已共同培养前后淋巴细胞增殖反应和CD3、CD4、CD8、CD16、CD19淋巴细胞比率的变化，提示GM－CSF基因转染的淋巴细胞及与分泌GM－CSF细胞共同培养的淋巴细胞增殖反应增强（P＜0．01），CD3、CD4、CD8、CD16、CD19淋巴细胞比率无明显变化（P＞0．05）．小剂量IL－2（25IU／ml）存在时，GM-CSF基因转染及与分泌GM－CSF细胞共同培养的PBMCs中CD3、CD4、CD16淋巴细胞比率升高（P＜0.01），CD8、CD19淋巴细胞比率未见明显变化（P＜0.05）。

转粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因瘤苗治疗T细胞淋巴瘤的实验研究

目的:探讨转粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophge colong stimulating factor,GM-CSF)基因瘤苗治疗小鼠T淋巴细胞瘤的方法。方法:将小鼠GM-CSF真核表达质粒用电穿孔法导入小鼠淋巴瘤细胞系RMA,有限稀释法制备单个细胞克隆,经RT-PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验筛选相对高表达GM-CSF的RMA克隆,该克隆细胞经丝裂霉素灭活后免疫小鼠以诱导其产生抵抗RMA肿瘤细胞再攻击的能力。结果:获得了高表达GM-CSF的RMA克隆,将其用丝裂霉素灭活后免疫小鼠使小鼠使小鼠产生了抗肿瘤免疫保护力。结论:转GM-CSF基因瘤苗可作为有效的抗肿瘤瘤苗。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转染的骨髓基质细胞治疗脑梗死的疗效及机制研究

目的探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因转染的骨髓基质细胞（BMSCs）治疗脑梗死的疗效及机制。方法 135只SD大鼠随机分为假手术组（30只）、对照组（30只）、BMSCs组（30只）和GM-CSF-BMSCs组（45只）。采用线栓法制作短暂性大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,24 h后分别将α-MEM培养基、BMSCs和GM-CSF基因转染的BMSCs植入到对照组、BMSCs组和GM-CSF-BMSCs组大鼠缺血脑组织周边区域（IBZ）。移植后第3 d、7 d和21 d进行神经损伤严重程度评分（NSS）,并检测大鼠脑梗死体积及IBZ区域凋亡神经细胞数目。GM-CSF-BMSCs组采用荧光免疫组化染色方法检测植入细胞在大鼠IBZ局部的存活与分化。结果与对照组比较,BMSCs组细胞移植后21 d时NSS及脑梗死体积占半球体积百分值（HLV）明显下降（均P〈0.05）,细胞移植后3 d、7 d和21 d时凋亡细胞数明显下降（均P〈0.05）;GM-CSF-BMSCs组细胞移植后7 d、21 d时NSS及HLV明显下降（P〈0.05~0.01）,细胞移植后3 d、7 d和21 d时凋亡细胞数明显下降（均P〈0.01）。与BMSCs组比较,GM-CSF-BMSCs组大鼠细胞移植后7 d、21 d时NSS均明显降低（均P〈0.05）,移植后21 d时HLV明显降低（P〈0.05）,细胞移植后3 d、7 d和21 d时凋亡细胞数明显降低（均P〈0.05）。GM-CSF-BMSCs组植入细胞可在IBZ区域存活并表达神经细胞的标志性蛋白NeuN。结论同种异体GM-CSF基因转染的BMSCs治疗脑梗死的疗效较好,可能与其抗凋亡、神经替代及保护作用有关。

阳离子脂质体介导粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的黑色素瘤细胞作瘤苗的研究

目的本研究拟探讨采用阳离子脂质体介导的鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的B16F1细胞作为瘤苗的抗肿瘤效果。方法阳离子脂质体复合mGMCSF DNA转染B16F1细胞,ELISA法检测mGMCSF在B16F1中的表达。[3HTdR]掺入法分析B16F1分泌的mGMCSF生物活性。γ射线照射灭活基因修饰的B16F1细胞皮下免疫小鼠,ELISA分析小鼠血清中的mGMCSF水平。7 d后免疫鼠皮下攻击未修饰的B16F1细胞以检测瘤苗在小鼠体内的抗肿瘤效果5。1Cr释放实验检测免疫鼠抗B16F1的特异CTL反应。结果阳离子脂质体介导mGMCSF基因转染B16F1细胞后,未经阳性克隆筛选,mGMCSF得到特异且具有生物学活性的表达。但表达逐步下降由第1天的(135.5±21.1)μg/L下降到第5d的(47.8±5.3)μg/L。随γ射线照射剂量的增加,mGMCSF的表达逐步降低,但仍具有生物学活性。γ射线照射的5×105基因修饰B16F1接种小鼠后,鼠血清中的mGMCSF水平在4 h时为(198.4±23.1)ng/L,攻击的B16F1细胞在接种瘤苗的小鼠体内的生长完全被抑制,51Cr释放实验结果显示该瘤苗在小鼠体内诱导了特异的CTL反应。结论本研究表明阳离子脂质体作为基因载体介导鼠粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子基因转染的黑色素瘤B16F1细胞,作为瘤苗在小鼠体内可有效地激发抗肿瘤免疫。

