人肝再生增强因子FAD辅助的巯基氧化酶活性测定及其活性位点研究

目的:建立一种灵敏、简便、有效的判断人肝再生增强因子蛋白(ALRp)巯基氧化酶活性的方法,并分析ALRp的CXXC活性结构域在其发挥酶活性中的作用。方法:通过定点突变将ALRp的CXXC结构中的一个半胱氨酸突变为丙氨酸。巯基氧化酶实验分4组:①ALR组;②ALR-FAD组;③ALR突变体-FAD组;④无蛋白对照组。以还原型谷胱甘肽(GSH)为底物,于不同时点测定每组巯基浓度。结果:ALR-FAD组巯基浓度随时间的推移不断下降;其它3组巯基浓度在整个实验中均无明显变化。结论:建立了一种半定量分析ALRp巯基氧化酶活性的方法;并证明ALRp必须在FAD辅助下发挥酶活性,且ALRp的CXXC结构是ALRp具有该酶活性必不可少的部分。

配合物[Sb(mpo)_2Cl]的合成及晶体结构(Hmpo=2-巯基氧化吡啶)

标题化合物 C10H8ClN2O2S2Sb 由[C5H5NH][SbCl4]与 2-巯基氧化吡啶钠盐(Nampo)反应制得。其结构通过元素分析、IR 进行了表征,用 X-射线衍射法测定了该化合物的晶体结构。结果表明,晶体属于三斜晶系, 空间群为 P1, Mr = 409.50, 晶体参数:a = 9.4022(6), b =10.2910(7), c = 14.4631(9) ?, α= 104.321(1), β = 96.978(1), γ = 90.179(1)?, V = 1345.09(15)?3, Z = 4, Dc = 2.022 g/cm3, μ = 2.553 mm–1, F(000) = 792。晶体结构用直接法解出, 经全矩阵最小二乘法修正,最终结构偏离因子 R = 0.0368, wR = 0.0854。化合物分子中, 锑与一个氯原子和两个配体 mpo 配位,形成五配位变形的四角锥构型配合物。在晶胞堆积图中,锑原子又与另一分子中的氯原子以次级键形式作用,形成缺位配位多面体构型。

伯氏疟原虫静息巯基氧化酶表达阶段的确定

目的观察伯氏疟原虫静息巯基氧化酶(PbQSOX)的表达阶段及表达特点。方法分别采用SignalP-5.0 Server与TMHMM Server 2.0在线软件对PbQSOX蛋白的信号肽与跨膜区进行预测分析。利用同源重组技术,将PbQSOX-HA标签型打靶质粒经限制性内切酶NotⅠ酶切使其线性化,将线性化的质粒电转染至伯氏疟原虫株内并感染小鼠。经乙胺嘧啶筛选耐药型疟原虫血症小鼠,取小鼠外周血进行PCR鉴定,获取PbQSOX-HA标签型疟原虫。培养纯化裂殖体、配子体与动合子阶段的PbQSOX-HA标签型疟原虫,采用蛋白质印迹法与间接免疫荧光实验检测PbQSOX蛋白在伯氏疟原虫中的表达阶段与表达特点。结果生物信息学分析发现PbQSOX蛋白存在信号肽,不存在跨膜区,蛋白均在细胞膜外表达。经PCR鉴定,PbQSOX-HA标签型打靶质粒与伯氏疟原虫同源重组正确,并成功获得了PbQSOX-HA标签型疟原虫及纯化的PbQSOX-HA标签型裂殖体、配子体与动合子。蛋白质印迹法检测显示PbQSOX蛋白主要在配子体与动合子阶段表达,间接免疫荧光实验结果显示PbQSOX表达于配子体、雄配子、合子、retort与动合子表面。结论PbQSOX是伯氏疟原虫在有性生殖阶段表达的蛋白,主要表达于配子体、雄配子、合子、retort与动合子表面。

