巩膜上静脉烙闭法建立大鼠高眼压模型对视网膜微观结构的影响

目的观察巩膜上静脉烙闭法建立的大鼠高眼压模型对视网膜微观结构的影响,为青光眼视神经损伤及保护机制提供研究基础。方法选取不同体质量SD大鼠40只,分为A组(150~200 g)、B组(>200~250 g)、C组(>250~300 g)、D组(>300~350 g),每组各10只,分别测量3 d白天及夜间基线眼压。随机选取SD大鼠(雌雄随机,250~300 g)40只,术前测量3 d基线眼压,以右眼为实验眼,烙闭实验眼3~4支巩膜上静脉,以左眼为对照眼,于术后即刻、1~7 d、14 d、21 d、28 d分别测量实验眼和对照眼眼压。于术前及术后28 d分别用光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)仪测量视网膜厚度。于术后28 d处死大鼠,行石蜡包埋、苏木精伊红(hematoxylin eosin,HE)染色,计数视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)并测量视网膜厚度。结果不同体质量大鼠昼夜眼压比较差异均有统计学意义(均为P<0.001)。A组大鼠眼压较其他3组眼压低(均为P<0.05)。巩膜上静脉烙闭术后即刻实验眼眼压达到峰值,较对照眼高122%(P<0.001),之后缓慢下降,到术后14 d、21 d实验眼眼压较对照眼分别升高约41%、20%(均为P<0.001),到术后28 d实验眼与对照眼眼压差异无统计学意义(P>0.05)。OCT提示内层视网膜变薄(均为P<0.001)。HE染色切片结果提示RGCs数量减少,内、中、外层视网膜均变薄(均为P<0.05),且以内层变化最明显(P<0.001)。结论大鼠基线眼压昼夜存在差异,白天眼压较夜间眼压低,低体质量(150~200 g)大鼠眼压偏低。烙闭大鼠巩膜上静脉能维持3周的眼压升高,且能使视网膜变薄、RGCs数量减少,故巩膜上静脉烙闭法是建立大鼠高眼压模型的有效方法。

两种慢性高眼压大鼠模型视网膜结构和眼压变化的评估

目的评估两种慢性高眼压大鼠模型的升眼压效果和视网膜结构的改变。方法分别通过前房内注射微珠(微珠组)和结扎3支巩膜上静脉(结扎组)的方法制作两种慢性高眼压大鼠模型(每组6只)。使用Tono Pen眼压计测量大鼠眼压,模型制作当天及其后每周测量大鼠眼压,大鼠右眼为实验眼,左眼为对照眼(假手术眼)。采用荧光金上丘逆标的方法标记视网膜神经节细胞并计数;使用免疫荧光标记的方法观察大鼠视网膜结构的改变。结果造模后1-8周微球组和结扎组大鼠眼压均升高;其中结扎组眼压为(27.20±1.83)mm Hg(1 kPa=7.5 mm Hg),其对照眼眼压为(19.80±1.35)mm Hg(P=0.001,n=6);微珠组眼压为(27.40±1.88)mm Hg,其对照眼眼压为(19.40±1.00)mm Hg(P=0.000,n=6)。造模后8周,巩膜上静脉结扎组视网膜神经节细胞丢失37.9%、39.6%和33.5%(均为P=0.000,n=6),前房内注射微珠组丢失37.3%、39.4%和32.3%(均为P=0.000,n=6),两组视网膜神经节细胞的丢失数量比较差异均无统计学意义(P=0.855、0.949、0.634,n=6)。高眼压模型8周后,相较于对照组,微珠组和结扎组视网膜神经节细胞核数量均有明显减少,组织厚度变薄,但两组间差异无统计学意义[对照组厚度(7.32±0.39)μm,结扎组厚度(4.97±0.33)μm,微珠组厚度(5.00±0.31)μm]。前房内注射微珠组在部分组织切片可发现微珠污染。结论巩膜上静脉结扎和前房内注射微珠均可以使大鼠眼压稳定增高。巩膜上静脉结扎具有实施方便和价格低的优势,并且没有微珠污染的缺点。

大鼠慢性高眼压模型的实验研究

目的:观察烧灼大鼠不同数量巩膜上静脉后的眼部变化,确定比较理想的持续性高眼压动物模型。方法:选择SD大鼠27只,随机分为3组,以左眼为实验眼,右眼为空白对照组,各组分别烧灼大鼠实验眼巩膜上静脉2、3和4根,比较各组的术后眼压、并发症情况,并进行视神经的光镜和透射电镜观察。结果:术后各组实验眼眼压升高,与空白对照眼的眼压差异具有统计学意义,并出现角膜水肿,可引起视神经纤维丢失及凋亡的改变。烧灼3根巩膜上静脉组与其他组相比,具有眼压升高稳定、术后角膜水肿轻微、恢复快的优点。结论:烧灼大鼠3根巩膜上静脉是一种比较理想的高眼压动物模型,在青光眼研究中具有较好的应用前景。