异基因造血干细胞移植后合并巨细胞病毒肺炎的临床分析

目的:分析异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒(CMV)肺炎的临床特点。方法:回顾性分析2019年1月1日至2022年10月31日在郑州大学第一附属医院接受异基因造血干细胞移植后并发CMV肺炎的29例患者的临床资料。结果:29例中,确诊1例,临床诊断16例,拟诊12例。18例(62.1%)治疗有效,11例(37.9%)无效。无效组合并其他病原微生物感染(P=0.001)、移植物抗宿主病(P=0.005)及接受有创通气(P=0.018)患者比例大于有效组。结论:异基因造血干细胞移植后合并CMV肺炎确诊困难,治疗有效率低,需尽早明确诊断,尽早治疗。

异基因造血干细胞移植术后巨细胞病毒感染的临床研究

目的:探讨异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒(CMV)和难治性CMV感染(RCI)发生的危险因素及对生存的影响。方法:回顾性分析2015-2020年在重庆医科大学附属第一医院行异基因造血干细胞移植的246例患者的临床资料,根据是否感染CMV将患者分为CMV组(67例)和non-CMV组(179例),再根据是否发生RCI将CMV患者进一步分为RCI组(18例)和non-RCI组(49例)。分析CMV感染和RCI的危险因素,并用ROC曲线验证Logistic回归模型的诊断意义,同时分析组间的总生存期(OS)和无进展生存期差异,以及影响OS的危险因素。结果:发生CMV感染的患者,首次CMV感染的中位时间为移植后48(7-183)d,感染持续的中位时间为21(7-158)d。患者年龄偏大、合并EB病毒(EBV)血症或者发生Ⅱ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病均能显著增加CMV感染风险(P=0.032,<0.001和0.037),RCI的危险因素为EBV血症和诊断时的CMV-DNA峰值≥1×10^(4) copies/ml(P=0.039,0.006),而移植后14 d的白细胞≥4×10^(9)/L是CMV感染和RCI的保护因素(P=0.013,0.014)。CMV组的OS率显著低于non-CMV组(P=0.033),RCI组的OS率亦显著低于non-RCI组(P=0.043)。造血重建是OS的有利因素(P<0.001),而移植后60 d内CMV-DNA≥1.0×10^(4) copies/ml是OS的危险因素(P=0.005)。结论:移植后白细胞数量恢复较晚以及合并EBV血症是CMV感染和RCI的共同危险因素;CMV-DNA载量1×10^(4) copies/ml是重要临界值,高于该值可导致高RCI及低OS风险。

儿童异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染诊治进展

巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染在免疫功能受损患儿,尤其是接受异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)患儿中易引起严重的危害。近年来,随着造血干细胞移植(HSCT)工作在各大移植中心陆续开展,CMV感染的防治备受关注且有利于提高allo-HSCT的成功率和存活率。本文通过对儿童allo-HSCT后CMV感染的流行病学、危险因素、诊断、预防和治疗以及新型抗CMV药物的文献综述对与CMV感染相关的最新研究进展作一介绍。

宏基因组二代测序技术确诊儿童巨细胞病毒脑炎1例

儿童巨细胞病毒脑炎是儿童感染人巨细胞病毒引起的中枢神经系统疾病,在免疫正常的儿童中少见,临床表现多样,易漏诊、误诊。宏基因组二代测序(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)是一种新型的、有效的病原体检测技术,近年来在临床中的应用逐渐增多。本文回顾了1例经mNGS技术确诊的儿童巨细胞病毒脑炎的诊治经过,并进行文献复习。

新疆地区儿童异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染相关危险因素分析

目的分析儿童异基因造血干细胞移植(HSCT)后巨细胞病毒(CMV)感染首次发生的相关危险因素。方法通过回顾性分析2018年02月—2021年09月在新疆维吾尔自治区人民医院行异基因造血干细胞移植的患儿62例,随访至移植+100d,应用χ^(2)检验及Logistics回归模型,分析CMV感染发生的危险因素。结果62例患儿中共有36例(58.1%)在移植+100d内首次发生CMV感染,感染发生的中位时间为+38(23.5~56.8)d,单因素分析结果显示,干细胞来源、急性移植物抗宿主病(aGVHD)与CMV感染相关(P<0.05),多因素分析结果显示,Ⅰ-Ⅱ度aGVHD(OR,22.025,95%CI,4.144~117.060)、Ⅲ-Ⅳ度aGVHD(OR,12.082,95%CI,1.144~127.653)P值均<0.05,与CMV感染独立相关。结论儿童异基因造血干细胞移植后aGVHD与CMV感染的发生相关,应在移植早期得到足够的重视。

