文冠果叶黄酮对巨噬细胞RAW264.7细胞因子及TLR2受体的影响

通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法分析文冠果叶黄酮(XLF)对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;通过XLF处理Toll样受体2(TLR2)抗体作用的巨噬细胞,研究TLR2受体对该细胞因子的介导作用。结果表明:当XLF质量浓度为320μg/mL时,巨噬细胞RAW 264.7分泌的NO、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)细胞因子最多,且与空白对照差异极显著,但都小于脂多糖(LPS);且与未加入TLR2抗体相比,加入了TLR2抗体的巨噬细胞减少了各细胞因子的分泌,且差异均极显著。XLF可促进巨噬细胞RAW 264.7的增殖及细胞因子的分泌,并且可能通过TLR2受体介导。

模拟失重对小鼠巨噬细胞RAW264.7生物学功能的影响

目的通过2D回转器回转细胞模拟失重生物学效应,探讨模拟失重对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)多种生物学功能的影响特点,为深化空间失重免疫抑制机制研究提供理论依据和数据支撑。方法将RAW264.7细胞分为对照组(NG组)、模拟失重组(SMG组),利用2D回转器模拟失重72 h后,采用CCK-8法和EdU法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞的增殖能力变化;细胞划痕实验和Transwell小室法检测巨噬细胞迁移功能的变化;探针DCFH-DA标记,倒置荧光显微镜观察和拍照检测巨噬细胞分泌活性氧(ROS)的变化。结果RAW264.7巨噬细胞模拟失重72 h后增殖受到抑制,CCK-8实验结果显示,NG组的细胞增殖速率显著高于SMG组(P<0.05);EdU染色结果显示,SMG组EdU掺入RAW264.7细胞核的量较NG组减少(P<0.01)。细胞划痕、Transwell实验检测表明72 h模拟失重对巨噬细胞的迁移能力有明显影响,与NG组相比,模拟失重后RAW264.7细胞迁移能力增强(P<0.05);探针DCFH-DA标记检测提示模拟失重对巨噬细胞分泌ROS有明显抑制作用(P<0.01)。结论回转模拟失重对RAW264.7细胞的生物学功能具有影响,表现为RAW264.7迁移运动能力增强,细胞增殖与ROS分泌能力受到抑制。

显齿蛇葡萄醇提物含药血清对脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7炎症模型的抗炎作用

目的:采用血清药物化学的研究方法,分析显齿蛇葡萄醇提物(AGEE)大鼠口服后的入血成分,基于入血成分研究AGEE含药血清对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用。方法:12只SD大鼠随机分为AGEE组和空白组,分别给予AGEE(5.4 g/kg)和纯净水灌胃,以制备含药血清和空白血清,采用HPLC-DAD分析其含药血清色谱图,通过与空白血清色谱图对比分析,探讨AGEE的体内移行成分。以RAW264.7细胞为研究对象,将细胞分为5%或15%空白血清组,5%或15%空白血清+LPS组,以及5%或15%含药血清+LPS组,按相应条件培养24 h后,采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测每组细胞存活率;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞中TNF-α、IL-6、IL-10水平。结果:AGEE含药血清与空白血清比较,发现16个色谱峰,其中9种为原型成分入血,7种可能是AGEE在大鼠体内产生的代谢物。CCK-8检测结果表明,各组细胞按上述条件培养24 h后均未发现毒性。5%或15%空白血清+LPS组细胞中TNF-α、IL-6、IL-10水平高于5%或15%空白血清组(P<0.01或P<0.05)。15%含药血清+LPS组细胞中TNF-α水平低于5%空白血清+LPS组(P<0.05);5%或15%含药血清+LPS组细胞IL-6水平低于5%或15%空白血清+LPS组(P<0.01);5%或15%含药血清+LPS组细胞IL-10水平高于5%或15%空白血清+LPS组(P<0.01或P<0.05)。结论:建立了AGEE含药血清HPLC-DAD分析方法,明确了其活性物质基础。AGEE含药血清可降低LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应。

