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番茄红素β-环化酶和新黄质合酶功能差异关键氨基酸的发掘
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作者 王丽 赵子龙 +1 位作者 刘振 毛相朝 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第16期41-48,共8页
酶是天然存在的高效催化剂,长期的进化过程产生了诸多的同源酶,同源酶的序列相似高却有不同的功能,而导致功能差异的原因也倍受关注。类胡萝卜素合成过程中,番茄红素β-环化酶(lycopene β-cyclase,LCYB)和新黄质合酶(neoxanthin syntha... 酶是天然存在的高效催化剂,长期的进化过程产生了诸多的同源酶,同源酶的序列相似高却有不同的功能,而导致功能差异的原因也倍受关注。类胡萝卜素合成过程中,番茄红素β-环化酶(lycopene β-cyclase,LCYB)和新黄质合酶(neoxanthin synthase,NSY)序列高度相似但对番茄红素的环化功能不同,且并未有研究报道导致环化差异的原因。因此该研究选用氨基酸序列相似性为88.2%的枸杞来源LyLCYB和番茄来源SoNSY为研究对象,通过将基因soNSY的片段替换为lyLCYB对应位置的片段构建不同的嵌合体基因,并且利用定点突变策略构建差异位点的点突变蛋白,将改造后的基因在大肠杆菌中异源表达,测定其番茄红素环化活性。最终发现了219位点是导致LyLCYB和SoNSY番茄红素β-环化功能差异的关键氨基酸,为进一步探究影响其他来源的LCYB和NSY功能差异提供了理论支持。 展开更多
关键词 番茄红素Β-环化酶 新黄质合酶 嵌合体 差异氨基酸 大肠杆菌异源表达
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普通橄榄和清橄榄果实游离氨基酸差异成分与谷氨酰胺代谢 被引量:19
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作者 彭真汾 叶清华 +2 位作者 王威 谢倩 陈清西 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期229-236,共8页
基于高效液相色谱-串联质谱法结合多元统计分析技术测定普通橄榄‘长营’和清橄榄‘清榄1号’果实游离氨基酸的差异成分并对其代谢进行分析,为研究氨基酸在普通橄榄和清橄榄风味贡献上的差异提供依据。通过主成分分析、偏最小二乘投影... 基于高效液相色谱-串联质谱法结合多元统计分析技术测定普通橄榄‘长营’和清橄榄‘清榄1号’果实游离氨基酸的差异成分并对其代谢进行分析,为研究氨基酸在普通橄榄和清橄榄风味贡献上的差异提供依据。通过主成分分析、偏最小二乘投影判别分析和显著性分析确定差异成分,并进行对象之间的相关性分析。结果表明:普通橄榄‘长营’和清橄榄‘清榄1号’果实中游离氨基酸成分存在差异,差异氨基酸为呈甜味的丝氨酸(Ser)、谷氨酰胺(Gln)和呈鲜味的谷氨酸(Glu),且三者均以‘清榄1号’含量居高,使‘清榄1号’Ser、Gln和Glu对风味的贡献大于‘长营’,与其鲜食品质一致,其中2 个品种平均含量排名为Glu>Gln>Ser,差异倍数排名为Ser>Gln>Glu,综合2个指标以Gln为重要氨基酸;‘长营’Gln含量与天冬酰胺合成酶(asparaginesynthetase,AS)呈显著(P<0.05)负相关(r=-0.792),与可溶性糖呈显著(P<0.05)负相关(r=-0.711),与蔗糖和还原糖相关性不显著(P>0.05),‘清榄1号’Gln含量与AS活性相关性不显著(P>0.05),与蔗糖呈极显著(P<0.01)正相关(r=0.953),与可溶性糖呈显著(P<0.05)正相关(r=0.791),与还原糖呈显著(P<0.05)负相关(r=-0.780),2 种橄榄Gln含量与其代谢酶和糖类的相关性存在差异;综上揭示了游离氨基酸对普通橄榄和清橄榄风味贡献存在差异,特别是Gln对2类橄榄的影响且其可能通过调控AS活性和糖代谢来实现对其含量的调控进而影响果实风味。 展开更多
关键词 橄榄 高效液相色谱-串联质谱法 差异氨基酸 相关性分析
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与传染性支气管炎病毒血清型有关的S1亚基氨基酸差异的定位 被引量:3
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《中国家禽》 北大核心 1994年第4期30-31,共2页
研究发现3个不同血清型的4株英国毒株,其S1氨基酸的差异仅为2~3%。其S1核苷酸序列与3个荷兰分离物(D207、D274和D3896)也非常相似,7个分离物中两个间的最大差异是4.4%。氨基酸差异主要位于成熟S1亚... 研究发现3个不同血清型的4株英国毒株,其S1氨基酸的差异仅为2~3%。其S1核苷酸序列与3个荷兰分离物(D207、D274和D3896)也非常相似,7个分离物中两个间的最大差异是4.4%。氨基酸差异主要位于成熟S1亚单位的19~122和251~347残基上。 展开更多
关键词 支气管炎 病毒 血清型 氨基酸差异
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中国CVA6 D3基因亚型B细胞抗原表位氨基酸差异分析及VLPs初步制备
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作者 李晓亮 王聪聪 +10 位作者 王蕊 李冀琛 宋洋 路环环 肖金波 刘莹 宋敬东 刘一志 张勇 孙强 徐希柱 《国际病毒学杂志》 2022年第6期449-454,共6页