异基因造血干细胞移植治疗儿童肝炎后极重型再生障碍性贫血导致难治性巨细胞病毒肺炎所致死亡1例

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是再生障碍性贫血的重要治疗方法。常见的并发症是机会性感染和移植物抗宿主病(GVHD)。巨细胞病毒(CMV)是机会性感染最常见的原因之一,也是导致移植相关发病率和死亡率的重要原因。本文报道一例肝炎后再生障碍性贫血行异基因造血干细胞移植(亲缘半相合)术后巨细胞病毒感染所致重症肺炎导致死亡的患儿。给予早期、足量、联合、长期的抗病毒治疗后,仍不能阻止病毒在体内的复制,最终导致死亡。

基于低深度全基因组测序技术的拷贝数变异测序辅助诊断胎儿巨细胞病毒感染3例并文献复习

目的:总结拷贝数变异测序(copy number variant sequencing,CNV‐seq)对检测胎儿染色体及巨细胞病毒载量的应用价值。方法:分析CNV‐seq检测胎儿染色体及巨细胞病毒载量的3例巨细胞病毒载量阳性患者的临床基础资料、相关实验室检查、治疗过程及转归并文献复习。结果:3例病例中患者羊水巨细胞病毒载量均小于105 Copies/mL,且其孕期临床表现、产后随访均未见明显神经系统异常。文献复习未见有关CNV‐seq技术应用于巨细胞病毒感染的检测,仅有对已确诊患者进行CMV‐DNA的基因组分析的文献报道。结论:CNV‐seq可用于巨细胞病毒载量的检测,其病毒载量对胎儿的结局可能具有一定程度的预判价值。CNV‐seq可同时检测胎儿染色体及病原微生物,对于出生缺陷防控有着重要意义。

人巨细胞病毒UL133基因型导致儿童肝功能损伤的机制研究

目的:探索人巨细胞病毒(HCMV)UL133基因型导致儿童肝功能损伤的分子机制。方法:(1)动物实验:将30只健康SD幼鼠依据随机数字表法分为空白组、对照组及实验组3组,每组10只。空白组幼鼠经尾静脉注射生理盐水,对照组幼鼠经尾静脉注射空载的腺病毒,实验组幼鼠经尾静脉注射携带UL133基因的慢病毒;使用小动物活体成像系统(NightOwlⅡLB 983活体光学分子影像系统)对每组幼鼠进行成像,确认其形成肝损伤模型。采用RT-PCR法检测3组幼鼠肝脏组织UL133RNA的表达量,ELISA法检测肝脏组织Caspase-3、Caspase-6及Toll样受体4(TLR4)受体的表达量,HE染色观察肝细胞变化,TUNEL法检测肝细胞的凋亡。(2)临床验证:选择人巨细胞病毒感染合并肝功能异常患儿为肝损害组(66例),无肝功能异常患儿为无肝损害组(64例)。通过原位杂交和PCR扩增检测患儿尿液HCMV基因型UL133和血清caspase-3、caspase-6的表达水平。结果:实验组幼鼠肝脏的荧光信号强度、肝细胞凋亡指数、UL133RNA、Caspase-3、Caspase-6及TLR4受体的表达水平均高于对照组和空白组(P<0.05),对照组和空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。肝损害组患儿尿液UL133阳性率、血液Caspase-3及Caspase-6的表达水平均高于无肝损害组(P<0.05)。结论:人巨细胞病毒UL133基因型可以诱导TLR4,致使效应分子Caspase-3和Caspase-6的表达增高,最终使得幼鼠肝脏受到损伤。感染UL133基因型巨细胞病毒的婴幼儿可因Caspase-3和Caspase-6的表达增加最终诱发肝脏损伤。

异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染易感因素及防治研究进展

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是治疗恶性血液系统疾病最为有效的方法。而CMV感染是该过程后常见的感染性并发症之一,可能导致组织侵入性疾病,并增加移植后急、慢性移植物抗宿主病(GVHD)、其他机会性感染和医疗负担。这对发病率、死亡率和移植物存活率产生重大影响,甚至对患者构成致命风险。CMV终末器官疾病的致死率高,预后差。现已有定量诊断检测和治疗CMV的抗病毒疗法,但由于副作用和耐药性,应用受限。因此,如何保护患者平安度过感染的窗口期,是亟需解决的关键问题。本综述将就此问题进行讨论。

