TGF-β_(1)信号通路和巨噬细胞极化在肾纤维化中的调控机制及其相互作用关系

肾纤维化是慢性肾脏病进程中,肾组织受感染、创伤和血液循环障碍等因素刺激,炎症细胞浸润肾组织,导致细胞外基质积聚及正常肾组织被纤维组织代替,最终发展至终末期肾病。该过程涉及复杂的发病机制,其中转化生长因子-β_(1)信号通路和巨噬细胞极化与肾纤维化关系密切。本文结合最新研究成果综述转化生长因子-β_(1)信号通路和巨噬细胞极化间相互关系及其在肾纤维化发病机制中的研究进展。

癌相关成纤维细胞与M2型巨噬细胞相互作用促进肿瘤发生发展的研究进展

癌相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境(TME)中主要成分之一。在TME中,肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间或非肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间的相互作用能促进肿瘤发生发展。CAF可与多种免疫细胞之间产生相互作用,通过抑制适应性免疫细胞功能,重塑TME中免疫微环境促进肿瘤的发生发展。其中CAF与巨噬细胞相互作用,并诱导巨噬细胞向M2型极化在促进肿瘤发生发展中起到重要作用。

OX-LDL与单核巨噬细胞相互作用促进动脉粥样硬化形成

目的单核-巨噬细胞在动脉粥样硬化(AS)发病过程中的作用日益受到关注,但泡沫化过程中细胞内脂质变化情况的研究报道尚不多见。方法一次性密度梯度超速离心分离LDL制成ox-LDL,动态观察小鼠巨噬细胞内脂质成分和细胞形态的变化。结果纯化的LDL纯度可达92.39%。细胞形态学观察细胞内红色脂质颗粒增多,电镜显示细胞核周围包含染色质,胞浆稀少含有大量的核糖体,线粒体丰富。随浓度的增加LDL组及OX-LDL组细胞内TC、FC、CE均明显增加。结论 OX-LDL同单核巨噬细胞相互作用可使动脉壁局部形成AS病变的特征病理性细胞。OX-LDL较LDL更易使单核巨噬细胞形成泡沫细胞。高浓度的OX-LDL可以导致细胞膜结构的损伤。

巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-10对人外周血单核巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-8的相互作用

目的:研究巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和白细胞介素(IL)-10对人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-8的诱生作用及相互影响。方法:自健康献血员血液中分离单核细胞进行体外培养,并以M-CSF、IL-10单独及共同作用,然后收集上清,以双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法和生物活性法测TNF-α,以ELISA法检测IL-8。结果:①M-CSF能诱导单核细胞分泌TNF-α(P<0.05),与脂多糖(LPS)具有诱生TNF-α的协同效应(P<0.05);IL-10则能抑制TNF-α的产生(P<0.05),并拮抗M-CSF增强LPS诱生TNF-α的作用(P<0.05);②M-CSF能诱导单核细胞分泌IL-8(P<0.05),IL-10则能抑制IL-8的分泌(P<0.01),并拮抗M-CSF对IL-8的诱生效应(P<0.05)。结论:M-CSF可以促进单核细胞释放炎性细胞因子,是体内重要的炎症性因子之一,而IL-10则是体内重要的炎症抑制因子,能拮抗M-CSF的致炎作用。

间充质干细胞分泌IL-6调控巨噬细胞表型及其在炎症性疾病和肿瘤中的作用

间充质干细胞(MSCs)是一种对免疫细胞具有调控作用的成体干细胞。它可调节促炎M1型巨噬细胞向抗炎M2型巨噬细胞极化,从而发挥缓解炎症的生物学效应。在调控巨噬细胞的过程中,MSCs分泌了诸多细胞因子,其中白细胞介素-6(IL-6)发挥重要作用。一方面,IL-6通过抑制炎症进展参与炎症反应;另一方面,其通过活化M2型巨噬细胞极化的信号通路促进肿瘤侵袭转移。未来深入研究MSCs与IL-6对巨噬细胞的调控作用,有助于为炎症性疾病和恶性肿瘤的治疗提供新思路及策略。

N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺通过NLRP3/Caspase-1抑制巨噬细胞泡沫化及焦亡作用