目的分析中国流行的柯萨奇病毒A6型(coxsackievirus A6,CVA6)D3基因亚型中的D3a和D3b分支序列结构蛋白B细胞抗原表位氨基酸差异性来优化设计CVA6病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗。方法对GenBank下载的含有P1区核苷酸CVA6序列,... 目的分析中国流行的柯萨奇病毒A6型(coxsackievirus A6,CVA6)D3基因亚型中的D3a和D3b分支序列结构蛋白B细胞抗原表位氨基酸差异性来优化设计CVA6病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗。方法对GenBank下载的含有P1区核苷酸CVA6序列,使用MEGA.11.0软件基于VP1序列采用最大似然法构建进化树划分基因型及亚型。采用在线工具WebLogo并结合CVA6 B细胞抗原表位研究的相关文献,对D3a和D3b分支序列VP1-VP3区B细胞抗原表位氨基酸差异性分析,为筛选疫苗候选株进行CVA6 VLP的制备。结果D3a与D3b分支序列在VP1 N末端P27位点分别是天冬酰胺(96.2%)和丝氨酸(92.9%);在VP3 N末端P60位点为甘氨酸(98.8%)和丝氨酸(60.0%)。基于上述差异性选择具有D3a(VP3-N-P60)和D3b(VP1-N-P27)两分支序列共有的B细胞抗原表位D3a-JX2018(GenBank accession number:MN845862)作为疫苗候选株,并成功制备了CVA6 VLP。结论本研究为疫苗候选株的选择提供了新的思路,为日后CVA6 VLPs疫苗和免疫诊断试剂的研发提供了基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A6型 基因亚型 氨基酸差异 B细胞抗原表位 病毒样颗粒疫苗
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鸭坦布苏病毒鸭胚成纤维细胞适应病毒编码基因序列测定及分析 被引量:2
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作者 李云霞 刘晓丽 +4 位作者 张玥 韩宗玺 邵昱昊 刘胜旺 孔宪刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期791-794,共4页
为研究鸭坦布苏病毒(DTMUV)Du/CH/LSD/110128在鸭胚成纤维细胞(DEF)的适应性及变异情况,本研究将Du/CH/LSD/110128接种DEF,测定各代病毒的TCID50,表明DTMUV分离株已适应DEF,并在72 h产生明显的细胞病变(CPE),自F8代起病毒适应DEF,其F10... 为研究鸭坦布苏病毒(DTMUV)Du/CH/LSD/110128在鸭胚成纤维细胞(DEF)的适应性及变异情况,本研究将Du/CH/LSD/110128接种DEF,测定各代病毒的TCID50,表明DTMUV分离株已适应DEF,并在72 h产生明显的细胞病变(CPE),自F8代起病毒适应DEF,其F10代病毒滴度为104.4TCID50/0.1 mL左右。对细胞适应毒F10代的DTMUV进行编码区基因测序并分析,结果表明Du/CH/LSD/110128细胞适应毒与DTMUV参考病毒株同源性在98%以上;其推导氨基酸序列与亲本病毒氨基酸序列差异不显著,仅存在10个氨基酸差异位点,主要在NS1和NS3蛋白,与鸡源、鸭源及鸽源病毒分别具有21个、14个、16个差异位点,这些差异位点主要存在于E蛋白、NS1蛋白和NS5蛋白。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 细胞适应 序列分析 氨基酸差异
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鹅细小病毒细胞适应毒株基因序列分析 被引量:1
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作者 邱娜 邵周伍林 +2 位作者 白小飞 张云 侯振中 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期25-28,共4页
为了研究鹅细小病毒(GPV)YN分离株在鹅胚成纤维细胞(GEF细胞)中的适应及变异情况,试验将YN毒株接种至GEF细胞中并连续传代至F19代,利用分段PCR法扩增F19代细胞适应毒和亲本病毒F0的全基因组序列,通过对测得序列进行剪辑、拼接,将F19代... 为了研究鹅细小病毒(GPV)YN分离株在鹅胚成纤维细胞(GEF细胞)中的适应及变异情况,试验将YN毒株接种至GEF细胞中并连续传代至F19代,利用分段PCR法扩增F19代细胞适应毒和亲本病毒F0的全基因组序列,通过对测得序列进行剪辑、拼接,将F19代病毒全基因组序列与亲本病毒序列进行比对,并推导氨基酸差异位点,分析遗传变异性。结果表明:该病毒分离株已适应GEF细胞,并在72小时产生明显的细胞病变,其F19代病毒效价为1×106TCID50/0.1mL。F19代病毒与亲本病毒F0代存在133个核苷酸差异,其中13个位于NS基因,36个位于VP基因,84个位于非编码区;推导的氨基酸序列与亲本病毒氨基酸序列比对差异不显著,存在22个差异位点,其中4个位于NS蛋白,18个位于VP蛋白。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 细胞适应 序列分析 氨基酸差异
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Separation and Identification of Differentially Expressed Proteins in Pistillate Flowers between Different Mulberry Cultivars
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作者 牛瑞鹤 陈媛媛 +3 位作者 张萍萍 祁伟 郑必平 谈建中 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2013年第10期1383-1385,1402,共4页