山羊粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因克隆

本研究拟克隆山羊粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因,并对其进行序列分析。提取山羊肝脏组织RNA,并反转录为cDNA,根据GenBank中山羊GM-CSF基因序列(登录号:DQ010419.1),设计GM-CSF特异性引物,扩增山羊GM-CSF基因。结果显示,山羊GM-CSF基因全长435bp,共编码144个氨基酸,GM-CSF理论分子量为14.95kD,理论等电点为5.76,不稳定系数为47.27,脂肪系数为81.87。本研究克隆了山羊GM-CSF基因,为山羊GM-CSF基因抗病功能研究及免疫佐剂研发奠定了基础。

基于CT征象和血清巨噬细胞集落刺激因子、β-连环蛋白构建的联合模型对孤立性肺结节的评估价值

目的探讨基于CT征象和血清巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、β-连环蛋白(β-Catenin)构建的联合模型对孤立性肺结节的评估价值。方法选取2020年2月至2023年2月萍乡市人民医院病理结果显示孤立性肺结节的105例患者作为研究对象,以孤立性肺结节性质为结局指标,软件计算建模组所需样本量为75例,故随机抽取75例作为建模组、其余30例作为验证组,分析建模组孤立性肺结节不同性质患者一般资料、CT征象、生化指标,多因素logistic回归分析法筛选影响孤立性肺结节性质的独立影响因子,并建立预测模型。用验证组临床资料进行验证并将验证组临床资料代入预测模型,根据预测概率绘制ROC曲线评估该预测模型的效能。结果建模组75例病例中,良性肺结节43例(57.33%)、恶性肺结节32例(42.67)。单因素分析结果显示,良性、恶性肺结节患者毛刺征、分叶征、血管集束征、胸膜凹陷征、磨玻璃密度、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、癌胚抗原(CEA)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、M-CSF、β-Catenin水平与建模组孤立性肺结节性质有关,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示:毛刺征(β=1.572,OR=1.612,95%CI=1.475~2.159)、分叶征(β=1.484,OR=1.650,95%CI=1.408~2.184)、血管集束征(β=1.292,OR=1.674,95%CI=1.466~2.198)、磨玻璃密度(β=1.307,OR=1.785,95%CI=1.501~2.263)、CEA(β=0.915,OR=1.797,95%CI=1.505~2.199)、NSE(β=0.920,OR=1.824,95%CI=1.618~2.218)、M-CSF(β=0.859,OR=1.765,95%CI=1.506~2.301)、β-Catenin(β=0.867,OR=1.806,95%CI=1.542~2.325)是影响建模组孤立性肺结节性质的独立危险因素(P<0.05),据此建立的联合模型ROC曲线结果显示:该模型评估孤立性肺结节良恶性的灵敏度为90.50%、特异度为75.26%、AUC为0.880(95%CI=0.802~0.935)、阳性似然比为4.05、阴性似然比为0.12、阳性预测值为82.80%、阴性预测值为89.90%。结论毛刺征、分叶征、血管集束征、磨玻璃密度及CEA、NSE、M-CSF、β-Catenin水平升高是影响孤立性肺结节良恶性的独立影响因素,据此构建的联合模型评估孤立性肺结节良恶性的效能较高。