水芹多糖的提取及其对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的初步研究

多糖是水芹中重要功能性成分,其分离和活性的相关研究尚未报道。该研究基于超声波辅助法从水芹中成功分离获得功能性多糖成分——水芹多糖(Oenanthe javanica polysaccharide,OJP),利用响应面法优化了OJP的分离条件,并考察了OJP对巨噬细胞RAW264.7的激活作用。响应面优化结果显示,OJP最佳分离条件为超声温度83.6℃、超声时间51 min、料液比1∶29.7(g∶mL),提取率为13.81%。单糖组成结果显示OJP由阿拉伯糖(29.94%)、半乳糖(52.48%)、葡萄糖(11.32%)以及微量木糖(2.22%)、半乳糖醛酸(3.5%)和葡萄糖醛酸(0.53%)组成。细胞实验结果表明,OJP可促进RAW264.7巨噬细胞增殖及NO产生并增强RAW264.7细胞的吞噬能力。该研究为OJP的开发与应用提供了实验基础。

丹皮酚通过TLR4/MAPK/NF-κB通路对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用

目的:探讨丹皮酚对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7细胞炎症损伤的保护作用及其机制研究。方法:培养巨噬细胞RAW264.7,并分成空白组、LPS(1μg/mL)组、丹皮酚(240μmol/mL)组和TAK242(10μmol/mL)组。采用CCK8法检测细胞活性,倒置显微镜观察细胞形态,比色法测定细胞培养液中GSH、MDA含量,JC-1法检测线粒体膜电位,免疫荧光法检测F4/80及p-NF-κB蛋白表达分布,Western blotting检测细胞中TLR4/MAPK/NF-κB相关通路蛋白表达。结果:与空白组比较,1μg/mL LPS诱导的细胞活力为0.4972±0.061(P<0.01),接近半数抑制率。与LPS组比较,240μmol/mL丹皮酚预处理的细胞组下调p-NF-κB蛋白表达最显著(P<0.01),10μmol/mL TAK242预处理细胞组抑制TLR4蛋白表达最显著(P<0.01)。与LPS组比较,丹皮酚组细胞形态有所恢复;降低细胞培养液中MDA含量、增高GSH含量(P<0.01);线粒体膜电位结果中,丹皮酚组红光显著增强,绿光显著减弱(P<0.001);丹皮酚组F4/80及p-NF-κB蛋白表达分布显著降低(P<0.01),并下调了TLR4、p-IκB、p-p38、p-JNK、p-NF-κB蛋白表达(P<0.05)。结论:丹皮酚可改善LPS诱导的RAW264.7细胞炎症损伤,其机制可能与TLR4/MAPK/NF-κB通路相关。

鱼腥草素钠对脂多糖诱导单核巨噬细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用

目的探讨鱼腥草素钠(SH)对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用及其机制。方法实验分为空白对照组(等体积培养基),模型组(等体积培养基),SH低、中、高剂量组(1.25,5,10μmol/L),以含不同浓度SH的常规培养基培养细胞2 h,后4组细胞加入LPS继续培养24 h。收集细胞上清液,测定一氧化氮(NO)水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及前列腺素E_(2)(PGE_(2))的水平;提取细胞总蛋白,采用Westernblot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)蛋白及核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白(NF-κB-P-P65蛋白和P-IκB-α蛋白)的表达水平。结果与模型组比较,SH中、高剂量组细胞NO水平显著降低,SH低、中、高剂量组细胞TNF-α,IL-6,PGE_(2)水平和COX-2,NF-κB-P-P65,P-IκB-α蛋白表达水平均显著降低,SH中、高剂量组细胞iNOS蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论SH能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎性因子的分泌,其作用机制与抑制炎性蛋白iNOS和COX-2的表达及NF-κB通路相关蛋白的磷酸化有关。

不同剂量异鼠李素对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响及其机制探讨

目的观察异鼠李素(ISO)对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264. 7增殖能力的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期RAW264. 7细胞,将细胞分为5组,低、中、高剂量组分别加入已经配好含10 ng/m L脂多糖(LPS)及低、中、高剂量ISO(50、100、200μg/m L)的溶液,模型组加入含10μg/m L LPS的1640培养基(含10%FBS),对照组加入含10%溶剂对照的1640完全培养基。测算各组细胞增殖指数,检测各组一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)。结果与对照组比较,模型组细胞12、24、36、48 h细胞增殖指数增加(P均<0. 05);与模型组比较,低剂量组24、36 h及中剂量组和高剂量组12、24、36、48 h细胞增殖指数减少(P均<0. 05);与低剂量组比较,中剂量组24 h及高剂量组24、48 h细胞增殖指数减少(P均<0. 05)。与对照组比较,模型组NO、TNF-α水平升高(P均<0. 05);与模型组比较,低剂量组NO水平及中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0. 05);与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0. 05)。结论 ISO可抑制RAW 264. 7细胞增殖能力,且呈剂量依赖性,高剂量作用最大;机制可能与抑制NO、TNF-α有关。