[Objective] This study aimed to explore the proteins related to pistillate flower development in different mulberry cultivars. [Method] The total proteins of the pistillate flowers of two mulberry cultivars Dal0 (Mor... [Objective] This study aimed to explore the proteins related to pistillate flower development in different mulberry cultivars. [Method] The total proteins of the pistillate flowers of two mulberry cultivars Dal0 (Morus atropurpurea Roxb.) and SG01 (Morus muIticaulis Perr.) were extracted, separated and detected through two- dimensional electrophoresis (2-DE) and mass spectrometry. [Result] There was sig- nificant difference in the expression of proteins from the pistillate flowers of different mulberry cultivars. From the 2-DE images of Dal0 and SG01, 445_+17 and 425_+12 protein spots were respectively detected. The expression levels of 75 protein spots differed significantly. Thirteen spots those were expressed at high levels and well separated were analyzed by mass spectrometry, and nine of them were identified successfully. The nine proteins are involved in the glycometabolism, protein and amino acid metabolism and defense responses during the development of mulberry pistillate flower after they were pollinated. [Conclusion] The findings will provide reference for further study on the molecular mechanism of mulberry pistillate flower de- velopment. 展开更多
关键词 Mulberry cultivars Pistillate flower Differentially expressed proteins Two- dimensional electrophoresis Mass spectrometry
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伪狂犬病病毒HLJ-2013株gB基因及蛋白特性的初步分析 被引量:2
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作者 朱冰 王靖飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期357-362,共6页
gB蛋白是介导猪伪狂犬病病毒(PRV)侵入宿主细胞的关键因子之一,同时也是重要的病毒抗原蛋白。为研究PRV分离株HLJ-2013 gB蛋白与其它参考株的差异性,本研究将HLJ-2013株与GenBank中的80条PRV参考株分别进行gB基因序列及推导氨基酸序列... gB蛋白是介导猪伪狂犬病病毒(PRV)侵入宿主细胞的关键因子之一,同时也是重要的病毒抗原蛋白。为研究PRV分离株HLJ-2013 gB蛋白与其它参考株的差异性,本研究将HLJ-2013株与GenBank中的80条PRV参考株分别进行gB基因序列及推导氨基酸序列的比对,并分析其与参考株gB氨基酸位点的差异;基于最大似然法构建了该基因及推导的氨基酸序列的系统发育树;利用间接免疫荧光试验初步比较了HLJ-2013株与PRV SC株gB抗原性的差异。结果显示,基于gB核苷酸序列及氨基酸序列构建的进化树显示HLJ-2013株处于一个独立于我国分离株的单独分支上,表明其起源可能同国内病毒株不同;与参考株相比,其氨基酸序列中存在27个氨基酸差异位点,并有一个独特的插入基序S75P76G77;免疫荧光鉴定结果显示,PRV SC株gB的一株单克隆抗体不与HLJ-2013株病毒发生特异性结合反应,提示两株病毒gB蛋白的抗原性可能存在差异。本研究初步表明HLJ-2013株的gB和其它病毒株的gB存在遗传及生物学特性上的明显差异,提示HLJ-2013类病毒的流行可能会给我国猪伪狂犬病的防控带来潜在威胁。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 氨基酸差异 免疫荧光
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Expression and Analysis of Microtus fortis against Schistosoma japonicum CD36 Gene
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作者 Yang Xiang Xue-Qin Zheng +6 位作者 Zhen Xiang Dong-Song Nie Yu Liu Xian-Lei Li Dian-Dian Lv Jun-Jian Hu Pei He 《Journal of Life Sciences》 2013年第8期791-795,共5页