目的设计并合成了嘧啶并吲哚类衍生物N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺(BFPI),探讨其是否通过NLRP3/Caspase-1通路抑制巨噬细胞焦亡和泡沫化作用。方法以2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪和2-氨基吲哚为起始原料合成BFPI,并通过1H NMR、13 C NMR、ESI-MS对其结构进行表征。将体外培养的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7分为空白组、模型组(PA)组和治疗组(BFPI)组,各组细胞用对应培养液处理24 h后,用MTT法检测其增殖活力,油红O染色检测细胞内脂滴形成情况,并用Western blot和RT-qPCR检测NLRP3、Caspase-1和MCP-1 mRNA和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组细胞增殖活力明显下降,脂滴形成量明显增加,与模型组比较,治疗组细胞增殖活力明显增加,脂滴形成量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与空白组比较,模型组细胞NLRP3、Caspase-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,与模型组比较,治疗组细胞上述指标表达水平均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论BFPI可通过抑制巨噬细胞NLRP3、Caspase-1和MCP-1的表达进而促进其增殖并抑制脂质吞噬能力,有助于延缓动脉粥化时巨噬细胞来源的泡沫细胞形成。

基于miR-486-5p、巨噬细胞极化探讨新风胶囊改善佐剂性关节炎大鼠关节炎症的作用机制

目的:观察新风胶囊对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠巨噬细胞极化及miR-486-5p的影响,探究新风胶囊改善AA大鼠炎症的可能机制。方法:32只SD大鼠被随机分为两个不同组别:正常组(NC组,8只)和造模组(24只),通过对造模组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂,成功构建AA大鼠模型后,进一步随机细分为3组:模型组(MC组,8只)、新风胶囊组(XFC组,8只)以及miR-486-5p抑制剂组(miR-486-5p inhibitor组,8只)。于炎症诱导后的第14天开始给予相应药物和试剂,NC组及MC组持续21天灌胃等量的生理盐水,然后检测各组AA大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI);采用酶联免疫吸附法测定(ELISA)检测大鼠细胞因子白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-4及IL-13;流式细胞术检测大鼠外周血CD86、CD206表达;RT-qPCR检测大鼠关节滑膜miR-486-5p表达。结果:(1)与NC组比较,MC组大鼠E、AI及IL-23、TNF-α、CD86和miR-486-5p表达升高(P<0.01);IL-4、IL-13、CD206表达降低(P<0.01)。(2)与MC组比较,XFC组和miR-486-5p inhibitor组E、AI、IL-23、TNF-α、CD86和miR-486-5p表达降低(P<0.01);IL-4、IL-13、CD206表达升高(P<0.01)。(3)与miR-486-5p inhibitor组比较,XFC组IL-4、IL-13、CD206表达升高(P<0.01);IL-23、TNF-α、CD86和miR-486-5p表达降低(P<0.01);E、AI差异不明显(P>0.05)。结论:AA大鼠炎症与巨噬细胞极化和miR-486-5p表达有关,新风胶囊能明显改善AA大鼠关节炎症,其机制可能与抑制miR-486-5p表达,调节巨噬细胞极化有关。

川芎-赤芍药对及其有效成分抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化及铁调素的作用机制

目的:观察川芎-赤芍药对及其有效成分能否减缓细胞泡沫化,并探讨其作用机制。方法:采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人单核细胞白血病(THP-1)细胞建立泡沫化模型,将川芎-赤芍药对及其有效成分分别作用于ox-LDL诱导的THP-1细胞。采用油红O染色分析细胞泡沫化程度,通过逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测铁代谢相关铁调素(Hep)、膜铁转运蛋白(FPN)、铁调素调节蛋白(HJV)、血色素沉着症基因(HFE)、转铁蛋白受体2(TfR2)mRNA表达情况。结果:油红O细胞染色后镜下可见,染色后的红色脂滴因川芎-赤芍药对及其有效成分干预而减少。与对照组比较,模型组Hep、FPN、HFE、TfR2 mRNA表达上升,HJV mRNA表达减少;与模型组比较,川芎-赤芍药对及其有效成分干预组抑制作用明显,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:川芎-赤芍药对及其有效成分可抑制ox-LDL诱导的THP-1源巨噬细胞泡沫化,作用机制与川芎-赤芍药对及其有效成分调节铁代谢相关基因表达有关。