转录组测序分析细粒棘球绦虫原头蚴刺激后巨噬细胞Raw264.7 lncRNA表达的研究

为了解巨噬细胞Raw264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)刺激时其长链非编码RNA(lncRNA)的差异表达规律,本研究采用Illumina Hiseq 3000高通量RNA sequencing测序技术对PSC处理以及PBS处理的Raw264.7细胞进行lncRNA测序和生物信息学分析后,进一步采用GO和KEGG数据库分别对差异表达的lncRNAs进行富集分析。结果显示,和PBS对照组相比,PSC处理组有60个lncRNA分子的表达出现显著差异变化,其中17个表达上调,43个表达下调。GO分析结果显示,差异表达的lncRNA分子的靶基因主要与钠离子跨膜转运体活性调节,2型免疫反应正向调节以及自然杀伤细胞凝集素样受体结合等相关;KEGG分析结果显示,差异表达的lncRNA分子的靶基因主要参与VEGF信号、Toll样受体信号通路、NOD样受体等信号通路。本研究进一步分析了与Raw264.7细胞固有免疫相关的lncRNA分子,结果发现有11个模式识别受体(PRR)相关的lncRNA分子。随机选取6个差异表达的lncRNA分子进行了qRT-PCR验证,结果显示其表达趋势与lncRNA测序结果一致。本研究首次系统解析了巨噬细胞Raw264.7应对PSC刺激时其lncRNA的差异表达谱特性,为进一步解析lncRNA在巨噬细胞Raw264.7应对PSC刺激时的免疫调控机制奠定了基础。

木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶对小鼠巨噬细胞RAW264.7的抗炎作用研究

目的:研究木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶的抗炎作用及机制。方法:以正常小鼠巨噬细胞RAW264.7为对照,以脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞为炎症模型,采用MTT法检测不同浓度(10、20、40、80μmol/L)的木犀草素、4,4′-联吡啶和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶作用细胞2 h后的细胞活性;荧光定量聚合酶链式反应法测定40μmol/L浓度时细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)m RNA的表达,酶联免疫吸附法测定40μmol/L浓度时细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)蛋白表达,Western blot法测定40μmol/L浓度时细胞中核转录因子p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果:与正常细胞比较,LPS诱导后RAW264.7细胞活性明显降低(P<0.01),i NOS和COX-2 m RNA表达水平及TNF-α、IL-6、NF-κB p65蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。木犀草素和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶均能增强LPS诱导后RAW264.7细胞活性(P<0.05或P<0.01),且呈浓度依赖性;4,4′-联吡啶对LPS诱导后RAW264.7细胞活性无明显影响;40μmol/L浓度下,木犀草素和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可使LPS诱导后细胞中i NOS和COX-2 m RNA表达水平及TNF-α、IL-6、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),其中木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶降低效果强于木犀草素(P<0.05或P<0.01)。结论:木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可能通过下调NF-κB信号来抑制炎症相关因子产生,其抗炎作用优于木犀草素。

