巨细胞病毒增强子提高人甲胎蛋白启动子效率的研究

人巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子能够提高其他基因启动子的转录启动效率。CMV早期转录增强子对人甲胎蛋白(AFP)启动子的转录增强的作用及特异性的影响,将决定其是否适用于肝癌靶向性基因治疗。作者利用PCR法分别克隆了人AFP增强子、启动子和CMV早期转录增强子,构建了相应的pGL4.10荧光素酶报告基因载体,与内参照pGL4.74质粒共转染人肝癌细胞Hep3B、HepG2、SMMC7721和人宫颈癌细胞HeLa、乳腺癌细胞Bcap37,利用双荧光素酶检测系统检测分析了这些细胞中AFP增强子—启动子的效率。结果表明,CMV早期转录增强子能够明显增强AFP增强子—启动子在肝癌细胞中的效率(在Hep3B、HepG2和SMMC7721细胞中分别提高33.07、134.22和465.18倍),但是也能提高AFP增强子—启动子在非肝癌细胞中的效率(在HeLa和Bcap37细胞中分别提高335.73和1096.81倍)。因此,CMV增强子虽然可以大大提高AFP增强子—启动子的效率,但无特异性,直接将其用于靶向AFP的肝癌基因治疗时可能会产生由于治疗基因在正常组织中的非特异表达而引起的副作用。

CMV早期转录增强子对人癌胚抗原启动子效率的作用研究

为了探讨人巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子用于癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤的靶向基因治疗的意义,我们参考有关文献利用PCR法分别克隆了369 bp的人CEA启动子和531 bp的CMV早期转录增强子,构建了相应的pGL4.10荧光素酶报告基因载体,与内参照pGL4.74质粒共转染CEA阳性的人肠癌细胞LoVo、HT-29、SW620、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF7和CEA阴性的肠癌细胞SW480、宫颈癌细胞HeLa、人肺成纤维细胞LL47,利用双荧光素酶检测系统检测分析了这些细胞中CEA重组启动子的效率。结果表明,CMV增强子能够明显增强CEA启动子在CEA阳性细胞中的效率(提高7.46至70.16倍),但是也能提高CEA启动子在CEA阴性细胞中的效率(提高24.01至76.40倍)。因此上述CMV增强子虽然可以大大提高CEA启动子的效率,但是对特异性有影响,在将其用于CEA阳性肿瘤基因治疗时还需采用其它保证特异性的手段。

CCL22在人类免疫缺陷病毒感染中的作用

CCL22是CC型的趋化因子,其受体为CCR4.CCL22抑制巨噬细胞中R5人类免疫缺陷病毒1型的复制,其影响的不是病毒侵入或反转录等早期过程,而是作用于病毒侵入细胞后阶段.对CCL22独特功能的深入研究和CCR4这一病毒新共受体的发现将为人类免疫缺陷病毒的防治提供新的途径.

含有不同启动子、WPRE以及ITRs对重组杆状病毒表达新城疫F蛋白的影响

为了提高基因工程疫苗对新城疫病毒F蛋白的表达能力,从而为研制高效基因工程疫苗奠定了基础。利用Western blot技术检测含有不同启动子与表达元件的重组杆状病毒,在中国仓鼠卵巢细胞中其F蛋白的表达量的差异。Western blot结果显示,含有CMV立即早期增强子区与鸡肌动蛋白启动子区的复合启动子的质粒表达F蛋白量较含人巨细胞病毒立即早期启动子(CMV)的质粒提高了24.52%~231.18%,含有土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)能够提高F蛋白表达量2.9~8.6倍,而腺伴随病毒末端反向重复序列(ITRs)对质粒F蛋白表达量提高1.95%~9.27%。CBA启动子的启动能力远高于CMV的启动能力,调控元件WPRE能够显著提高F蛋白的表达量,而ITRs元件对于F蛋白的表达量未产生显著提高。