LYVE1+巨噬细胞在RA患者关节滑膜组织中表达变化及对RA-FLS细胞迁移、侵袭、FMT的抑制作用

目的观察淋巴管内皮受体-1(LYVE1)+巨噬细胞在类风湿性关节炎(RA)患者关节滑膜组织中的表达变化及对RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)迁移、侵袭、向肌成纤维细胞转化(FMT)的抑制作用。方法采用免疫荧光染色法对45例RA患者及45例骨关节炎(OA)患者滑膜组织LYVE1、CD68进行定性、定量检测。取对数生长期人单核白血病细胞THP-1,在培养液中加入LYVE1过表达慢病毒,培养48 h获得表达LYVE1的THP-1细胞,在表达LYVE1的THP-1细胞中加入100 ng/mL的佛波酯(PMA)诱导培养48 h,获得LYVE1+巨噬细胞;另取部分THP-1细胞,仅加入100 ng/mL的PMA诱导培养48 h获得LYVE1-巨噬细胞。取对数生长期人类风湿性关节炎成纤维细胞MH7A分为LYVE1+巨噬细胞组、LYVE1-巨噬细胞组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,另将仅含培养基的小室设为空白对照组,采用划痕实验观察各组细胞的迁移能力。取MH7A细胞分为A组、B组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,将仅含培养基小室设为C组,采用Transwell侵袭实验观察各组细胞的侵袭能力。取MH7A细胞分为一组、二组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,将仅含培养基小室设为空白组,培养48 h时采用实时定量PCR法检测各组MH7A细胞FMT相关基因(COL1A1、fibronectin、α-SMA)的mRNA。结果RA与OA患者滑膜组织中LYVE1、CD68表达位置基本重叠;RA与OA患者滑膜组织LYVE1相对表达量分别为0.319±0.033、1.000±0.159,二者比较,P<0.05。与LYVE1-巨噬细胞组、空白对照组比较,培养24、48 h时LYVE1+巨噬细胞组细胞划痕愈合比低(P均<0.05);与B组、C组比较,培养24 h时A组细胞穿膜细胞数少(P均<0.05);与二组、空白组比较,培养48 h时一组细胞COL1A1 mRNA、fibronectin mRNA、α-SMA mRNA相对表达量少(P均<0.05)。结论RA患者关节滑膜组织中LYVE1+巨噬细胞低表达。LYVE1+巨噬细胞可抑制RA-FLS的迁移、侵袭及FMT。

IL-33介导M2巨噬细胞在口腔黏膜上皮-间充质转化中的相关作用机制

目的探讨白细胞介素33(IL-33)介导M2巨噬细胞在口腔黏膜上皮-间充质转化(EMT)中的相关作用机制。方法将25只雄性BALB/c小鼠分为口腔黏膜成纤维化(OSF)组(20只)和对照组(5只)。OSF组通过槟榔碱刺激建立OSF小鼠模型,对照组使用PBS注射液在相同部位给药。观察口腔黏膜组织巨噬细胞表型、IL-33以及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路表达水平;培养人口腔黏膜细胞并与M2巨噬细胞相互作用体外模型,使用IL-33添加剂和TGF-β受体抑制剂,观察EMT标志物表达水平。结果HE染色和Masson染色证实了口腔黏膜纤维化模型建立成功,与对照组比较,OSF组口腔黏膜组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平降低,波形蛋白(Vimentin)表达水平升高(均P<0.05)。此外,观察到IL-33和TGF-β水平升高以及TGF-β1/Smad通路激活,巨噬细胞在口腔黏膜组织中聚集且表型为M2巨噬细胞。与空白对照组比较,IL-33组E-cadherin水平降低,Vimentin的表达增高(均P<0.05);LY-2109761+IL-33组与IL-33组相比,E-cadherin的表达增高,Vimentin的水平降低(均P<0.05)。Western blot检测TGF-β、p-Smad2和Smad2的表达水平提示,与IL-33组相比,LY2109761+IL-33组IL-33对TGF-β有促进作用(P<0.05);IL-33组与空白对照组相比,p-Smad2水平显著提高(P<0.05);LY-2109761+IL-33组与IL-33组相比,p-Smad2水平显著降低(P<0.05)。结论IL-33通过介导M2巨噬细胞调控TGF-β1/Smad通路促进口腔黏膜上皮间质转化。

