体外纯化乳鼠许旺细胞的4种方法比较(英文)

背景:许旺细胞是外周神经系统中修复神经损伤及神经疾病的主要种子细胞之一。但是,许旺细胞的来源有限,且由于成纤维细胞的污染,使许旺细胞的纯度受到影响。有学者提出了其他的纯化方法,但每种方法都存在其不足之处而不能很好的满足临床应用的需要。目的:比较差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法4种体外纯化乳鼠许旺细胞方法的差异。方法:取SD大鼠坐骨神经得到所需神经组织。分别用差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法纯化许旺细胞。比较4种方法获得细胞的活力,免疫组织化学法鉴定许旺细胞并计算纯度。结果与结论:差速贴壁消化法所得到的细胞纯度稍低,活力尚可;冷喷注法获得的细胞纯度和活力均较高;磁珠分选法获得的细胞纯度和冷喷注法相当,但是活力稍差;G418筛选法活力差,纯度高。

骨髓间充质干细胞分离培养方法及其对CD8＋T淋巴细胞的免疫调控

背景:骨髓间充质干细胞具有免疫调节特性,使其在免疫抑制方面有可预期的应用价值。目的:探讨骨髓间充质干细胞的分离培养方法及其对CD8^+T淋巴细胞的免疫调控。方法:采用骨髓直接贴壁法获得原代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,利用差速贴壁结合消化法纯化原代细胞,加入Ⅰ型胶原蛋白作为细胞外基质,扩增骨髓间充质干细胞。取第2代骨髓间充质干细胞,分别将0,1×10~3,1×10~4,1×10~5/well的骨髓间充质干细胞与CD8^+T淋巴细胞共培养,植物血凝素刺激68 h,荧光CFSE法观察CD8^+T淋巴细胞聚集,MTT法检测CD8^+T淋巴细胞增殖率。结果与结论:(1)不同密度骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞均有抑制作用,1×10~3/well组抑制能力最弱,形成集落现象;1×105/well组抑制能力最强,细胞未见明显聚集现象;(2)1×10~3,1×10~4,1×10~5/well组CD8^+T淋巴细胞增殖率分别为(44.83±4.92)%、(31.94±6.28)%及(15.77±3.98)%,3组间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05);(3)结果表明,采用全骨髓直接贴壁法能获得原代大鼠骨髓间充质干细胞,采用差速贴壁联合消化控制法能完成细胞纯化,骨髓间充质干细胞浓度依赖性抑制T淋巴细胞增殖。