The total RNA was extracted from Microtusfortis liver tissue which before being infected and after being infected 10 d and 15 d by the Schistosoma japonicum cercariae. Using Rattus norvegicus CD36 gene probe to hybrid... The total RNA was extracted from Microtusfortis liver tissue which before being infected and after being infected 10 d and 15 d by the Schistosoma japonicum cercariae. Using Rattus norvegicus CD36 gene probe to hybridize analysis of CD36 difference expression in the Microtus fortis liver tissues which were infected with Schistosorna japonicum before and after being infected. At the same time, the cDNA sequence and encoded amino acid sequence of the Rattus norvegicus CD36 gene and CD36 protein structural domains were analysized by using bioinformatics. The results showed that the CD36 expression levels in the liver tissue of Microtus fortis after being infected were significantly higher than before being infectied. The Rattus norvegicus CD36 cDNA sequence of a total length is 1625 bp and encoded 472 amino acid residues and Rattus norvegicus CD36 protein containing a CD36 superfamily domain. 展开更多
关键词 Microtusfortis Schistosomajaponicum CD36 EXPRESSION analysis.
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Cloning and stage-specific expression of CK-M1 gene during metamorphosis of Japanese flounder,Paralichthys olivaceus
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作者 陈妍婕 张全启 +6 位作者 齐洁 王志刚 王旭波 孙业盈 钟其旺 李朔 李春梅 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期558-564,共7页
The symmetrical body of flatfish larvae changes dramatically into an asymmetrical form after metamorphosis. The molecular mechanisms responsible for this change are poorly understood. As an initial step to clarify the... The symmetrical body of flatfish larvae changes dramatically into an asymmetrical form after metamorphosis. The molecular mechanisms responsible for this change are poorly understood. As an initial step to clarify these mechanisms, we used representational difference analysis of cDNA for the identification of genes active during metamorphosis in the Japanese flounder, Paralichthys olicaceus. One of the up-regulated genes was identified as creatine kinase muscle type 1 (CK-M1). Sequence analysis of CK-M1 revealed that it spanned 1 708 bp and encoded a protein of 382 amino acids. The overall amino acid sequence of the CK-M1 was highly conserved with those of other organisms. CK-M1 was expressed in adult fish tissues, including skeletal muscle, intestine and gill. Whole mount in-situ hybridization showed that the enhanced expression of CK-M1 expanded from the head to the whole body of larvae as metamorphosis progressed. Quantitative analysis revealed stage-specific high expression of CK-M1 during metamorphosis. The expression level of CK-M1 increased initially and peaked at metamorphosis, decreased afterward, and finally returned to the pre-metamorphosis level. This stage-specific expression pattern suggested strongly that CK-M1 was related to metamorphosis in the Japanese flounder. Its specific role in metamorphosis requires further study. 展开更多
关键词 CK-M1 METAMORPHOSIS gene expression Paralichthys olivaceus
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