血管瘤患儿血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子及转录激活因子3水平与瘤体增生的相关性

目的探索血管瘤患儿血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及转录激活因子3(STAT3)的表达水平并分析其与瘤体增生的相关性。方法选取2020年1月—2023年1月收治的152例血管瘤增生患儿作为研究对象,分为增生期组(87例)与退化期组(65例),另选择同期确诊为血管畸形的53例患儿作为血管畸形组。对血清GM-CSF、STAT3及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管生成素-1(Ang-1)的表达水平进行检测;Pearson法相关性分析血清GM-CSF、STAT3与bFGF、VEGF、HIF-1α、Ang-1的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GM-CSF、STAT3对血管瘤瘤体增生的预测价值;多因素Logistic回归分析血管瘤瘤体增生的影响因素。结果增生期组患儿血清bFGF、VEGF、HIF-1α、GM-CSF、STAT3表达水平高于血管畸形组及退化期组患儿(P<0.05),但血清Ang-1表达水平低于血管畸形组及退化期组患儿(P<0.05);Pearson法相关性分析显示,增生期组患儿血清GM-CSF及STAT3水平均与bFGF、VEGF、HIF-1α水平正相关,与Ang-1水平负相关;ROC曲线下面积显示,GM-CSF和STAT3单独预测血管瘤瘤体增生风险的AUC分别为0.847,0.822,联合预测的AUC为0.918,联合预测的效能显著大于GM-CSF单独诊断的AUC(Z=2.459,P=0.014),STAT3单独诊断的AUC(Z=3.371,P=0.001)。多因素Logistic回归分析显示GM-CSF、STAT3是血管瘤瘤体增生的影响因素(P<0.05)。结论血管瘤瘤体增生患儿血清GM-CSF及STAT3表达水平升高,是瘤体增生的影响因素,联合检测能较好的预测血管瘤瘤体增生风险。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、血清淀粉样蛋白A及肺表面活性蛋白D与难治性肺炎支原体肺炎的关系及其临床意义

目的探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、血清淀粉样蛋白A(SAA)及肺表面活性蛋白D(SP-D)与难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)的关系,并分析其用于临床诊断的价值。方法选取2020年1月至2022年12月湖北省宜昌市妇幼保健院120例MPP患儿为研究对象,根据治疗情况分为普通型肺炎支原体肺炎(GMPP)组(77例)和RMPP组(43例)。对比分析两组患儿一般资料、临床症状及两组患儿血清GM-CSF、SAA及SP-D水平,采用受试者工作特征曲线探讨GM-CSF、SAA、SP-D及联合试验对RMPP的诊断效能。结果RMPP组患儿发热时间长于GMPP组,合并胸腔积液、肺不张患儿比例高于GMPP组(P<0.05);RMPP组患儿血清GM-CSF、SAA及SP-D水平明显高于GMPP组(P<0.05)。RMPP患儿急性期血清GM-CSF、SAA及SP-D水平明显高于恢复期(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,发热时间长、胸腔积液、肺不张、血清GM-CSF、SAA及SP-D升高是RMPP的独立危险因素(P<0.05)。GM-CSF、SAA与SP-D均具有诊断RMPP的效能,但灵敏度相对较低。以三项指标并联试验对RMPP诊断的ROC曲线下面积为0.920,灵敏度为86.0%,特异度为80.5%,临床应用价值大三项指标单独使用。结论血清GM-CSF、SAA及SP-D升高与RMPP的发生发展密切相关,三项指标并联试验可用于儿童RMPP的辅助诊断。

猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的克隆和序列分析及其基因表达

采取三元杂交猪的外周血,提取单核细胞总RNA,采用RT-PCR克隆猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)cDNA(GenBank登录号为DQ108393)。以pcDNA3.1(-)为质粒载体,构建猪GM-CSF基因真核表达质粒pGM-CSF,对克隆片段进行测序,并进行不同物种间同源性的比较。将重组质粒转染COS-7细胞,Western blotting鉴定表达蛋白的特异性。序列分析表明,GM-CSF的cDNA开放阅读框为435 bp,编码144个氨基酸和大部分信号肽,与用作PCR引物设计的参考序列比较,其核苷酸的同源性为97.5%,氨基酸的同源性为95.1%,同绵羊、人、牛、小鼠和犬的GM-CSF序列比较,其核苷酸的同源性分别为86.2%、80.5%、81.7%、69.7%和81.8%,氨基酸的同源性分别为78.5%、71.3%、70.3%、55.9%和71.5%。Western blotting证实目的基因可以在真核细胞中特异性的表达GM-CSF蛋白。以上结果表明,猪的GM-CSF基因被成功克隆,它存在着种属特异性。这为进一步研究该基因的生物学作用特别是利用GM-CSF增强DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因修饰的树突状细胞疫苗增强体外抗肿瘤免疫效应