异基因造血干细胞移植患者T淋巴细胞亚群与EB病毒感染的相关性分析

目的 分析异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者T淋巴细胞亚群与EB病毒(EBV)感染的相关性。方法选取北部战区总医院2015年5月至2021年12月行allo-HSCT的67例患者作为研究组,同时选取54例造血干细胞移植供者作为对照组。应用实时荧光定量PCR技术检测EBV-DNA含量,采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群水平。比较2组研究对象T淋巴细胞亚群分布差异。分析EBV-DNA载量与T淋巴细胞亚群水平的相关性。结果研究组患者EBV-DNA感染率和病毒载量均高于对照组(P<0.05)。CD3~+CD4~+T淋巴细胞与CD4~+/CD8~+比值在研究组EBV阳性组患者中含量低于EBV阴性组,差异均有统计学意义(P=0.010,P=0.005)。研究组EBV阴性组与EBV阳性组CD3~+CD4~+T淋巴细胞百分比均主要分布在20%~<40%,2组分布差异有统计学意义(χ~2=9.269,P=0.010),CD3~+CD8~+T淋巴细胞百分比分布比较差异无统计学意义(χ~2=0.279,P=0.870)。研究组EBV阳性组CD4~+/CD8~+比值主要分布在0.6~<1.2,2组比较差异有统计学意义(χ~2=10.367,P=0.006)。EBV-DNA病毒载量与CD3~+CD8~+T淋巴细胞含量呈正相关(P<0.01),与CD4~+/CD8~+比值呈负相关(P<0.01)。结论allo-HSCT患者活动性EBV感染与T淋巴细胞亚群关系密切,检测外周血T淋巴细胞亚群对allo-HSCT患者EBV感染的病情严重程度评估具有重要意义。

人巨细胞病毒gp52蛋白基因片段的克隆及表达

目的为获得高表达人巨细胞病毒 ｇｐ５２蛋白基因的工程菌。方法通过计算机分析，筛选出巨细 胞病毒蛋白ｇｐ５２中优势抗原决定簇，用ＰＣＲ技术扩增克隆了含强抗原决定簇的基因片段。将克隆的基因片段插 入表达载体ｐＥＴ２８（ａ）内，转化大肠杆菌ＢＬ２１，经Ｓｅｐｈａｒｅｒｙ１ Ｓ－２００分子筛及Ｎｉ－ＮＴＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ螯合层析进行纯化。结 果获得的工程菌所表达的 ｇｐ５２蛋白片段相对分子质量约为 ２１ ０００，约占菌体可溶性蛋白的 ２８％。获得的表达蛋 白纯度达９５％，电泳显示单一条蛋白带，ＥＬＩＳＡ分析证实有较强的抗原性和较好的特异性。结论本研究对人巨细 胞病毒感染，尤其是对孕妇及献血员等感染的检测有重要意义。

猪巨细胞病毒的PCR检测及其gB基因特征分析

根据GenBank登录的猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因序列设计检测引物和全长gB基因引物,对来自湖南浏阳和江西景德镇不同养殖场的猪鼻拭子样品(51份)进行PCR检测,60.78%(31/51)的鼻拭子样品扩增出了260bp的特异性条带.再以阳性样品为模板扩增全长gB基因,并将其克隆到pMD18-T载体,核苷酸序列测定和结果分析表明,所获得PCMVgB基因序列全长2580bp,编码860个氨基酸,与国外PCMV分离株的核苷酸同源性为97.6%～98.9%,氨基酸同源性为97.0%～98.6%,且PCMV可分为2个群:一群为中国湖南株、英国株和德国株,命名为A群;另一群为日本株、瑞士株和西班牙株,命名为B群.抗原表位优势、亲水性、表面可及性预测分析表明,PCMVgB蛋白是理想的免疫学抗原候选蛋白.

