巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用及基于网络药理学的机制研究

目的 探讨巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的骨形成作用及其机制。方法 以新生24 h Wistar大鼠所分离的成骨细胞为研究对象,用Aβ1-42寡聚体对成骨细胞进行损伤,并用巴戟天丸组方水提物进行药物干预。分别采用MTT法、碱性磷酸酶(ALP)活性检测、过氧化氢酶(CAT)活性检测、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测、谷胱甘肽(GSH)活性检测以及丙二醛(MDA)活性检测。采用蛋白质印迹法检测骨形成相关蛋白骨形态发生蛋白2(BMP2)、成骨特异性转录因子(RUNX-2)、骨保护蛋白(OPG)的表达水平;明确巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用后,采用网络药理学方法对潜在的作用机制进行预测。结果 巴戟天丸组方可显著促进Aβ损伤成骨细胞的增殖,提高ALP、SOD、GSH活性,抑制MDA活性,并促进骨形成相关蛋白BMP2、RUNX-2、OPG的表达。网络药理学分析显示,巴戟天丸组方发挥改善Aβ损伤成骨细胞的作用主要与AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路以及神经活性配体与受体的相互作用通路等有关。结论 明确巴戟天丸组方具有改善Aβ损伤成骨细胞的作用,并通过网络药理学方法探究其相关作用通路,为传统方剂巴戟天丸抗骨质疏松的临床应用提供借鉴。

巴戟天丸防治D-半乳糖损伤成骨细胞骨丢失的作用及机制研究

目的研究巴戟天丸防治D-半乳糖(D-gal)损伤成骨细胞骨丢失的作用及机制。方法采用新生24 h Wistar大鼠提取的原代成骨细胞,利用D-gal对细胞进行干预,并给予巴戟天丸提取物行药物治疗。分别采用MTT法和碱性磷酸酶试剂盒评价细胞的增殖和分化水平;采用DCFH-DA荧光探针对成骨细胞内活性氧(ROS)水平进行测定。采用Western blotting法对磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)、血红素氧合酶1(HO-1)、醌NADPH脱氢酶1(NQO1)等氧化相关蛋白的表达进行检测,并采用免疫荧光法测定细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)的核内表达水平。结果巴戟天丸能显著提高D-gal干预细胞的增殖水平和ALP活性,并显著降低细胞内ROS水平。巴戟天丸能够显著促进细胞AKT蛋白的磷酸化,提高HO-1、NQO1的表达水平,进而激活PI3K/AKT信号通路。此外,巴戟天丸提取物还可显著促进成骨细胞核内Nrf2的表达,激活Nrf2信号通路,促进骨形成。结论本研究首次明确了巴戟天丸可防治D-半乳糖损伤引起的成骨细胞骨丢失,其作用机制可能与调控PI3K/AKT和Nrf2信号通路关联的氧化应激有关。

巴戟天丸对去势大鼠骨组织RANK、NFAT2和V-ATPmRNA的影响

目的探讨巴戟天丸对去势大鼠骨组织细胞核因子κB受体活化因子(RANK),活化T细胞核因子信号通路(NFAT)2和空泡型V-ATP酶(V-ATPmRNA)表达的影响。方法48只SD大鼠随机分为假手术组(SHAM组),去势组(OVX组),去势+巴戟天丸治疗组(OVX+巴戟天丸组),每组16只。巴戟天丸灌胃干预9周或18周后检测各组大鼠骨密度和骨组织RANK、NFAT2和V-ATP的mRNA表达水平。结果OVX组BMD在第9周(P<0.05)和第18周均低于SHAM组(P<0.01)。干预18周后,OVX+巴戟天丸组骨密度(BMD)高于OVX组(P<0.05),且OVX+巴戟天丸组骨组织RANK、NFAT2和V-ATP mRNA表达也下降(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。结论巴戟天丸可改善去势大鼠骨密度且下调其骨组织中RANK、NFAT2和V-ATPmRNA的表达,从而达到抑制破骨细胞活性和延缓去势大鼠的骨吸收。

巴戟天丸治疗老年性骨质疏松脾肾阳虚证临床观察

目的研究巴戟天丸治疗老年性脾肾阳虚型骨质疏松症的临床疗效。方法选取2017年3月—2018年3月门诊收集61例老年性骨质疏松症患者,随机分配并去除脱落病例后,观察组32例,对照组29例,2组均给予碳酸钙D3片,在此基础上,对照组给予金匮肾气丸,观察组给予巴戟天丸方剂,2组均治疗12周。评估2组患者治疗前后的证候积分、临床疗效、骨密度、骨代谢和不良反应等指标。结果治疗后2组脾肾阳虚各证候积分及总评分均显著下降(P <0. 01),但观察组在腰背疼痛、畏寒肢冷及总评分下降更为明显(P <0. 01,P <0. 05);治疗后观察组总有效率为87. 50%,显著高于对照组65. 52%(P <0. 05); 2组治疗后腰椎L1-4、股骨颈骨密度、骨钙素(BGP)、血清Ⅰ型原胶原N-端前肽(P1NP)无统计学差异(P> 0. 05);观察组血清I型胶原交联C-末端肽(S-CTX)较治疗前下降(P <0. 05); 2组患者的不良反应发生率无统计学差异(P> 0. 05)。结论巴戟天丸可以显著改善老年性骨质疏松脾肾阳虚证的临床症状,可降低骨吸收标志物S-CTX,其作用机制可能与抑制破骨细胞活性有关。