Th1/Th2型免疫反应相关基因在巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时的表达谱研究

本研究旨在解析巨噬细胞RAW264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时其Th1、Th2型免疫反应相关基因的差异表达规律,为进一步揭示巨噬细胞抗细粒棘球绦虫原头蚴免疫调控机制奠定理论基础。将细粒棘球绦虫原头蚴和巨噬细胞RAW264.7共培养6、24、72 h,收集RAW264.7细胞,提取总RNA,构建cDNA文库,利用RNA sequencing技术进行测序分析。结果表明,当细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)与巨噬细胞RAW264.7共培养6、24、72 h后,和PBS对照组相比,PSC处理组分别有848、3745和7009个基因的表达出现显著差异变化,其中上调的基因分别为415、1159和2237个,下调的基因分别为433、2586和4772个。对Th1、Th2型免疫反应相关基因的差异表达分析结果显示,当巨噬细胞RAW264.7与细粒棘球绦虫原头蚴共培养6 h时,共有31个Th1、Th2型免疫反应相关基因的表达出现显著变化,其中15个基因出现显著上调,16个出现显著下调。当巨噬细胞RAW264.7与细粒棘球绦虫原头蚴共培养24 h时,共有111个Th1、Th2型免疫反应相关基因的表达出现显著变化,其中34个基因出现显著上调,78个出现显著下调。当巨噬细胞RAW264.7与细粒棘球绦虫原头蚴共培养72 h时,共有212个Th1、Th2型免疫反应相关基因的表达出现显著变化,其中50个基因出现显著上调,162个出现显著下调。这些差异表达的基因主要包括富亮氨酸重复序列蛋白LRRCs、G蛋白偶联受体GPCRs、C型凝集素受体CLRs、清道夫受体SRs等,同时还有一些模式识别受体PRR下游信号分子以及一些PRR下游效应分子。同时分析结果显示,当细粒棘球绦虫原头蚴与巨噬细胞RAW264.7共培养6、24 h时,其Th1型的免疫反应相关的细胞因子编码基因,诸如Tnfrsf1a、Ifnar1的Tnfrsf12a等,它们的表达显著上调;而72 h时,其Th2型免疫反应相关细胞因子编码基因,诸如IL4和IL6等,它们的表达显著上调。同时研究随机选取了部分差异表达的基因进行了qRT-PCR验证,结果表明其表达趋势与RNA-seq结果一致。本研究系统解析了巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激不同时间段其相关基因的差异表达谱特性,初步筛选了巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激固有免疫相关的基因,为进一步解析这些差异表达基因在巨噬细胞RAW264.7应对细粒棘球绦虫原头蚴刺激时发挥作用以及调控机制奠定了基础。

PI3K/PTEN/Akt/mTOR通路在浒苔多糖粗提物调节小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能中的作用

目的:验证浒苔多糖粗提物上调小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能,并初步探讨其是否通过PI3K/PTEN/Akt/m TOR通路实现。方法:以不同浓度浒苔多糖粗提物干预RAW264.7细胞,干预不同时间后四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法测定巨噬细胞RAW264.7增殖率;ELISA法测定白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量PCR检测m TORm RNA的表达水平;以100nmol/L雷帕霉素、500μg/ml浒苔多糖粗提物、500μg/m L浒苔多糖粗提物+100nmol/L雷帕霉素干预RAW264.7细胞,测定细胞因子IL-6、TNF-α分泌水平。结果:500μg/m L浒苔多糖粗提物干预12h,可获得最佳增殖率53.47%;RAW264.7细胞分泌IL-6的水平随着浒苔多糖粗提物浓度的增大而增加,且在24h达到分泌高峰,TNF-α分泌水平随着时间延长而增加(F=311.63,P<0.001),同时随着干预浓度的提高而增加(F=51.80,P<0.001);浒苔多糖粗提物干预12、24h后,m TOR表达水平增高(F=4.256,P=0.029;F=20.606,P<0.001);较之500μg/m L浒苔多糖粗提物组,500μg/m L浒苔粗提物+100nmol/L雷帕霉素组IL-6水平下降44.58%,TNF-α水平下降65.96%(P均<0.001)。结论:浒苔多糖粗提物促进巨噬细胞RAW264.7增殖,调节其细胞因子释放,可能与PI3K/PTEN/Akt/m TOR通路有关。

利用荧光定量PCR检测B.ovis侵染巨噬细胞RAW264.7的相对数量

为了探讨布鲁氏菌胞内寄生的机制,采用荧光定量PCR方法对进入巨噬细胞的布鲁氏菌的数量进行检测,克隆了绵羊种布鲁氏菌019株的16SrRNA基因和小鼠巨噬细胞RAW264.7的GAPDH基因。以16SrRNA基因和巨噬细胞GAPDH做为内参基因,将二者的比值作为检测布鲁氏菌进入巨噬细胞数量多少的指标,建立绵羊种布鲁氏菌019株侵染巨噬细胞不同阶段的感染模式。结果表明:在绵羊种布鲁氏菌019株侵染巨噬细胞15min～1h,16SrRNA与GAPDH的比值缓慢上升,侵染1～4h中,16SrRNA与GAPDH的比值急剧上升,说明在此阶段,细菌侵入细胞中的数量显著增多。

