中药通心络胶囊对糖尿病足大鼠nephrin、podocin 水平、巨噬细胞M1表型及VEGF蛋白的作用

目的研究中药通心络胶囊对糖尿病足大鼠nephrin、podocin水平、巨噬细胞M1表型及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的作用。方法SPF级健康SD大鼠50只,随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余40只进行糖尿病足模型建立,建模成功后40只大鼠按随机数字表法分为模型组,通心络低、中、高剂量组,每组10只,健康组、模型组给予2 ml生理盐水灌胃;通心络低、中、高剂量组分别给予通心络胶囊0.50、0.75、1.00 g/kg灌胃。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾组织病理形态,HE及Masson染色观察大鼠足部病理形态,RT-聚合酶链反应(PCR)检测Nephrin、podocin表达,多重免疫荧光检测伤口组织中M1型和M2型巨噬细胞数量,Western印迹检测细胞中VEGF、缺氧诱导因子(HIF)-1α蛋白表达水平,应用ImageJ 1.46医学图像分析糖尿病足大鼠溃疡面积。结果模型组肾小球萎缩,基底膜增厚,有炎性细胞浸润,足部炎症细胞较多,新生胶原纤维组织较薄,且排列疏松、不规律,管腔较少;与模型组相比,通心络低、中、高剂量组有所改善。与健康组相比,模型组nephrin、podocin、VEGF、HIF-1α水平显著降低;与模型组相比,通心络各剂量组nephrin、podocin、VEGF、HIF-1α水平显著升高,且以高剂量组效果最为显著(P<0.05)。与模型组相比,通心络低、中、高剂量组M1型巨噬细胞显著减少、M2型巨噬细胞数目显著增多(P<0.05)。结论通心络胶囊可促进VEGF/HIF-1α表达,使巨噬细胞向M1极化,从而促进创面愈合,提高nephrin/podocin表达水平,减轻由糖尿病足导致的肾脏负担。

金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病小鼠模型巨噬细胞M1/M2表型分化的影响

目的:探讨巨噬细胞M1/M2表型分化在慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠模型中的作用及金水六君煎的干预机制。方法:将32只SPF级ICR小鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药组,每组8只。除空白组外,其余各组通过熏烟方式制备COPD小鼠模型。空白组及模型组灌胃生理盐水,西药组及中药组灌胃相应药物。评估各组小鼠毛发、精神及体质量等差异,给药结束后检测肺功能评估COPD严重程度,采用HE染色观察肺组织病理改变,ELISA检测肺组织白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平,采用流式细胞术、免疫荧光实验评估巨噬细胞M1/M2极化情况。结果:空白组小鼠肺组织完整,肺泡无明显破裂融合现象。模型组可见肺泡破裂融合,为明显的COPD肺组织征象。与模型组比较,中药组和西药组肺泡破裂融合现象明显减少。模型组小鼠每分钟通气量(MV)、吸气峰流量(PIE)、呼气峰流量(PEF)水平均低于空白组(P<0.05),肺组织IL-6和IL-8水平均高于空白组(P<0.05);中药组和西药组小鼠MV、PIF和PEF水平均高于模型组(P<0.05),肺组织IL-6和IL-8水平均低于模型组(P<0.05);中药组小鼠MV、PIF和PEF水平均高于西药组(P<0.05),肺组织IL-6和IL-8水平均低于西药组(P<0.05)。模型组小鼠肺组织CD68、CD206占比和CD206/CD68均高于空白组(P<0.05);西药组、中药组小鼠肺组织CD68占比低于模型组,CD206占比和CD206/CD68均高于模型组(P<0.05);中药组小鼠肺组织CD68占比高于西药组(P<0.05),CD206占比和CD206/CD68均低于西药组(P<0.05),提示经过治疗后,肺组织中巨噬细胞有向M2极化趋势。模型组小鼠肺组织CD86/CD163和CD86阳性比例高于空白组(P<0.05),提示巨噬细胞激活以M1极化为主。西药组与中药组小鼠肺组织CD86/CD163和CD86阳性比例低于模型组(P<0.05),CD163阳性比例高于模型组(P<0.05),提示巨噬细胞以M2方向极化趋势为主。结论:巨噬细胞M1极化在COPD小鼠模型中具有加重炎症症状的作用;金水六君煎可能通过抑制巨噬细胞向M1表型分化,促进巨噬细胞向M2表型分化,抑制炎症反应,起到治疗COPD的效果。