异基因造血干细胞移植术后巨细胞病毒感染的临床研究

本研究探讨异基因造血干细胞移植(allogenic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后的巨细胞病毒感染及其相关因素。对2004年1月1日至2014年3月31日在本院血液科行allo-HSCT的108例受者病例进行回顾性分析,统计allo-HSCT后及其随访期内巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)的感染发生率、中位发生时间并分析移植后受者CMV感染的相关高危因素及CMV病死亡率等指标。结果表明:纳入入选标准的108例alloHSCT受者,其CMV感染率为52.78%(57/108),首次检出CMV感染的中位时间为44(3-308)d,主要集中在移植后30-100 d;单因素分析显示,CMV感染的发生率与供受者人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)配型、预处理方案中未使用抗人胸腺细胞免疫球蛋白(anti-human thymus globulin,ATG)、移植后粒细胞缺乏时间>10 d及移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)等因素有关,与受者年龄、性别、原发疾病种类、原发疾病到移植间隔时间、原发疾病分级、干细胞来源、供者性别、供受者ABO血型是否相同及移植季节等因素均无关;多因素分析显示:粒细胞缺乏时间>10 d和GVHD是CMV感染的高危因素。移植后因CMV病的死亡率为58.82%(10/17),其中CMV间质性肺炎(CMV-interstitial pneumonia,CMV-IP)死亡率最高,占CML病死亡病例的60%(6/10)。结论:CMV是allo-HSCT术后常见的感染病毒之一,移植时最好选择亲缘、HLA配型全相合的供者,在预处理方案中加用ATG,移植后将粒细胞缺乏时间控制在10 d以内以及预防GVHD的发生均有可能减少CMV感染发生率;积极加强CMV感染的抢先治疗有可能减少CMV病的发生率和死亡率。

婴幼儿巨细胞病毒感染器官损害与基因型

目的了解婴幼儿人巨细胞病毒(HCMV)感染时,母婴血清抗体不同表型与其肝损伤和致畸的关系,并检测其糖膜蛋白B基因型。方法选择2009年1月—2010年12月某院收治的337例血清HCMVIgG抗体阳性,尿液HCMVDNA定量>500copies/mL的HCMV感染患儿,同时检测其母亲血清HCMVIgG抗体。采用酶联免疫捕获法检测血清HCMV抗体;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HCMVDNA;人胚肺成纤维细胞(HEL)进行HCMV病毒分离;巢式PCR、限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术进行HCMV临床分离株糖膜蛋白B基因型检测。结果在337例HCMV感染患儿中,124例血清抗体表型为HCMVIgM(+)IgG(+),其母亲血清抗体表型HCMVIgG(-)组患儿肝功能异常与致畸率分别为86.42%和40.74%,显著高于母亲IgG(+)组的65.12%和34.88%(均P<0.01);213例患儿血清抗体表型为HCMVIgM(-)IgG(+),其母亲血清抗体表型HCMVIgG(+)与IgG(-)两组比较,患儿肝功能异常率(53.85%vs66.89%)差异无显著性(P>0.05),而致畸率母亲IgG(-)组(28.38%)显著高于IgG(+)组(23.08%)(P<0.05)。HCMVIgG(+),尿液HCMVDNA≥104copies/mL患儿的尿标本中病毒分离阳性率为50.00%(31/62)。随机抽取8株HCMV临床分离株(来源患儿中7例有肝脑损害),检测糖膜蛋白B基因,均为gB1型,与标准株AD169株、TOWNE株的DNA序列相似性分别达94.8%和97.0%。8株HCMV的DNA序列同源性达98.5%;氨基酸序列同源性高达99.4%。结论母亲为HCMVIgG阳性的患儿肝功能异常和致畸率比母亲为HCMVIgG阴性的患儿低。HCMVDNA≥104copies/mL婴幼儿可预示症状性HCMV感染。gB1型可能是导致婴幼儿肝脑损害的主要基因型。

人类巨细胞病毒感染对淋巴系祖细胞增殖过程中Hoxc4及Hoxc6基因表达的影响

本研究探讨人类脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系祖细胞(CFU-TL)分化过程中hoxc4、hoxc6基因表达的情况,并且用人类巨细胞病毒(HCMV)和/或全反式维甲酸(ATRA)进行干扰,在基因水平探讨HCMV感染导致脐血CFU-TL损伤的机制。采用体外定向培养CFU-TL,经MTT法检测后,应用荧光定量RT-PCR技术检测经人HCMV和/或ATRA处理的人脐血CFU-TL中hoxc4、hoxc6基因的mRNA表达水平。HCMV-AD169滴度为106蚀斑形成单位(PFU)/ml,按0.1ml105PFU/ml接种培养体系。结果表明:正常对照组、病毒处理组、维甲酸处理组hoxc4、hoxc6基因均在增殖分化的第3天少量表达,第7天表达最强烈(p<0.05),第12天表达明显下降。各组中hoxc4基因表达量高于hoxc6组(p<0.05)。与正常对照组比较,维甲酸组(6×10-8mol/L)的hoxc4、hoxc6基因表达上调(p<0.05),而病毒处理组hoxc4、hoxc6基因表达下调(p<0.05)。结论:hoxc4与hoxc6基因在脐血CFU-TL中各组呈现规律的表达,提示hoxc4、hoxc6均与淋巴系造血有密切的相关性。HCMV能使hoxc4、hoxc6基因表达下调,提示HCMV致造血细胞损害可能与hoxc4、hoxc6基因表达异常有关。ATRA能显著上调hoxc4、hoxc6基因的表达。