超氧中介巯基氧化剂对骨骼肌型钙释放通道的调控作用

目的通过研究可氧化巯基的萘醌(NQ)和硒(Se)化合物对骨骼肌型钙释放通道(RyR1)的调控作用,探讨以O2.-巯基为基础的氧化胁迫对细胞钙调控机制/钙信号通路的影响。方法在NQ和Se的激活及抑制浓度下,考察骨骼肌肌质网(SR)囊泡系的O2.-的产量及其对[3H]-ryanodine结合、钙释放动力学、RyR1的氧化还原电势Eryr、单通道活动和通道蛋白的自由巯基群规模等的影响。结果RyR1的自由巯基逐渐被NQ或Se氧化,表现为先激活后抑制通道;导致Eryr分别向更加还原和氧化方向移动;氧化巯基同时伴有浓度依赖性的O2.-产生,后者参与氧化RyR1自由巯基。结论O2.-在NQ和Se类巯基氧化剂调控RyR1的机制中起到重要作用,其主要作用目标之一是RyR1中那些对氧化环境敏感的自由巯基职能群。

巯基氧化剂硫汞撒对豚鼠耳蜗外毛细胞胞内钙离子流的影响

目的 观察外毛细胞内源性钙离子的释放。方法 分离豚鼠耳蜗外毛细胞 ,用硫汞撒(thimerosal)为激动剂 ,用钙离子敏感染料Fura 2和数字荧光显微镜观察离体外毛细胞内钙离子浓度的波动。结果 硫汞撒可诱发离体耳蜗外毛细胞胞内钙离子的明显增加 ,其增加程度在一定范围内与硫汞撒的浓度呈正比。在清除了细胞外液中钙离子后 ,硫汞撒仍可诱发离体耳蜗外毛细胞胞内钙离子浓度的升高。在此钙离子浓度升高的基础上向胞外液加入钙离子 ,胞内钙浓度进一步升高 ;它可被 5 0 0 μmol/L非选择性钙通道阻断剂LaCl3 阻断。而L型电压激活的钙通道阻滞剂硝苯吡啶对其无阻断作用。硫汞撒的作用可被巯基保护剂二硫苏糖醇阻断和逆转。百日咳毒素、咖啡因和理阿诺碱对硫汞撒的作用无影响。结论 巯基氧化剂硫汞撒可通过两条途径使外毛细胞胞内钙离子浓度升高 ,一是诱发离体外毛细胞内咖啡因和理阿诺碱咖啡因和理阿诺碱不敏感的内源性钙离子释放 ,二是通过硝苯吡啶不敏感的非特异钙通道使钙离子从胞外内流。

邻巯基氧化吡啶双齿配位的过渡金属(Ni,Pd)化合物NMR研究

本文报道了化合物 Ni(mpo)_2(1)和 Pd(mpo)_2(2)的~1H,^(13)C NMR 的化学位移和偶合常数 J_(H-H)并借助同核和异核二维相关谱,进行分析,归属了~1H,^(13)C NMR 谱线。简单讨论了这两个非对称结构化合物在溶液中的稳定性。

巯基氧化剂对急性肝损伤时肿瘤坏死因子α水平的影响

目的 观察巯基氧化剂在急性肝损伤时对肿瘤坏死因子α(TNF α)水平的影响。方法 采用半乳糖胺 /脂多糖 (Galn/LPS)所致急性肝损伤模型 ,雄性昆明种小鼠于注射Galn/LPS(每只 4mg/μg)前 1h ,腹腔注射巯基氧化剂二乙基顺丁烯二酸盐 (DEM ) 5mmol/kg ,并分别于Galn/LPS注射 6h后 ,测定血浆ALT活性、TNF α水平和肝脏GSH含量。 结果 DEM预处理可抑制Galn/LPS导致的血浆ALT活性、TNF α水平升高。结论 巯基氧化剂DEM可通过改变肝脏GSH含量的变化 ,影响细胞氧化还原状态 ,抑制LPS导致的TNF α释放 。

巯基氧化剂对急性肝损伤时库普弗细胞功能的影响

目的 观察巯基氧化剂在急性肝损伤时对库普弗细胞功能的影响。方法 采用半乳糖胺 /脂多糖 (Galn/LPS)所致急性肝损伤模型 ,雄性昆明种小鼠于注射Galn/LPS(每只 4kg/g)前 1h ,腹腔注射巯基氧化剂马来酸二乙酯 (DEM)每周 5mmol/kg ,并分别于Galn/LPS注射后 6h ,测定血浆丙氨酸转氨酸 (ALT)活性、肿瘤坏死因子 (TNF) α水平、肝脏谷胱甘肽 (GSH)含量和库普弗细胞的吞噬功能。结果 DEM预处理可抑制Galn/LPS导致的血浆ALT活性、TNF α水平、库普弗细胞的吞噬功能升高。结论 巯基氧化剂DEM可通过改变肝脏GSH含量的变化 ,影响细胞氧化还原状态 ,抑制LPS导致的库普弗细胞活化 。