加味芎蝎散含药血清对哮喘小鼠巨噬细胞表型及气道重塑蛋白表达的影响

目的观察加味芎蝎散含药血清对哮喘小鼠巨噬细胞活力、M1/M2表型、炎症介质[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-8(IL-8)]m RNA水平及基质金属蛋白酶(MMP9)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)蛋白的影响,探讨加味芎蝎散调控巨噬细胞极化,进而探讨其对Th1/Th2免疫平衡、组织重塑的相关机制。方法建立哮喘小鼠模型并分离提取肺巨噬细胞,同时制备加味芎蝎散含药血清。设立空白组、模型组及加味芎蝎散含药血清高剂量组、低剂量组,根据分组给予相应处理措施。干预24 h后,细胞增殖和毒性法检测细胞活力,免疫荧光法(IF)检测细胞M1标志物iNOS、M2标志物CD206的表达,荧光定量PCR法检测炎症因子TNF-α、IL-2、IL-4、IL-8的mRNA水平,免疫印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP9)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白变化。结果与正常组比较,模型组巨噬细胞活力增加,iNOS/CD206比例下调,TNF-α、IL-8水平增高,IL-4减低,MMP9和CollagenⅠ蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,加味芎蝎散含药血清高、低剂量组巨噬细胞活力减低,iNOS/CD206比例上调,TNF-α、IL-8水平减低,IL-4升高,MMP9和CollagenⅠ蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味芎蝎散含药血清可减弱巨噬细胞M2表型极化,调节TH1/TH2免疫平衡,抑制气道重塑蛋白表达。

活性维生素D通过STAT-1-TREM-1途径调控M1/M2巨噬细胞表型激活失衡缓解糖尿病肾病中的肾间质纤维化的机制

目的 探究活性维生素D通过信号转导和转录激活因子-1(STAT-1)-髓样细胞触发受体-1(TREM-1)途径调控M1/M2巨噬细胞表型激活失衡缓解糖尿病肾病中的肾间质纤维化的机制。方法 45只健康雄性SD大鼠随机数字表法分为对照组、DN模型组和VD治疗组,每组各15只。对照组为正常饲养大鼠,作为实验对照;DN模型组和VD治疗组均建立大鼠糖尿病模型;VD治疗组于糖尿病模型建立后,每日口服VD,剂量为0.1μg/kg。第18周处死大鼠。采集血样用于测量生化参数,并采集肾脏进行组织学检查和分子检测。通过蛋白印迹法检测STAT-1和p-STAT-1蛋白表达。通过自动生化分析仪对大鼠血糖、血尿素氮和血清肌酐进行分析。通过RT-PCR检测大鼠肾组织中Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA表达。通过免疫组织化学分析大鼠肾小球和肾间质CD68巨噬细胞浸润。通过蛋白印迹法分析大鼠肾组织CD163与CD68的蛋白表达。通过RT-PCR分析各组大鼠肾小球和间质内的巨噬细胞分泌的细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Arg-1和MR的浓度。结果 DN模型组STAT-1和p-STAT-1蛋白表达较对照组升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组STAT-1和p-STAT-1蛋白表达较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组蛋白尿、血糖、血尿素氮和血清肌酐水平升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组蛋白尿、血尿素氮和血清肌酐水平较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA表达较对照组升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA表达较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组肾小球和肾间质巨噬细胞浸润较对照组增加,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组肾小球和肾间质巨噬细胞浸润较DN模型组减少,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组CD163蛋白表达和CD163/CD68比率较对照组均降低,CD68较对照组升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组CD163蛋白表达和CD163/CD68比率较DN模型组升高,CD68较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组TNF-α和iNOS mRNA表达较对照组均升高,Arg-1和MR mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组TNF-α和iNOS mRNA表达较DN模型组降低升高,Arg-1和MR mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 VD通过STAT-1-TREM-1途径调控M1/M2巨噬细胞表型,改善链脲菌素诱导的DN大鼠肾间质纤维化。

黄芩苷调节巨噬细胞极化减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的研究黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用,并探讨该作用与肺巨噬细胞M1/M2表型极化及其介导炎症的相关机制。方法将60只SD大鼠分为6组:正常对照组、LPS组、(10、50、100)mg/kg黄芩苷联合LPS处理组、地塞米松(DEX)处理组。除正常对照组外,其余组采用气管滴注LPS建立ALI模型,造模24 h后,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)及双侧的肺组织。HE染色观察大鼠肺组织病变情况,测定大鼠肺组织湿干质量比(W/D);ELISA检测BALF中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10的含量;免疫荧光细胞化学染色检测CD68阳性巨噬细胞中M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与M2型巨噬细胞标志物CD206表达,确定巨噬细胞极化情况,实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织中iNOS、IL-1β、精氨酸酶1(Arg1)、CD206的mRNA表达,Western blot法检测肺组织iNOS、Arg1蛋白表达。结果黄芩苷可明显减轻ALI大鼠肺部病变,减少肺部含水量,降低BALF中促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌水平,增加抗炎因子IL-10的分泌;黄芩苷能明显抑制ALI大鼠肺巨噬细胞向M1表型极化,促进向M2表型极化;M1表型分子IL-1βmRNA及iNOS mRNA和蛋白表达水平降低,而M2表型分子CD206 mRNA、Arg1 mRNA和蛋白表达增加。结论黄芩苷抑制大鼠肺巨噬细胞向M1表型的极化,促进向M2表型的极化,降低M1/M2比例,从而减轻LPS诱导的ALI大鼠肺部炎症反应。