巨噬细胞代谢重编程在炎-癌转化中的作用

炎-癌转化是肿瘤发生发展过程中的关键环节。近年研究发现,巨噬细胞作为免疫系统中的主要组成细胞,其代谢重编程在肿瘤的炎-癌转化中发挥了重要作用。深入研究巨噬细胞代谢重编程和肿瘤炎-癌转化之间的关系,对于阐释肿瘤恶性演进机制具有重要意义。本文总结了巨噬细胞代谢重编程与肿瘤炎-癌转化相关性的研究进展,以期探讨靶向巨噬细胞代谢重编程在肿瘤治疗中的潜在应用前景。

受体相互作用蛋白140在脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其作用

目的探讨受体相互作用蛋白140（receptor interacting protein140,RIP140）在脓毒症急性肺损伤（acute lung injury,ALI）大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其在炎症反应过程中的作用。方法 36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组和盲肠结扎穿孔术（CLP）致脓毒症肺损伤3、6、12、24 h组。HE染色观察肺组织病理变化;免疫组化检测RIP140在肺组织的表达分布;Western blot及免疫荧光观察肺泡巨噬细胞RIP140的表达变化及定位;RT-q PCR测定肺泡巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平变化。结果 CLP组可见明显肺损伤病理改变且随时间进展逐渐加重。RIP140在脓毒症肺损伤大鼠肺组织中主要表达于炎性渗出细胞,且随时间进展,表达RIP140的细胞数量逐渐增多。CLP术后6 h大鼠肺巨噬细胞RIP140蛋白表达水平较正常对照组开始升高（P〈0.05）,至12~24 h维持一较高水平,且主要表达于细胞核。CLP术后3 h大鼠肺巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平较正常对照组开始升高（P〈0.05）,至12~24 h维持一较高水平,下调肺泡巨噬细胞RIP140的表达可明显抑制IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA的表达。结论脓毒症肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞可通过上调RIP140表达增强肺组织炎症反应,从而参与早期急性肺损伤的炎症应答。

萝卜硫素通过调节ALOX5/NF-κB信号通路调控巨噬细胞糖酵解抑制糖尿病肾病进展

目的探讨萝卜硫素(SFN)调节花生四烯酸5-脂氧合酶基因(arachidonic acid 5-lipoxygenase,ALOX5)/核因子kappa B(NF-κB)信号通路调节巨噬细胞糖酵解对糖尿病肾病(DN)进展的影响。方法生物信息学分析SFN治疗DN的靶基因。使用30 mmol/L高葡萄糖(HG)处理人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)诱导体外DN模型。将HK-2细胞分为如下组:正常糖(NG)组、HG组、HG+SFN(3 mmol/L)组、HG+ALOX5组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5组、HG处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组。CCK-8检测细胞活力,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;葡萄糖和乳酸试剂盒检测各组细胞中葡萄糖和乳酸水平;Western blot检测各组细胞中ALOX5、NF-κB以及糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达;使用链脲佐菌素(STZ)构建DN小鼠模型,DN小鼠给与SFN(0.5 mg/kg)治疗;检测小鼠各项生化指标,HE染色检测肾组织病理变化;Western blot检测小鼠肾脏巨噬细胞中糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达。结果生物信息学分析结果显示ALOX5是SFN治疗DN的靶基因。与HG组相比,SFN处理增强HK-2细胞活力并抑制细胞凋亡(P<0.05);同时,SFN处理抑制HG诱导的巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达,减弱巨噬细胞介导的HK-2细胞损伤(P<0.05);Western blot结果表明SFN抑制ALOX5和NF-κB的表达(P<0.05);小鼠实验结果显示,SFN治疗改善DN小鼠肾功能和肾组织病理学改变,抑制肾组织中巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达(P<0.05)。结论SFN通过抑制ALOX5/NF-κB信号通路抑制巨噬细胞糖酵解从而改善DN进展。

补体因子H相关蛋白1促进巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α调控足细胞增殖和迁移实验研究