酱油曲霉产巯基氧化酶发酵培养基的优化

以提高酱油曲霉ATCC20235产巯基氧化酶(SOX)产量为目的,选择碳源、氮源、发酵培养基初始pH及8种金属离子分别进行单因素实验,在此基础上选取8个主要因素进行正交实验。结果表明,以碳源(蔗糖)30g/L、氮源(鱼粉蛋白胨)6.8 g/L,K2HPO4·3H2O 15 g/L,MnCl2·4H2O 2 mg/L,BaCl2 500μg/L,H3BO3 1 mg/L,起始pH 8.5的优化培养基在30℃下,220 r/min培养72 h,获得发酵液巯基氧化酶产量达240U/L,优化后的酶产量比在专利文献中记载的发酵培养基及培养条件下的产酶量提高了10倍。

巯基氧化酶在国产面包粉中应用的初探

借助粉质仪、质构仪等仪器设备研究了巯基氧化酶对国产优质小麦粉品质的改良效果以及对面包品质改良进行系统比较研究。确定该巯基氧化酶能显著改善面团流变学特性和面包品质,是一种安全、高效、经济、实用的面包改良剂原料。

巯基氧化剂对胰腺外分泌和谷胱甘肽的抑制作用

目的 谷胱甘肽 (GSH)耗竭在各型急性胰腺炎中均有报道 ,本研究探讨GSH耗竭对胰腺外分泌的影响以及其可能的机制。方法 利尿酸和二酰胺用于减低胰腺腺细胞内GSH ,并检测GSH对蛙皮素刺激的淀粉酶释放、胆囊收缩素受体亲和力以及细胞内Ca2 + 浓度的影响。结果 2种巯基氧化剂均可剂量依赖性减少胰腺腺细胞内GSH水平及蛙皮素 (1× 10 -10 mol/L)刺激的淀粉酶释放。二酰胺还减少蛋白巯基水平。利尿酸和二酰胺均可抑制蛙皮素 (1× 10 -9mol/L)诱导的胰腺腺细胞Ca2 + 运动。而两者对胆囊收缩素受体亲和力均无影响。结论 本研究提示GSH在胰腺腺细胞分泌过程中具有重要作用 ,并与急性胰腺炎过程中分泌阻滞的发生有关。蛙皮素诱导的Ca2 +

伯氏疟原虫静息巯基氧化酶的生物信息学分析和体外酶活检测

目的克隆、表达伯氏疟原虫静息巯基氧化酶(PbQSOX)基因,纯化重组Pb QSOX蛋白(rPbQSOX),并对其生物信息学特点和酶活性进行分析。方法分别采用BLAST、SMART、ClustalW对P QSOX蛋白的信号肽、蛋白结构域、活性位点、同源性进行分析;通过BLAST和MAGA5构建PbQSOX的系统进化树;应用SWISS-MODEL对PbQSOX蛋白的三级结构进行预测。BALB/c雌性小鼠经腹腔感染伯氏疟原虫(1×10^7/鼠),于感染后第4天提取疟原虫基因组DNA。PCR扩增PbQSOX基因,经测序正确后,将目的片段连接至原核表达载体pET30a(+),构建重组质粒pET30a(+)-PbQSOX。将鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,取菌液进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析;应用镍氨三乙酸琼脂糖柱纯化可溶性的rPbQSOX,并以三(2-羧乙基)膦(TCEP)或二硫苏糖醇(DTT)为酶反应底物分析rPbQSOX的酶活性。P QSOX大部分其他物种的同源基因。多序列蛋白比对与蛋白结构域分析结果显示,PbQSOX蛋白含1个信号肽,存在Trx1、ψErv和Erv/ALR结构域,但完全缺失了Trx2结构域。Pb QSOX蛋白含3个关键的CXXC活化基序(C为半胱氨酸Cys,X为任意氨基酸),即CPAC、CRNC和CNYC;采用MAGA5邻接法构建的系统进化树显示,PbQSOX与约氏疟原虫QSOX(PyQSOX)的亲缘关系最近;SWISS-MODEL同源建模法分析结果显示,用已知的布氏锥虫QSOX(TbQSOX)可预测PbQSOX蛋白的三级结构。PCR扩增PbQSOX基因,获得1486 bp目的条带,经测序为PbQSOX基因序列;pET30a(+)-PbQSOX质粒经NdeⅠ、HindⅢ双酶切与测序鉴定正确。SDS-PAGE和Western bloting分析结果显示,rPbQSOX重组蛋白主要以可溶形式表达,相对分子质量约59000。纯化后的rPbQSOX对TCEP的催化活性为0.84±0.18,DTT的催化活性为0.78±0.14(P<0.01)。结论PbQSOX蛋白为单Trx1结构域的伯氏疟原虫静息巯基氧化酶,构建、表达的rPbQSOX蛋白为可溶性蛋白,具有一定的静息巯基氧化酶催化活性。

