孕早期人巨细胞病毒宫内活动性感染的诊断方法学研究

目的 探讨诊断孕早期HCMV宫内活动性感染的实验方法及其价值。方法 留取 68例有异常妊娠史的早孕妇女绒毛组织 ,分为两份 ,一份提取总RNA ,采用RT PCR检测其中的HCMVmRNA ,一部分制成冰冻切片 ,分别采用原位杂交技术 (ISH)检测HCMVmRNA ,免疫组织化学法检测HCMV早期抗原。结果 采用RT PCR检测到的孕早期绒毛组织HCMVmRNA阳性率为 39 7% ;ISH阳性率为 2 3 5 % ;免疫组化检测HCMV早期抗原阳性率2 2 1 %。RT PCR检出率明显高于ISH(P <0 0 5) ,而ISH与免疫组化的阳性率无显著性差异 (P >0 0 5)。结论 测定绒毛组织中的HCMVmRNA、早期抗原是HCMV宫内活动性感染的客观指标。RT PCR的敏感性最高 ,但ISH与免疫组化可同时作定位、定量观察 ,可操作性强 。

逆转录聚合酶链反应技术用于产前诊断人巨细胞病毒宫内活动性感染的临床价值

目的 探讨逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术用于产前诊断人巨细胞病毒 (HCMV)宫内活动性感染的临床价值。方法 应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)、RT PCR及血浆套式聚合酶链反应 (N PCR)法 ,检测 2 0 9例孕妇外周血HCMVmRNA、HCMVIgM及HCMVDNA ,其中任意 2项阳性为HCMV活动性感染 (99例 ,观察组 )、任意 2项均阴性为非活动性感染 (110例 ,对照组 )。应用RT PCR和N PCR技术 ,检测两组孕妇从宫内采集的孕早期绒毛共 78例、孕中期脐血和羊水共 131例 ,并追踪胎儿生长发育及出生后情况。结果 (1)观察组绒毛、脐血HCMV感染率分别为 5 3 3% (16 30 )、4 7 8% (33 6 9) ;对照组分别为 8 3% (4 4 8)、9 7% (6 6 2 ) ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1)。观察组绒毛、脐血HCMV活动性感染率分别为 30 0 % (9 30 )和 2 9 0 % (2 0 6 9) ;显著高于对照组的 4 2 %(2 4 8)和 4 8% (3 6 2 ) ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1)。 (2 )HCMVDNA阳性胎儿中 ,HCMVmRNA阳性胎儿的流 (早 )产率为 4 1 2 % (14 34) ,显著高于HCMVmRNA阴性胎儿的 8 0 % (2 2 5 )。HCMV活动性感染胎儿中 ,有 10例因胎儿生长发育异常而行终止妊娠术。结论 应用RT PCR技术产前诊断HCMV宫内活动性感染安全可靠 。

一氧化氮与妊娠早期人巨细胞病毒宫内活动性感染的关系

目的 探讨一氧化氮与妊娠早期人巨细胞病毒 (HCMV)宫内活动性感染的关系。方法 选取既往有自然流产、死胎、胎儿畸形、胎儿生长受限等异常妊娠史并行人工流产术的早孕妇女 81例 ,应用逆转录 聚合酶链反应技术检测其胎盘绒毛组织HCMV mRNA的表达 ;酶联免疫吸附试验法测定其血清HCMV IgM ;原位杂交法检测其蜕膜巨噬细胞诱生型一氧化氮合酶 (iNOS) mRNA的表达并行定量分析。结果 (1) 81例孕妇中有 6例胎盘绒毛组织HCMV mRNA阳性 ,14例血清HCMV IgM阳性 ,阳性率为 17 3 % (14/ 81)。依据HCMV mRNA与HCMV IgM检测结果 ,81例孕妇分为 3组 :Ⅰ组 :HCMV mRNA与HCMV IgM均阳性 5例 ,其宫内传播率为 3 5 7% (5 / 14) ;Ⅱ组 :HCMV mRNA阴性而HCMV IgM阳性 9例 ;Ⅲ组 :HCMV mRNA与HCMV IgM均阴性 66例。另有 1例HCMV IgM阴性者其胎盘绒毛组织HCMV mRNA阳性。 (2 )Ⅰ组患者蜕膜iNOS mRNA呈强表达 ,其吸光度值为 0 412±0 0 19,明显高于Ⅱ组的 0 172± 0 0 3 3与Ⅲ组的 0 167± 0 0 3 3 ,Ⅰ组与Ⅱ组及Ⅲ组比较 ,差异有显著性(P <0 0 5 ) ;Ⅱ组与Ⅲ组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。 1例HCMV IgM阴性而胎盘绒毛组织HCMV mRNA阳性者 ,蜕膜iNOS mRNA也呈强表达 ,其吸光度值为 0 40 3。结论 一氧化氮可?