目的:探讨补体因子H相关蛋白1(CFHR1)通过巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)调控足细胞增殖和迁移的作用。方法:体外培养人单核巨噬细胞和人肾足细胞。巨噬细胞分为对照组和CFHR1干预组,分别进行牛血清白蛋白或CFHR1重组蛋白干预24 h,ELISA法测定上清液TNF-α水平。足细胞分为空白组、TNF-α干预组、对照上清液干预组、CFHR1上清液干预组、CFHR1上清液+TNF-α中和抗体干预组。CCK8法检测各组细胞增殖。Transwell法检测各组细胞迁移。Wb法检测各组细胞中相关蛋白变化。结果:巨噬细胞的CFHR1干预组上清液中TNF-α含量显著增加(P<0.05)。与空白组比较,TNF-α干预组、CFHR1上清液干预组的细胞增殖比率和迁移数量均显著降低(均P<0.05)。与CFHR1上清液干预组比较,CFHR1上清液+TNF-α中和抗体干预组的细胞增殖比率和迁移数量均显著提高(均P<0.05)。与空白组比较,TNF-α干预组、CFHR1上清液干预组的足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、足突蛋白(Podocin)、纤维状肌动蛋白(F-Actin)、整合素α3β1蛋白(α3β1)表达均显著降低(均P<0.05)。与CFHR1上清液干预组比较,CFHR1上清液+TNF-α中和抗体干预组的Nephrin、Podocin、F-actin、α3β1蛋白表达均显著增多(均P<0.05)。结论:CFHR1促进巨噬细胞分泌的TNF-α可显著抑制足细胞增殖水平和迁移能力,这可能是高浓度CFHR1促进肾病综合征发展的途径。

核因子κB受体活化因子配体联合巨噬细胞集落刺激因子诱导破骨细胞分化过程中的蛋白—蛋白相互作用网络的研究

目的系统地认识核因子κB受体活化因子配体(RANKL)联合巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导破骨细胞分化成熟过程中的分子机制。方法利用小鼠蛋白—蛋白相互作用数据库NIA和公共基因芯片数据GES16749,构建并分析了RANKL联合M-CSF诱导小鼠单核细胞系RAW264.7分化成熟过程的蛋白—蛋白相互作用网络。结果在蛋白—蛋白相互作用网络中,转化生长因子β受体Ⅰ(TGFBR1)、劳氏肉瘤原癌基因(SRC)、髓细胞增生原癌基因(MYC)和整合素β3(ITGB3)能够和多种蛋白质分子发生相互作用,是信号在网络中传导的重要承载分子。结论TGFBR1、SRC、MYC和ITGB3可能是RANKL联合M-CSF诱导破骨细胞发育过程中的关键分子。

土拉弗朗西斯菌与巨噬细胞膜的早期相互作用

评估土拉弗朗西斯菌LVS在感染鼠巨噬细胞早期与细胞膜的相互作用。用表达GFP的土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞J774A.1。结合单抗的小窝蛋白-1或转铁蛋白受体-1分别用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色。土拉弗朗西斯菌疫苗株LVS可以诱导宿主细胞膜伸出伪足,将细菌吸收进入巨噬细胞。分布在细胞膜上的小窝蛋白-1和转铁蛋白受体-1参与巨噬细胞对弗朗西斯菌的摄入。这些发现说明,弗朗西斯菌进入巨噬细胞需要细胞膜微结构域和小窝蛋白;在感染早期转铁蛋白受体-1参与了细菌的摄入,这可能与弗朗西斯菌获取铁以利在胞内生存有关。

基于巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化的肾间质纤维化病理机制及药物干预作用

在肾间质纤维化过程中,骨髓中募集的巨噬细胞可在损伤的肾脏中直接转化为肌成纤维细胞。巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化(MMT)是肾间质纤维化的重要病理机制之一。在MMT过程中,巨噬细胞的活化受转化生长因子-β1、Janus激酶3/信号转导及转录活化因子6、Wnt等信号通路调控,阻断这些信号通路可抑制MMT,改善肾间质纤维化。在临床及体内外实验中,针对防治肾纤维化的药物干预研究较活跃,其中某些药物的干预作用可能与巨噬细胞及MMT相关。因此,深入研究肾脏MMT的病理机制及药物干预作用可以为相关疾病的治疗提供新思路。