重组小麦静息巯基氧化酶的表达、酶学特性及其对面包品质的影响

为发展新型面粉改良酶制剂,利用大肠杆菌Escherichia coli原核表达了小麦静息巯基氧化酶(Wheat quiescin sulfhydryl oxidase,wQSOX)。将合成的wqsox基因构建至pMAL-c5x载体,并在大肠杆菌中进行表达,优化蛋白表达条件后对重组蛋白进行分离纯化及融合标签切除,获得的重组wQSOX蛋白用于酶学性质探究以及面包品质改良。结果表明,合成的截短wqsox基因包含1359 bp,编码453个氨基酸,理论蛋白分子量51 kDa;构建的pMAL-c5x-wqsox重组质粒在E.coli Rosetta gamiB(DE3)中可溶表达了重组蛋白MBP-wQSOX,其最佳表达条件为:诱导温度25℃,诱导剂IPTG浓度0.3 mmol/L,诱导时间6 h;利用Xa因子蛋白酶切除了MBP融合标签,亲和层析纯化得到了wQSOX;wQSOX可催化DTT、GSH和Cys氧化,并伴随着H2O2的生成,其中对DTT表现出最高的底物特异性;酶学性质研究发现,wQSOX最适反应温度和pH分别为50℃和10.0,在高温和碱性环境条件下表现出较好的稳定性;每克面粉中添加1.1 U wQSOX能够显著(P<0.05)提高26.4%的面包比容,降低20.5%的面包芯硬度和24.8%的咀嚼性,表现出了较好的改良面包加工品质能力。研究结果对丰富新型面粉改良酶制剂种类以及推动wQSOX在焙烤行业的应用奠定了理论基础。

2-巯基吡啶-N-氧化物的合成方法及其用途

对 2 -巯基吡啶 - N-氧化物 (PTO)的 4类合成方法 (2 -卤吡啶氧化法、氢氧化钠催化吡啶氧化法、2 -羧酸吡啶 - 1-氧化物金属盐脱羧法、1-氧化吡啶同 Na H和 L i H等强碱作用的方法 )进行了综述 ;并总结了 PTO及其金属盐的广谱杀菌防霉活性及其在农业、医学、化学化工等领域的应用。

酸酐(Ⅰ)催化氧化合成晶体2-巯基吡啶-N-氧化物钠盐研究

研究了以蒽和顺丁烯二酸酐的加成物酸酐（I）为催化剂，催化过氧化氲氧化2-氯吡啶再与硫氢化钠反应合成2-巯基吡啶-N-氧化物钠盐的方法。在2．5h内将质量分数509，5的过氧化氢54g，在60-65℃下滴入57g2-氯吡啶、13g酸酐（I）和20mL乙酸的混合物中，继续反应3h，用水萃取生成的产物，与100g25％硫氢化钠水溶液反应得到晶体2-巯基吡啶-N-氧化物钠盐晶体，收率63.7％。另外还研究了反应温度、时间和催化剂套用次数对催化氧化反应的影响。

N-氧化-2-巯基吡啶锌盐的合成

以2-氯吡啶为起始原料,在冰醋酸介质中用质量分数为30%H2O2直接氧化,再与NaSH进行巯基化,然后同ZnSO4螯合成盐得到吡啶硫酮锌(ZPT)。同时还研究了溶剂的回收套用、不同催化剂对氧化反应的影响及不同pH值对巯基化反应的影响,优化条件下ZPT总收率可达78 0%。通过对溶剂的循环使用,减少了溶剂(冰醋酸)用量66 7%,反应收率也提高了10%左右,巯基化反应的pH值控制在9～10。产品经熔点、含量、pH值和IR的测试,达到了出口标准的要求。

