一种基于线粒体COI PCR-RFLP单酶切快速鉴定4种巨蛎属牡蛎的方法

本文报道了一种基于线粒体细胞色素氧化酶亚基I(mt COI)基因序列PCR-RFLP单酶切的牡蛎物种鉴定方法。本方法可快速鉴定福建牡蛎(Crassostrea angulata)、熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)、香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)等中国沿海常见的4种巨蛎属(Crassostrea)牡蛎。该方法以甲基转移酶(Msp I)作为限制性内切酶,对4种巨蛎属牡蛎的线粒体DNA COI扩增序列进行酶切,以得到的特异性条带为依据进行物种鉴定。本方法的鉴定结果与COI测序方法的鉴定结果一致,并且筛选出的单一的限制性内切酶Msp I在4种牡蛎的COI序列中不存在酶切位点的突变,准确率达到100%,能够为巨蛎属牡蛎的物种鉴别提供简便可靠的技术支撑。

福建沿海巨蛎属(Crassostrea)牡蛎的种类及其分布

福建省位于我国东南沿海,海岸线曲折,港湾众多,有多条河流入海,适宜牡蛎栖息繁衍,是我国牡蛎资源最丰富的地区之一。迄今关于福建沿海牡蛎种类组成及分布情况的研究报道尚少,鉴于近20余年福建主要海湾经历了高强度的牡蛎养殖,有必要了解福建沿海牡蛎自然群体的物种组成和数量占比等自然种质资源状况。基于现场调查取样,结合采用多重种特异性PCR、ITS2杂交种鉴定和CO I测序共同鉴定福建沿海巨蛎属(Crassostrea)牡蛎种类及其分布情况。研究结果表明,从福建沿海由北至南牡蛎野生种苗海区的19个采样点共960个样品中发现3种巨蛎属牡蛎,分别是福建牡蛎(Crassostrea angulata)、熊本牡蛎(C.sikamea)和香港牡蛎(C.hongkongensis),并未发现以往报道的近江牡蛎(C.ariakensis)。其中福建牡蛎(607个)占63.23%、熊本牡蛎(343个)占35.73%、香港牡蛎(10个)占1.04%。除个别采样点外,福建牡蛎和熊本牡蛎在各采样海区均有分布。香港牡蛎仅在泉州湾河口湿地自然保护区(新发现群体)有少量分布。研究结果揭示的福建沿海地区巨蛎属的物种种类及其分布为后续开展牡蛎遗传多样性分析和遗传分化等种群遗传研究提供了关键基础资料,为牡蛎种质资源的保护和利用打下重要基础。

辽宁沿海巨蛎属牡蛎的分布

作者采用多重种特异性PCR(multiplex species-specific PCR)技术,研究了巨蛎属(Crassostrea)牡蛎在辽宁沿海的分布。从辽宁沿海的共11个采样点共采集802个牡蛎样本,通过对COI基因的扩增,随机检测了其中的531个牡蛎样本,结果517个个体为长牡蛎(Crassostrea gigas),14个为近江牡蛎(Crassostrea ariakensis),未发现其他巨蛎属牡蛎。结果表明,辽宁沿海有长牡蛎和近江牡蛎等2种巨蛎属牡蛎分布,其中长牡蛎为优势种,分布于潮间带和潮下带,近江牡蛎为稀有种,分布于潮下带,而且在黄海和渤海海域均有分布。

福建沿海巨蛎属牡蛎的主要种类及其分布

本实验采用了多重种类特异性PCR(multiplex species-specific PCR)技术,研究了巨蛎属(Crassostrea)牡蛎主要种类在福建沿海的分布.从沿海11个采样地点共采集了657个野生牡蛎样本,随机抽取了327个牡蛎样本进行基因组DNA的提取和线粒体COI基因的鉴定,结果发现200个个体为葡萄牙牡蛎(Crassostrea angulata),101个个体为近江牡蛎(Crassostrea ariakensis),20个个体为熊本牡蛎(Crassostrea sikamea),6个个体为香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis).此次实验中未发现长牡蛎(Crassostrea gigas).结果表明,福建沿海有葡萄牙牡蛎、近江牡蛎、熊本牡蛎和香港巨牡蛎4种巨蛎属牡蛎分布.