人类巨细胞病毒活动性感染与母婴垂直传播

目的 :探讨孕妇人类巨细胞病毒 (HCMV)活动性感染与母婴垂直传播的关系。方法 :应用ELISA、PCR和RT PCR方法分别检测 117份、12 2份、2 5份妊娠妇女及其新生儿或流产物的HCMV IgM抗体、mRNA及DNA。HCMV IgM抗体或HCMV mRNA阳性的孕妇为HCMV活动性感染组 ,HCMV DNA阳性的孕妇为HCMV非活动性感染组。新生儿脐血 ,生后 1周内子尿、唾液HCMV阳性 ,或流产物阳性者为HCMV宫内感染。结果 :活动性感染孕妇组垂直传播率为 80 .0 0 % ,非活动性感染孕妇组垂直传播率为 17.4 0 % ,两者有显著性差异 (P <0 .0 1)。活动性感染孕妇垂直传播的相对危险度RR =19.0 0。结论 :HCMV活动性感染与母婴垂直传播密切相关 ,将HCMV

定量检测HCMV pp67 mRNA快速诊断人巨细胞病毒活动性感染

目的 建立实时荧光定量逆转录PCR（Real time RT-qPCR）方法,检测外周血中人巨细胞病毒（HCMV）pp67mR-NA的拷贝数,用于临床快速诊断HCMV活动性感染。方法采用RT-qPCR测定86份癌症患者外周血标本中的HC-MVpp67mRNA拷贝数,并与HCMVpp65抗原血症检测及HCMV分离培养的实验结果进行比较。结果 86例癌症患者中,HCMV病毒分离检测阳性率3.49%（3例）;实时荧光定量RT-PCR检测阳性率17.44%（15例）,灵敏度为100%,特异性为85.54%;HCMV pp65抗原血症检测阳性率为10.47%（9例）,灵敏度为66.7%,特异度为92.8%。两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。通过受试者工作特征（ROC）曲线分析,RT-qPCR检测每2×105个外周血白细胞中HCMV拷贝数的截断点值为201.5;此病毒拷贝数可作为诊断HCMV活动性感染的参考阈值。结论 应用RT-qPCR检测HCMV活动性感染,灵敏度高、特异性好;并能够为抗病毒治疗供重要的参考依据。

T细胞亚群水平检测对判断新生儿巨细胞病毒感染活动性的意义

目的探讨巨细胞病毒感染对新生儿细胞免疫的影响,为新生儿巨细胞病毒感染的防治提供依据。方法选择2008年5月～2010年10月本院巨细胞病毒感染新生儿38例,其中18例出现感染性症状(A组),20例未出现感染性症状(B组),选取同期健康新生儿20例(C组),分别采集三组患儿静脉血,检测患儿T细胞亚群水平。结果A组患儿CD3+,CD4+,CD4+/CD8+明显低于B组及C组(P<0.05),差异有统计学意义,B组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组CD8+水平明显高于B组、C组,差异有统计学意义(P<0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论巨细胞病毒感染患儿出现症状性感染者存在细胞免疫功能异常,临床检测新生儿T细胞亚群水平对判断新生儿巨细胞病毒活动性感染、指导早期治疗有重要意义。

应用原位免疫聚合酶链反应检测活动性巨细胞病毒感染

目的 建立一种新的诊断活动性巨细胞病毒感染的方法。方法 应用原位免疫聚合酶链反应 (PCR)技术检测早、中、晚期孕妇宫颈脱落细胞中巨细胞病毒抗原。结果 119例受检标本中有 16例出现人巨细胞病毒(HCMV)抗原阳性 ,孕早、中、晚期孕妇活动性 HCMV感染率分别为 :9.37%、11.90 %、17.77% ;检出的 HCMV抗原阳性细胞数为 2～ 38/ 5万宫颈脱落细胞 ,平均 8.5 / 5万细胞。常规 ABC法平行检测 ,原位免疫 PCR法检测敏感性高于 ABC法。结论 原位免疫 PCR方法敏感性高、特异性强 ,可检出微量 HCMV抗原 ,为临床诊断活动性

pp67检测对器官移植术后巨细胞病毒活动性感染的诊断价值

目的:评价检测器官移植术后患者外周血中巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)的信使核糖核酸编码的晚期基质表层蛋白(pp67)对移植术后CMV感染的的诊断价值,以建立一种快速、客观的CMV活动性感染的新诊断方法。方法:采用核酸基础序列扩增法(nucleicacidsequence-basedamplifica-tion,NASBA)测定50例器官移植术后患者外周血中的pp67,并与CMV即刻早期抗原(pp65)检测结果作比较。结果:50例中,26例pp65阳性,其中同时检出pp67阳性者16例(两者符合率62%);有症状的CMV病患者9例,其pp65与pp67均为阳性;pp67阴性34例无1例发展为CMV病;pp67的灵敏度为100%、特异度为82%、阳性预测值为56%、阴性预测值为100%。结论:pp67检测是快速、实用、客观诊断CMV感染的方法,能准确反映CMV的活动状况。

