“温和”差异裂解法在性侵积案检验中的应用

本文通过分享一起性侵积案的检验过程及成功经验,总结出一种独特的“温和”差异裂解法,为处理陈旧混合斑检材提供一种新的解决方案。生物检材为案发时受害人穿的秋裤,前期PSA确证实验的结果为阳性,并通过一步裂解法获得了比较完整的男女混合DNA分型,随后通过常规的差异裂解法仅能获得上清女性分型,沉淀部分未获得有效分型结果。经过多次摸索,尝试将第一步女性成分裂解条件变为:裂解液1 mL,蛋白酶K(protease K,PK)工作浓度50μg/mL,37℃裂解20 min;女性成分消化结束后,沉淀洗涤次数调整为1 mL超纯水洗涤1次,最终成功获得了单一女性及单一男性的DNA分型。后续利用模拟的男女混合斑样本对该方法进行进一步测试,发现当混合斑中男女成分的比例不超过1∶40时,该方法具有良好的效果。

Maxwell 16裂解纯化法提取陈旧精子DNA的应用

目的利用Maxwell 16裂解纯化法从保存8年以上陈旧精斑检材中获取精子DNA。方法 8份陈旧精斑检材采用Maxwell 16裂解纯化法提取精子DNA,并采用Powerplex○R21试剂盒进行复合扩增,产物用AB3130型遗传分析仪检测,结果与常规方法进行对比。结果成功获得8份陈旧精斑检材精子STR分型。结论差异裂解配合Maxwell 16裂解在陈旧精斑检材精子DNA检验中效果明显。

尼龙膜套管分离技术对混合斑中精子细胞DNA的提取

目的建立新型的混合斑中精子细胞分离的方法,并评价其应用价值。方法收集性侵案件中的40份混合斑检材,分别采用常规差异裂解法和尼龙膜套管分离技术进行精子细胞分离,使用硅膜试剂盒(Forensic DNA Extraction Kit for Soft Tissues)提取精子细胞DNA,Amp FlSTR~ Identifiler~ Plus PCR扩增试剂盒进行PCR扩增,3500x L基因分析仪进行电泳检测,并对两种分离方法的结果进行对比。结果 40份混合斑检材中,采用尼龙膜套管分离技术的检材仅3份有女性成分微弱残留,余均获得了完整的单一男性分型。而采用常规差异裂解法分离的检材中,有25份完全未检出男性精子细胞STR分型,15份检出男性精子细胞STR分型(7份不完整男性精子细胞STR分型,6份有女性成分残留,2份单一的男性精子细胞STR分型)。结论本研究建立的尼龙膜套管分离技术适用于混合斑中精子细胞的分离,特别是对含有大量女性细胞而精子细胞较少的检材提取效果明显,整个提取实验成本低廉、快速简便。

PSA试验在精斑检验中的应用探讨

目的通过比较、分析PSA实验结果,探讨PSA试验在精斑检验中的合理应用。方法对检材进行PSA试验后,通过差异裂解法获得上清及沉渣STR分型。结果经STR检测,与PSA试验结果存在不一致,其中假阳性13例,假阴性1例;上清中检出男性成分2例,男女混合9例。结论 PSA试验存在一定假阳性及假阴性率,检验经差异裂解法分离得到的上清不仅可以增加精斑检验的成功率,还可以作为补充为精斑检验带来更多有价值的信息。

混合斑中精子细胞DNA的自动化批量提取

混合斑中精子细胞的分离一直是DNA检验工作中的重点和难点,目前大多实验室常用的两步消化提取法步骤繁琐且耗时长,利用滤过膜对差异裂解法进行改良,在全自动核酸提取工作站上实现对混合斑中精子细胞DNA的自动化批量提取纯化,有利于提高工作效率。