目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因修饰树突状细胞（DC）后形态、表型及功能的变化,以及增强DC疫苗对肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法 小鼠尾静脉注射趋化因子配体3（CCL3）,分选得到B220- CDllc＋细胞,经细胞因子培养诱导分化DC.在体外用含GM-CSF基因的重组腺病毒（AdGM-CSF）转染DC,酶联免疫吸附试验（ELJSA）检测转染后GM-CSF的水平.通过细胞形态学观察、表型分析及混合淋巴细胞反应（MLR）,检测GM-CSF基因修饰前后DC的变化.反复冻融法制备胃癌可溶性抗原,将其与GM-CSF基因修饰的DC共同培养,制备DC疫苗,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测活化的T淋巴细胞在体外对小鼠前胃癌细胞（MFC）的杀伤作用,ELISA法检测干扰素γ（INF-γ）的分泌情况.结果 CCL3注射后,外周血中B220- CD11c＋细胞明显增加,48 h达到高峰[占外周血单个核细胞的（13.88±1.10）%].AdGM-CSF转染后,培养液上清中GM-CSF浓度升高,当感染复数（MOI）为1：100时达到高峰[（130.00±12.61）pg/m1].经GM-CSF.基因修饰的DC在形态上更趋成熟,MHCⅡ类分子、CD80、CD86等细胞表型明显上调,具有更强的刺激T细胞增殖的能力.荷载胃癌抗原的DC激活的T淋巴细胞对MFC细胞具有特异性杀伤作用,并产生高水平的INF-γ[（1245.00±13.75）pg/ml].结论 GM-CSF转染DC后,能大量表达GM-CSF,DC形态及细胞表型更趋成熟,刺激T细胞增殖能力明显增强.GM-CSF基因修饰的DC在体外可诱导出针对靶肿瘤细胞的特异性杀伤作用.

丹蓝仙硼疗氟胶囊对氟中毒大鼠骨保护蛋白配体和巨噬细胞集落刺激因子基因及其蛋白表达水平的影响

目的 研究丹蓝仙硼疗氟胶囊对饮水型氟中毒大鼠骨组织中骨保护蛋白配体（OPGL）和巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）mRNA及其蛋白质表达的影响.方法 以72只SD大鼠为研究对象,按体重均衡随机分为6组（组内雌雄各半）：氟中毒组、高剂量药物干预组、中剂量药物干预组、低剂量药物干预组、对照组、硼砂治疗组.除对照组外,各实验组均饮用50 mg/L含氟水,复制氟中毒动物模型.各药物组应用中药丹蓝仙硼疗氟胶囊,高、中、低剂量药物干预组按大鼠每千克体质量每天分别给药0.8、0.4和0.2 g,阳性药物对照（硼砂）剂量为大鼠每千克体质量每天0.8 g.氟电极法检测尿氟、骨氟含量,HE切片观察骨骼病变,并测定骨小梁厚度、骨小梁密度及骨皮质厚度.应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法和免疫组织化学（EnVision法）染色,观察骨组织中OPGL和M-CSFmRNA及其蛋白表达的变化.结果 （1）氟中毒大鼠10/12发生氟斑牙;低剂量药物干预大鼠2/12发生氟斑牙.中、高剂量药物干预组,正常对照组及硼砂治疗组均无氟斑牙发生.氟中毒组骨氟尿氟明显高于对照组,高中剂量干预组及硼砂治疗组显著降低.（2）与对照组比较,氟中毒大鼠骨小梁厚度、骨皮质厚度及骨小梁密度均明显减少,而各药物组大鼠骨小梁厚度、骨皮质厚度及骨小梁密度均与对照组无明显差异.（3）与对照组比较,氟中毒大鼠骨组织OPGL、M-CSF mRNA表达均增高,差异有统计学意义（P＜0.05）.与氟中毒组比较,高、中剂量药物干预组及硼砂治疗组OPGL mRNA表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;高、中、低剂量药物干预组及硼砂治疗组M-CSFmRNA表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.（4）与对照组比较,氟中毒大鼠OPGL蛋白表达增高,M-CSF蛋白表达降低;与氟中毒大鼠比较,高、中、低剂量药物干预组及硼砂治疗组OPGL蛋白表达降低,M-CSF蛋白表达有所升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 氟可能通过上调OPGL和M-CSFmRNA及其蛋白的共同表达而影响骨代谢;丹蓝仙硼疗氟胶囊能通过下调OPGL mRNA和M-CSF mRNA的表达影响骨重建.