肾移植受者人巨细胞病毒活动性感染的监测

目的:建立一种新的快速诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法。方法:运用免疫组织化学的催化信号扩增法通过抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体AAC10对外周血白细胞中的人巨细胞病毒pp65抗原进行标记识别。结果:检测61例肾移植受者中,HCMVpp65抗原阳性36例,活动性感染率为59%(36/61),有症状的HCMV20例,占所有受者33%(20/61),平均抗原指数(98±31)个/2×105WBC;而无症状的活动性感染HCMVpp65抗原指数平均为(21±22)个/2×105WBC。同时检测50名健康人,结果pp65抗原全为阴性。结论:该法敏感、简便,可作为肾移植后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗。

早孕妇女活动性巨细胞病毒感染的调查及其宫内感染检测方法的研究

本文对北京、青岛及沈阳三市的1202名早孕妇女进行了原发性HCMV感染的临床调查,血清中特异性HCMV—IgM和IgA抗体的酶联免疫吸附法检测;分析了患病的风险因素;并采用辣根过氧化物酶复合物(PAP)免疫组化技术检测其胚胎绒毛中的HCMV,以便建立一种宫内感染诊断的方法。利用透射电镜和聚合酶链反应(PCR)技术来验证此方法的可靠性,结果显示PAP法的阳性及阴性率与电镜观察的符合率为100％,与PCR法的符合率分别为97.0％与86.6％,实为一种敏感、经济、易行的宫内诊断方法。

人巨细胞病毒活动性感染与习惯性流产的关系探讨

目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染与习惯性流产的关系。方法：选择2008年5月。2010年5月我院妇产科收治的反复性流产孕妇40例作为研究组，选择同期体检正常孕妇50例作为对照组，采集两组患者外周血，离心分离出有核细胞及血浆，采用实时荧光定量PCR和免疫荧光法检测HCMV-DNA和HCMVpp65抗原，分析HCMVpp65抗原阳性与流产的关系及两种检测方法的一致性。结果：研究组HCMVpp65抗原阳性率明显高于对照组，两组比较，差异有统计学意义（X2=7．69，P〈0．05）；研究组中流产次数多的孕妇，HCMVpp65抗原阳性率明显高于流产次数相对较少的孕妇，差异有统计学意义（x2=8．58，P〈0．05）。研究组中实时荧光定量PCR检测HCMV—DNA和免疫荧光法检测HCMVpp65抗原的一致性较好，达92．5％。结论：孕妇习惯性流产与其体内巨细胞病毒活动性感染有重要联系．习惯性流产孕妇HCMVpp65抗原检测与HCMV—DNA有良好的一致性，可作为习惯性流产的早期判断指标。

宫内人巨细胞病毒感染的前瞻性研究

应用ＥＬＩＳＡ方法及聚合酶链反应，对１８１８例孕母及其婴儿进行孕期人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的母婴间宫内传播的前瞻性研究。结果表明：孕母ＨＣＭＶ－ＩｇＧ阳性率为８９．２％；孕母ＨＣＭＶ活动性感染率为４．５％，孕早、中、晚各期ＨＣＭＶ活动性感染率分别为２．４％、３．５％、１．９％，其中原发感染略高于１．１％，提示孕期大多数孕妇为复发感染；孕母ＨＣＭＶ抗体在孕期有阳转或阴转的不同变化；孕母不仅ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性可感染胎儿，即使ＨＣＭＶ－ＩｇＧ阳性、ＩｇＭ阴性，其子仍有感染ＨＣＭＶ可能，ＨＣＭＶ－ＩｇＧ抗体对胎儿不能完全起保护作用；提示应用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ技术对ＨＣＭＶ母婴传播进行诊断，对于早期干预及改善预后有极重要的作用，有必要对先天性ＨＣＭＶ感染儿进行长期随访。

宫内巨细胞病毒感染致异常妊娠结局的发生机制研究

目的:建立宫内巨细胞病毒(CMV)感染的豚鼠模型,研究CMV宫内感染致异常妊娠结局的发生机制。方法:随机选择无CMV感染史的孕早期豚鼠,腹腔接种GPCMV,分娩24h内处死,运用套式聚合酶链反应(N-PCR)和地高辛标记的CMV晚期mRNA三相探针原位杂交技术,探究GPCMV宫内感染及其致异常妊娠结局的发生机制。结果:感染的孕鼠出现病毒血症征象,其子代出现流产、死胎等异常结局。N-PCR检测孕鼠及其子代GPCMV感染率分别为100.00%和94.57%,且感染脏器均出现非特异性组织病理学变化。杂交阳性信号位于子宫内膜基质细胞、子宫腺细胞、血管内皮细胞的胞质内。结论:孕早期GPCMV感染对妊娠结局影响最严重。中性粒细胞可将CMV携带到子宫毛细血管内皮细胞,导致胎盘感染和绒毛退行性变,这可能是进而引发子代生长发育异常的原因之一。