M1巨噬细胞培养液对ER阳性乳腺癌细胞上皮-间质转换的影响及Calpain的介导作用

目的 探讨M1巨噬细胞对乳腺癌细胞上皮细胞-间充质转换(EMT)的影响及钙蛋白酶(Calpain)在其中的介导作用。方法 以人乳腺癌细胞系雌激素受体阳性(ER+)细胞MCF-7、T47D及雌激素受体阴性(ER-)细胞MDA-MB-231为模型细胞,实验分为MCF-7细胞及T47D细胞的RPMI-1640组(RPMI-1640纯培养基培养)、M1巨噬细胞条件培养液培养组(M1-CM组)、M1-CM+Calp组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpeptin(50μmoL/L)处理]、M1-CM+CI-Ⅲ组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpain inhibitorⅢ(50μmoL/L)处理],MDA-MB-231细胞的RPMI-1640组、M1-CM组;采用划痕实验和侵袭实验检测各组中MCF-7细胞、T47D细胞、MDA-MB-231细胞的迁移能力及MCF-7细胞的侵袭能力,采用qRT-PCR检测M0巨噬细胞、M1巨噬细胞趋化因子受体7CCR7、趋化因子配体10(CXCL10)及白细胞介素-12(IL-12) mRNA表达水平,采用Western blot实验检测MCF-7细胞、T47D细胞及MDA-MB-231细胞中上皮-钙黏素(E-cad)、纤连蛋白(FN)、波形蛋白(Vim)蛋白水平表达。结果 与RPMI-1640组相比,M1-CM组ER+细胞MCF-7及T47D迁移能力增强(P<0.05),MCF-7细胞侵袭能力增强(P<0.05);ER+细胞MCF-7及T47D E-cad蛋白表达水平下调,而FN、Vim表达上调(P<0.05),而ER-细胞MDA-MB-231中只有E-cad表达上调(P<0.05);与M1-CM组相比,ER+细胞MCF-7及T47D的M1-CM+Calp组、M1-CM+CI-Ⅲ组中M1-CM诱导的ER+乳腺癌细胞EMT效应被逆转(P<0.05)。结论 M1巨噬细胞条件培养液可以促进ER+细胞人乳腺细胞的EMT,但对ER-细胞EMT无明显影响,其促进ER+乳腺癌细胞EMT信号机制可能与Calpain通路有关。

miRNA-153-5p通过靶向TFRC调控巨噬细胞极化在病毒性心肌炎中的作用

目的:探讨miRNA-153-5p调控巨噬细胞极化在病毒性心肌炎(VM)中的作用。方法:建立VM小鼠模型,提取心脏,RT-qPCR检测心肌组织miRNA-153-5p的表达,HE染色观察心脏炎症程度,ELISA检测小鼠血清肌钙蛋白cTnI的水平,流式细胞术检测心脏浸润巨噬细胞表型。体外分离BMDMs诱导为M1/M2型巨噬细胞,过表达和抑制miR-153-5p,RT-qPCR检测M1/M2标志物iNOS、IL-12、TNF-α、Arg1、YM-1、FIZZ1的表达。生物信息学软件预测结合双荧光素酶实验验证miR-153-5p与转铁蛋白受体(TFRC)的靶向关系。结果:miR-153-5p在CVB3感染7 d的VM小鼠心脏组织中表达明显增加(P<0.05)。体内实验中抑制miR-153-5p表达能减轻VM小鼠心脏的病变程度,改善心脏功能(P<0.01)。抑制miR-153-5p表达能够促进小鼠心脏浸润的巨噬细胞向M2极化(P<0.01)。体外实验中,较之M2,miR-153-5p在M1巨噬细胞中表达升高(P<0.01)。过表达miR-153-5p促进巨噬细胞向M1极化,抑制miR-153-5p表达则促进巨噬细胞向M2极化(P<0.01)。TFRC是miR-153-5p的靶基因,抑制miR-153-5p表达可上调TFRC的mRNA和蛋白水平(P<0.01)。结论:miRNA-153-5p通过靶向TFRC调控VM小鼠心脏浸润巨噬细胞的极化。

结核分枝杆菌与巨噬细胞相互作用的研究

探讨结核分枝杆菌与巨噬细胞的相互关系。从健康人全血中诱导活化的巨噬细胞和从结核病人痰液中培养出来的结核分枝杆菌以及卡介苗菌株(BCG)进行实验,利用流式细胞技术检测结核分枝杆菌感染巨噬细胞的凋亡及其时相性变化。巨噬细胞感染结核分枝杆菌后凋亡率升高,病人结核杆菌感染组和BCG感染组比较,差异具有统计学意义P<0.05。结核分枝杆菌与巨噬细胞的凋亡存在着相互作用关系,病人结核菌的毒力比BCG的毒力强。