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达基因疫苗的免疫对断奶仔猪某些代谢物浓度的影响

选择40头断奶的长×大二元杂交仔猪，随机分为4组，每组10头，公母各半。其中1组为对照组。2～4组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的基因疫苗pcS／2SS、pGM—CSF／SS和pCM—CSF＋pcS／2SS。研究这些基因疫苗对断奶仔猪血浆代谢物浓度的影响。结果显示。对照组和pcS／2SS基因疫苗免疫组仔猪血浆葡萄糖浓度没有明显变化，pGM—CSF＋pcS／2SS免疫组呈现下降的趋势。融合表达质粒pGM—CSF／SS的免疫则可提高血浆葡萄糖的浓度；血浆游离脂肪酸的分泌水平各免疫组间无明显差异；血浆尿素氮的浓度pGM—CSF／SS免疫组有上升的趋势。在第2周、4周和6周血浆尿素氮的浓度高于其它3个组（P〉0．05）。pcS／2SS免疫组则随免疫时间的延长而逐渐下降。对照组和pGM—CSF＋pcS／2SS免疫组一直保持比较平稳的态势。结果表明。GM—CSF提高了SS基因疫苗的免疫效果。pGM—CSF／SS要优于pGM—CSF＋pcS／2SS共同免疫。

粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子联合动员异基因造血干细胞移植

背景:目前FDA已批准应用于临床外周血造血干细胞移植的动员剂只有粒细胞集落刺激因子和粒-巨噬细胞集落刺激因子,其中粒细胞集落刺激因子单药应用是目前最主要的动员方案,但可引起供者骨骼肌肉酸痛、发热等不良反应。目的:回顾性分析以粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子联合应用为动员方案的异基因造血干细胞移植临床效果。方法:选择2004-01/2009-10河南省人民医院血液科以粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子联合应用为动员方案进行血缘全相合异基因造血干细胞移植51例,分析移植物成分、造血重建及移植物抗宿主病的发生率。结果与结论:动员96h后CD34+细胞占单个核细胞的比例为(0.97±0.13)%,CD34+CD38-细胞占CD34+细胞的比例为(37.49±4.03)%;移植后的快速造血重建与CD34+细胞、CD34+CD38-细胞输入量呈负相关。Ⅰ度、Ⅱ～Ⅳ度急性移植物抗宿主病的发生率分别为25.5%,15.7%;局限性、广泛性慢性移植物抗宿主病的发生率分别为39.2%,21.2%。提示在血缘全相合异基因造血干细胞移植中,粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子联合可有效实现干细胞动员,所获CD34+细胞完全可以满足快速造血重建的需要;输入较多的CD34+细胞、CD34+CD38-细胞可能利于快速造血重建。

急性胆囊炎患者血清补体C3、巨噬细胞集落刺激因子、前白蛋白水平及临床意义分析

目的:分析急性胆囊炎患者血清补体C3、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、前白蛋白(PAB)水平及其临床意义。方法:选取2022年5月—2024年3月佛山市高明区人民医院收治的100例急性胆囊炎患者为观察组,选取同院30例健康体检者为对照组。测定两组血清补体C3、M-CSF、PAB水平。比较观察组与对照组各指标差异。将100例急性胆囊炎患者根据疾病严重程度分为轻度组(n=35)、中度组(n=45)、重度组(n=20),比较三组各指标差异,分析各指标对重度急性胆囊炎的诊断价值。将100例急性胆囊炎患者根据预后情况分为预后良好组(n=88)与预后不良组(n=12),比较两组各指标差异。结果:观察组血清补体C3、PAB水平低于对照组,M-CSF水平高于对照组(P<0.001)。重度组、中度组补体C3、PAB水平低于轻度组,M-CSF水平高于轻度组(P<0.05);重度组补体C3、PAB水平低于中度组,M-CSF水平高于中度组(P<0.05)。预后不良组血清补体C3、PAB水平低于预后良好组,M-CSF水平高于预后良好组(P<0.001)。补体C3、M-CSF、PAB联合诊断的受试者工作特征曲线下面积为0.856(P<0.001),高于各指标单独诊断。结论:急性胆囊炎患者补体C3、M-CSF、PAB水平与病情程度、预后相关,可单独或联合用于急性胆囊炎病情辅助评估。