血清巯基氧化酶-1、甲胎蛋白对原发性肝癌预警和诊断的队列研究

目的:探讨血清巯基氧化酶-1(QSOX-1)、甲胎蛋白(AFP)对原发性肝癌预警和诊断的价值。方法:从湖北省肝癌高危队列随访及初筛人群样本库中随机选取原发性肝癌患者(肝癌组)60例、肝硬化患者(肝硬化组)60例、慢性乙型肝炎患者(慢乙肝组)60例和正常人群(对照组)60例;另选择同期在武汉市新洲区人民医院住院治疗的60例其他恶性肿瘤患者作为其他肿瘤组,所有受试对象均于清晨空腹时抽取肘静脉血3 ml,采用化学发光法检测血清AFP含量,双抗体夹心法检测血清QSOX-1含量,对肝癌患者进行定期随访,通过绘制ROC曲线分析血清AFP、QSOX-1对原发性肝癌的预测价值。结果:血清AFP、QSOX-1在肝癌组、肝硬化组、慢乙肝组和对照组呈依次递减趋势,肝癌组血清AFP、QSOX-1显著高于肝硬化组、慢乙肝组、其他肿瘤组和对照组(P<0.05),对照组与其他肿瘤组血清QSOX-1比较差异无统计学意义(P>0.05)。有癌栓组血清AFP显著高于无癌栓组,低分化组血清AFP显著高于中分化组、高分化组,Ⅲ~Ⅳ期组血清AFP、QSOX-1显著高于Ⅰ~Ⅱ期组,肿瘤直径≥3 cm组血清AFP、QSOX-1显著高于肿瘤直径<3 cm组,各组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。AFP诊断原发性肝癌的AUC为0.777,当AFP截断值为267.4 mg·L^(-1)时,其敏感度为47.5%,特异度为76.8%;QSOX-1诊断原发性肝癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.878,当QSOX-1截断值为68.75 ng·L^(-1)时,其敏感度为74.3%,特异度为77.1%;AFP、QSOX-1联合诊断肝癌的敏感度为84.5%,特异度为78.8%。AFP表达阳性组中位生存期为19.8个月,AFP表达阴性组中位生存期为31.7个月,AFP表达阳性组中位生存期显著低于AFP表达阴性组(P<0.05);QSOX-1表达阳性组中位生存期为12.7个月,QSOX-1表达阴性组中位生存期为28.7个月,QSOX-1表达阳性组中位生存期显著低于QSOX-1表达阴性组(P<0.05)。结论:随着慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌的进展,血清AFP、QSOX-1逐渐升高,血清AFP、QSOX-1联合检测能够为原发性肝癌预警和早期诊断提供依据。

N-氧化-2-巯基吡啶锌盐的合成及晶体结构

以2-氯吡啶为原料,在冰醋酸介质中,用双氧水氧化生成N-氧化-2-氯吡啶.N-氧化-2-氯吡啶与NaSH反应进行巯基化,再经制备钠盐,最终与ZnSO4螯合得到N-氧化-2-巯基吡啶锌盐.通过熔点、核磁氢谱及X射线单晶衍射对产物进行了表征及晶体结构分析.分析结果表明,该晶体属于单斜晶系,P21/C空间群,a=0.840 10(17)nm,b=1.018 4(2)nm,c=1.373 6(3)nm,α=90.00°,β=97.23(3)°,γ=90.00°,Dx=1.810 g/cm3,Z=4,F(000)=640,μ=2.453 mm-1.最终偏差因子分别为R=0.032 5,wR=0.072 8.

适合于应用化学专业一个综合性实验方案的设计——2-巯基吡啶-N-氧化物的合成与应用

介绍了适合于应用化学专业的一个综合性实验方案的设计:2-巯基吡啶-N-氧化物及其衍生物的合成与应用。该实验具有实验内容的复合性、实验方法的多元性和实验结果未知性等特点,有利于激发学生学习的主动性和学习兴趣,有利于培养学生的综合实践和创新意识。

巯基吡啶氧化锌去屑洗发水稳定性的研究

以ZPT(巯基吡啶氧化锌)为去屑剂对洗发水进行稳定性的研究 ,筛选了几种稳定剂 ,对含ZPT洗发水的稳定性进行比较分析 。