异基因造血干细胞移植后发生巨细胞病毒感染的临床分析

本研究总结巨细胞病毒(CMV)感染的发生及治疗。对北京军区总医院血液科2010年1月至2012年1月140例异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者的临床资料进行了回顾性分析。结果表明,140例allo-HSCT中48例患者发生移植后CMV感染,发生率为34.3%,首次检出CMV-DNA阳性中位时间为移植后45(33-68)d,CMV定量范围为1.25×103-5.5×106,其中2例为CMV相关性间质性肺炎,5例为CMV相关性出血性膀胱炎。发生移植物抗宿主病(GVHD)患者共65例,其中合并CMV感染32例,占49.2%。应用更昔洛韦、膦甲酸钠抗CMV治疗45(33-68)d后CMV-DNA转阴,有效率为100%。共有12例患者治疗过程中出现一过性的白细胞和血小板减少。结论:allo-HSCT后较易发生CMV感染,发生GVHD的患者CMV感染发生率也较高,更昔洛韦、膦甲酸钠对allo-HSCT后CMV感染的治疗效果可靠,且不良反应少。

猪巨细胞病毒GX株gB基因的克隆与序列分析

从广西病猪的肺组织中分离到猪巨细胞病毒GX株,通过PCR扩增得到猪巨细胞病毒GX株gB基因的一个1736bp片段,扩增产物经克隆、测序,得到的核苷酸序列与GenBank上已发表的猪巨细胞病毒其他分离株的核苷酸序列相比,其同源性在97.8%～98.9%,与人巨细胞病毒分离株的同源性在32.0%～43.6%,表明gB基因在同种动物间比较保守。在系统进化树中,GX株与其他猪巨化细胞病毒株亲缘关系较近,属于同一个分支,而与人巨化细胞病毒差异较大。

人类巨细胞病毒感染对人胚肺细胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB1,HOXB5 ,HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对上述基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6 ,但不表达HOXB1和HOXB9;②HCMV感染后 ,HEL细胞HOXB6基因的表达上调 ,且被HCMV诱导表达HOXB9T ,而HOXB5基因的表达无明显改变 ,HOXB1基因仍旧不表达 ;③全反式维甲酸 (ATRA)能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达 ,但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论 :HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常 。

HLA-E基因的多态性对同胞全相合造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的影响

本研究旨在探讨人类非典型HLA抗原E(HLA-E)对同胞全相合造血干细胞移植(HSCT)后巨细胞病毒(CMV)感染的影响。以2005年1月至2011年1月在我院行HLA同胞全相合HSCT患者119例为研究对象,采用PCR和测序方法检测供、受体HLA-E基因多态性。结果表明,HLA-E*0101/0101纯合型占20.17%,HLA-E*0103/0103纯合型占27.73%,HLA-E*0101/0103杂合型占52.10%;HLA-E*0101/0101纯合子组CMV感染15例,CMV感染率为62.50%;HLA-E*0103/0103纯合子组CMV感染16例,CMV感染率为48.48%;HLA-E*0101/0103杂合子组CMV感染20例,CMV感染率为32.25%。含HLA-E*0103基因组与HLA-E*0101/0101纯合子组患者CMV感染率比较,差异有统计学意义(P=0.0295),与CMV疾病的发生率比较,差异仍有统计学意义(P=0.0074)。结论:HLA-E基因多态性对同胞全相合移植后CMV感染和疾病的发生存在影响。

压电基因传感器检测巨细胞病毒PCR产物的实验研究

目的 应用自行研制的压电基因传感器检测巨细胞病毒临床标本的PCR产物 ,探讨压电传感器检测核酸反应的可行性以及各种影响因素。方法 设计特异性DNA探针巯基法固定于传感器晶振表面并调节谐振频率在液相中稳定性达到± 1Hz ,定量加入 65份巨细胞病毒临床标本的PCR产物并观察核酸反应导致的频率变化情况 ,并与PCR产物的电泳结果作对照。结果 加入HCMVPCR阳性产物的传感器谐振频率明显下降 ,3 8例阳性产物的平均频率下降值为73 66Hz ,阴性产物的频率没有变化。与PCR电泳结果的阳性符合率为 86 8%,阴性符合率为 93 10 %。