育龄妇女巨细胞病毒活动性感染的相关因素探讨

目的了解育龄妇女人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染情况以及探讨感染的相关因素。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对2 348名育龄妇女进行巨细胞病毒IgM抗体（CMV-IgM）检测。结果本地区育龄妇女CMV-IgM平均活动性感染率为18.5%,正常妊娠组高于未孕组（P〈0.05）,不良生育妇女显著高于正常妊娠及未孕妇女（P〈0.005）;农民CMV-IgM阳性率高于其他职业（P〈0.05）;≥30岁妇女CMV-IgM阳性率高于22-29岁妇女（P〈0.05）;健康状况较差妇女CMV-IgM阳性率高于身体健康的妇女（P〈0.05）;HCMV活动性感染率随孕产次数增多而递增;四季中以秋季阳性检出率为最低。结论 HCMV活动性感染与年龄、季节、孕产次数、生活环境及健康状况等因素相关,其是引起不良生育的重要原因之一。

金叶败毒颗粒防治妊娠中期巨细胞病毒宫内感染的实验研究

目的观察金叶败毒颗粒防治妊娠中期豚鼠巨细胞病毒宫内感染的效果。方法选择无感染史、性成熟期雌雄豚鼠同笼受精,随机选择妊娠中期母豚鼠,分为3组,每组15只,正常对照组无特殊处理,模型对照组腹腔接种病毒,金叶败毒组接种病毒同时灌胃给予金叶败毒颗粒(3.09 m L·kg-1),7 d后观察各组母豚鼠病毒血症发生率,20 d后观察各组胎盘感染率、胎仔感染率及死胎率。结果正常对照组和模型对照组死胎率分别为8.33%,34.55%(P<0.05)。模型对照组和金叶败毒组亲代感染率分别为86.67%,33.33%;胎盘感染率分别为91.67%,61.22%;胎仔感染率分别为90.91%,48.28%;死胎率分别为34.55%,15.52%(均P<0.05)。结论金叶败毒颗粒可减少妊娠中期病毒接种引起的母胎感染及胎仔死亡,减少胎盘感染。

人巨细胞病毒宫内感染产前诊断方法的研究

目的:探索人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染产前诊断的最佳方法。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、巢式PCR(N-PCR)和逆转录PCR(RT-PCR)对比分析武汉、上海和沈阳3地3908例孕妇HCMV感染状况及其对妊娠结局的影响。结果:孕妇HCMV IgM检出率为6.24%,与HCMV DNA和晚期mRNA的检测符合率分别为59.03%和56.49%。活动性感染孕妇的宫内传播率(41.58%)明显高于对照组(15.87%)。HCMV晚期mRNA阳性的宫内感染儿流产、早产发生率明显升高。采集绒毛、羊水和脐血进行产前诊断的安全性良好。结论:在应用ELISA法进行初筛的基础上,联合应用N-PCR和RT-PCR技术检测HCMV DNA和晚期mRNA表达,是产前诊断HCMV宫内感染安全而可靠的方法之一。

孕前干预预防巨细胞病毒、弓形虫和风疹病毒宫内感染

目的 探讨孕前干预预防巨细胞病毒 (CMV)、弓形虫 (TO)和风疹病毒 (Ru)宫内感染的效果。方法 采用前瞻性随机对照临床研究 ,从 310 5例有异常妊娠史的育龄妇女中 ,筛查 CMV和 TO活动性感染者以及 Ru易感者 ,分别采用中西医方法进行干预 ,追踪至再次妊娠结束。结果 中药金叶败毒颗粒可使育龄妇女 CMV Ig M和 m RNA转阴率从 5 2 .4 4 % (43/ 82 )提高到 77.91% (6 7/ 86 ) (χ2 =12 .0 5 P=0 .0 0 1) ,螺旋霉素可使育龄妇女 TO Ig M转阴率从 4 2 .86 % (36 / 84 )提高到 6 7.0 1% (6 5 / 97) (χ2 =17.94 P=0 .0 0 1) ;CMV和 TO治疗转阴后再次妊娠分别有 34例和 2 8例 ,均足月分娩 ,无宫内感染。接种 Ru疫苗后 Ig G阳转率 95 % (76 / 80 ) ,38例再次妊娠后对 Ru具有免疫效应 ;而 2 3例未接种疫苗受孕者中 2例发生孕期感染并宫内传播 ,分别表现为自然流产和心脏畸形。结论 孕前干预具有减少妊娠期感染。