重楼提取液对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的影响

目的:观察重楼提取液对小鼠巨噬细胞RAW 264.7增殖的影响。方法:采用不同浓度(0μL/m L、1μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L)的重楼提取液,作用于体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7,使用倒置显微镜观察细胞形态的变化;通过四唑盐比色法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖情况。结果:与阴性对照组相比,作用24 h后,50μL/m L、100μL/m L重楼提取液均能抑制RAW264.7细胞的增殖;作用48 h后,5μL/m L、10μL/m L、50μL/m L、100μL/m L均能抑制RAW264.7细胞的增殖,并且具有时间及浓度依赖性,其抑制效果在100μL/m L作用48 h时最好。结论:高浓度重楼提取液抑制细胞增殖,细胞接触变松,密度降低,贴壁能力减弱,可见较长伪足,生长状态差。

广叶绣球菌水溶性多糖结构表征及其对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响

试验采用超声波辅助水提醇沉法结合DEAE-52和Sephadex G-100柱从广叶绣球菌子实体中提取纯化得到水溶性多糖组分SLP-a和SLP-b,之后运用高效凝胶渗透色谱法和离子色谱法分析SLP-a和SLP-b分子质量及单糖组成,以傅里叶红外色谱法、扫描电镜和原子力显微镜对SLP-a和SLP-b红外光谱特征和形貌特征进行结构表征,最后通过噻唑兰比色法(MTT)研究SLP-a和SLP-b对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响。结果表明,SLP-a和SLP-b分子质量分别为6346 u~125 ku和217 u~196 ku;SLP-a由摩尔比为64∶1∶19的果糖、木糖、甘露糖组成,SLP-b由摩尔比为12∶1∶6∶3的葡萄糖、木糖、半乳糖、甘露糖组成;SLP-a分子呈现为少分支及单链状构象,SLP-b分子呈现为球形及大小不一短链构象;SLP-a和SLP-b表观均为簇状堆积,交织,结构规律性不强,具有一定粗糙、紧密、集中的网状结构;SLP-a与SLP-b均能促进巨噬细胞RAW264.7的增殖,具有潜在的免疫调节能力。

琼胶寡糖对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用

目的:研究琼胶寡糖对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用。方法:采用傅里叶红外光谱法、核磁共振和高效液相色谱法解析琼胶寡糖的分子结构;采用LPS诱导巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应模型,测定琼胶寡糖对RAW264.7细胞活力、细胞内一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和活性氧簇(ROS)水平的影响;采用Western blot分析丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和蛋白激酶p38的表达和磷酸化水平。结果:分子结构鉴定结果显示琼胶寡糖具有β构型半乳糖糖环结构,分子质量范围为1065.5~1308.2 u。琼胶寡糖可以提高LPS诱导巨噬细胞系RAW264.7炎症反应后的细胞活力,在0~250μg/mL剂量下呈浓度依赖性地降低细胞内NO、TNF-α和ROS水平,对LPS诱导MAPK家族激酶JNK、ERK、p38磷酸化水平的升高具有抑制作用。结论:琼胶寡糖能够抑制LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应,可能与阻碍MAPK信号转导有关。

锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用的影响

目的研究锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。方法以巨噬细胞RAW264.7为研究对象,设置空白对照组、阳性(LPS)对照组、锁阳多糖给药组(25、50、100、200、400μg/mL),用CCK-8法测定细胞增殖活性,中性红法测定其吞噬活性; Griess法测定其对NO分泌量的影响; ELISA法测定其IL-6和TNF-α的释放能力。结果与空白组比较,不同浓度(25～400μg/mL)锁阳多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖(P<0.05或P<0.01),干预24h和48h的增殖活性明显高于干预6h和12h的增殖活性(P<0.05);锁阳多糖(25～400μg/mL)能显著促进细胞的吞噬活性(P<0.05);干预48h后,锁阳多糖(25～400μg/mL)的NO分泌量显著高于空白组和LPS组(P<0.05);与空白组和LPS组相比,锁阳多糖(25～400μg/mL)能显著促进细胞IL-6和TNF-α的释放(P<0.01)。结论锁阳多糖在一定浓度范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。

冠突散囊菌与木霉混合发酵液醇提物对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节的影响

为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用(LC-MS)技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝(MTT)比色法、中性红吞噬实验及酶联免疫吸附测定方法分别研究冠突散囊菌与木霉混合发酵液活性部位对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖、吞噬以及分泌细胞因子的能力的影响。结果表明,冠突散囊菌与木霉混合发酵液体积分数70%乙醇提取部位有较好的免疫活性,该部位含有大黄素、芥子碱等生物活性成分。与阳性对照组脂多糖相比,500μg/mL冠突散囊菌与木霉混合发酵液的体积分数70%乙醇提物能够使小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率提高12%,增强小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的能力,并能促进NO及细胞因子IL-6、TNF-α的分泌。

恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7体外免疫调节作用初探

初步探讨恰麻古粗多糖BRP、中性多糖BRNP-1、BRNP-2及酸性多糖BRAP-1、BRAP-2对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。实验方法选用CCK-8法检测不同质量浓度各恰麻古多糖组对巨噬细胞RAW264.7细胞增殖率的影响;以中性红法观察各组恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的影响;Griess法测定恰麻古多糖致巨噬细胞RAW264.7对NO的释放水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测细胞因子TNF-α(肿瘤坏死因子)与IL-6(白介素-6)分泌水平。实验结果显示不同质量浓度各恰麻古多糖组能够显著提高巨噬细胞RAW264.7增殖率与对中性红的吞噬活性,并能够刺激巨噬细胞释放NO,且促进其TNF-α及IL-6分泌水平。通过实验,初步验证了各恰麻古多糖具有良好的生物活性,并对巨噬细胞RAW264.7具有免疫调节作用。

野生亚侧耳多糖的提取和对巨噬细胞Raw264.7的免疫调节作用研究

本研究从亚侧耳子实体中分离出水溶性亚侧耳多糖(HSP),通过体外实验评估其对Raw264.7巨噬细胞的免疫调节作用。采用WST-1法检测HSP对巨噬细胞增殖作用的影响,Griess试剂检测一氧化氮(NO)浓度,ELISA法检测HSP对淋巴细胞中一肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE2)等细胞因子分泌量的影响,反转录聚合酶链式反应分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)、TNF-α和IL-1β的转录水平表达量。结果表明,HSP可显著提高Raw264.7细胞内NO的浓度,在HSP浓度为100.00μg/m L时,NO的分泌量达到最大值(29.94 mmol/L)。与空白组相比,HSP可以显著提高TNF-α、IL-1β、PGE2等免疫因子(P<0.05)的分泌量,其中IL-1β、PGE2的25μg/m L剂量组中各因子分泌量(31.9524 pg/m L,1.8174 ng/m L)均与LPS(脂多糖)阳性对照组相接近。反转录聚合酶链式反应分析结果表明,HSP能够提高iNOS和COX-2的蛋白表达量。HSP具有免疫调节的功能,可以作为免疫调节剂添加到功能性食品和药品中。

刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响研究

目的探讨不同浓度刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响。方法以正常培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7为正常对照组,小鼠巨噬细胞加入1 mg/mL脂多糖(LPS)为LPS组,采用刺糖精多糖(12.5、25、50、100、200μg/mL)作用巨噬细胞RAW264.7 24h和48h为实验组,采用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖。以刺糖精多糖及LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24、48h,收集细胞培养上清液,用Griess试剂盒检测细胞培养上清中一氧化氮(NO)含量。采用中性红吞噬实验检测吞噬活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测刺糖精多糖不同浓度(12.5、25、50、100、200μg/mL)及不同作用时间(24h和48h)培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。结果刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7作用24、48h后,与空白对照组比较,质量浓度为12.5、25、50、100、200μg/mL的刺糖精多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。质量浓度为12.5、25、50、100、200μg/mL的刺糖精多糖和1mg/mL LPS作用于巨噬细胞RAW264.7 24h和48h后,NO生成量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。当多糖质量浓度为100、200μg/mL时,NO生成量高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。在一定浓度范围,多糖作用巨噬细胞后NO的生成量随刺糖精多糖浓度的增加而增加,线性回归方程为:Y=0.0108 X+0.0777,R2=0.997。刺糖精多糖浓度在12.5、25、50、100、200μg/mL时,能明显地增强RAW264.7细胞的吞噬能力(P<0.05),且刺糖精多糖促进细胞吞噬的能力明显强于LPS(P<0.05)。刺糖精多糖各剂量组能刺激小鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子TNF-α,并随着刺糖精多糖剂量的增加,TNF-α的分泌量逐渐升高。除正常对照组外,各组48h时TNF-α的含量高于24h。结论不同浓度的刺糖精多糖和LPS作用巨噬细胞RAW264.7后,刺糖精多糖能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖和吞噬功能及其产生NO,分泌TNF-α呈剂量相关性,对其免疫活性起正向调节作用。