高脂高糖饮食对巴马小型猪肠道菌群的影响

目的探讨高脂高糖饮食8个月对巴马小型猪血脂和粪便中肠道菌群的影响。方法将10头巴马小型猪随机分为对照组(n=3)和实验组(n=7),对照组小型猪正常喂养,实验组给予高脂高糖饮食。各组动物分别于实验前及实验8个月后进行空腹采血,检测三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇等血脂指标。实验8个月后无菌采集各动物粪便,采用16S rRNA测序技术检测肠道菌群组成。结果高脂高糖饮食8个月后,实验组粪便中肠道菌群物种数量未见明显改变,厚壁菌门相对丰度增加,拟杆菌门和变形菌门丰度降低(P<0.05)。实验组小型猪体质量、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平均显著高于对照组(P<0.05)。结论高脂高糖饮食可以增加巴马小型猪粪便中厚壁菌门相对丰度,降低拟杆菌门和变形菌门相对丰度,提示这些肠道菌群的失调可能参与调节了宿主高脂血症的发生。

巴马小型猪ABCD 4基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析

【目的】获取巴马小型猪ATP结合盒D亚科成员4(ATP binding cassette subfamily D member 4,ABCD4)基因CDS区序列并预测其编码蛋白的结构功能,构建真核表达载体,了解ABCD 4基因在巴马小型猪中的组织分布情况,为探究ABCD 4基因对巴马小型猪生长发育的作用提供理论和分子基础。【方法】以巴马小型猪皮下脂肪组织cDNA为模板,利用RT-PCR对ABCD 4基因CDS区进行扩增、测序,利用生物信息学分析软件对巴马小型猪ABCD 4基因CDS区序列与不同物种比对,构建系统进化树,并对ABCD4蛋白的理化性质、跨膜结构等进行预测。将获得的目的基因连接至pEGFP-N1载体并转染到IPEC-J2细胞,检测转染后荧光和基因表达量变化。通过实时荧光定量PCR检测巴马小型猪各组织ABCD 4基因表达量。【结果】巴马小型猪ABCD 4基因CDS区全长1818 bp,编码605个氨基酸,与Ensembl上猪参考序列(ENSSSCT00000037529)的相似性为99.7%,存在6处碱基突变和1处碱基插入。相似性比对发现,猪和人、原鸡、倭黑猩猩、马、双峰驼、牛ABCD4序列的相似性分别为87.6%、72.7%、87.6%、91.7%、88.1%和88.6%。系统进化树显示,猪与马亲缘关系最近,与原鸡亲缘关系最远。生物信息学分析显示,ABCD4蛋白分子质量为68.66 ku,理论等电点(pI)为7.13,存在5个跨膜螺旋结构,无信号肽,属于跨膜蛋白;存在58个磷酸化位点和10个N-糖基化位点;二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链占比分别为50.91%、3.64%、28.43%和17.02%。细胞转染试验结果显示,转染30 h后重组质粒组和空载体对照组均有荧光出现,且转染重组质粒的细胞内ABCD 4基因表达量极显著高于空载体对照组(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,ABCD 4基因在巴马小型猪皮下脂肪中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05);在心脏中表达量最低。【结论】本试验成功扩增获得巴马小型猪ABCD 4基因CDS区序列,ABCD4蛋白是一种疏水性跨膜蛋白,主要在巴马小型猪皮下脂肪中表达。本试验结果为探究ABCD 4基因对猪背膘厚的影响提供了分子依据。

一种微创制备巴马小型猪急性心肌梗塞模型的技术及评价方法

目的采用微创冠状动脉内球囊封堵法制备巴马小型猪急性心肌梗塞(acute myocardial infarction,AMI)模型,并采用血液学、功能学与病理学方法综合评价模型建立情况。方法巴马小型猪12只采集基线数据后,全麻下行股动脉穿刺,利用经皮冠状动脉内球囊封堵法阻断左前降支(第一对角支下2~5 mm)血流90 min,术中行动态心电图监测,并于术后定期采血测定心肌损伤标志物,同时行超声心动图检查评估心功能,术后第28天取材后通过大体观察、Masson染色及天狼星红染色评估心肌梗塞面积与程度。结果12只小型猪中有10只完成封堵,另2只因术中频发恶性心律失常未达到封堵时间。在完成封堵的动物中有7只存活至28 d,其余3只在实验终点前意外死亡。在造模成功个体中观察到封堵后心电图ST-T呈动态变化,术后4 h心肌损伤标志物较术前升高最明显,差异有统计学意义(P<0.01)。术后第7天超声心动图即示左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒张末期容积(LVEDV)与左室收缩末期容积(LVESV)较术前相比有显著性改变(P<0.05)。心脏大体观察示梗塞心肌呈灰白色,主要位于左前壁;病理染色示梗塞区累及心室壁全层。结论本研究可成功建立巴马小型猪急性心肌梗塞模型,并对模型有效性做出综合评价。

舒泰与赛拉嗪联合使用对巴马小型猪的麻醉效果及影响

试验旨在探究巴马小型猪联合使用不同剂量的舒泰和赛拉嗪的麻醉效果以及对生理指标的影响。对6只巴马小型猪间隔使用舒泰0.75 mg/kg+赛拉嗪6 mg/kg (A组)、舒泰0.75 mg/kg+赛拉嗪12 mg/kg (B组)、舒泰1.00 mg/kg+赛拉嗪8 mg/kg (C组)进行麻醉,不同剂量组麻醉间隔5 d以上,观察麻醉效果,并对肛温、呼吸频率、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MBP)、心电图(ECG)以及血常规和血液生化指标进行监测。结果显示,各组麻醉成功率均为100%,且麻醉状态良好;A组、B组和C组的麻醉诱导时间分别为5.17、4.17、4.67 min,差异不显著(P>0.05);麻醉维持时间分别为49.33、93.50、79.17 min,A组显著低于B组和C组(P<0.05);麻醉恢复时间分别为2.17、2.67、4.67 min,C组显著高于A组和B组(P<0.05);麻醉后各组肛温、呼吸频率、SBP、DBP、MBP在整体上呈降低趋势,且B组和C组的变化更为明显;麻醉后各组Q-T间期首先出现延长,之后逐渐波及QRS波群和P-R间期;麻醉后约24 h,各组猪血常规指标未发生明显改变,而麻醉后A组猪血清尿素氮(BUN)含量以及B组与C组猪血清谷草转氨酶(AST)活性、BUN含量显著高于麻醉前(P<0.05)。研究表明,各剂量组巴马小型猪均快速进入安全且稳定的麻醉状态,且通过调整麻醉剂用量可实现对动物麻醉时长和生理指标影响程度的控制。

康派特组织粘合胶粘合巴马小型猪皮肤切口的有效性

目的探讨康派特组织粘合胶粘合巴马小型猪皮肤切口的有效性,并与Histoacryl医用组织胶水进行比较。方法选用8只巴马小型猪,按性别和体重随机分为A、B两组,每组4只,雌雄各半。A组术后1周剖检,B组术后4周剖检。采用同体左右侧自身对比法,先于实验动物背部两侧皮肤制作切口模型,然后分别采用康派特组织粘合胶和Histoacryl医用组织胶水粘合切口。观察实验动物的临床症状、体重、摄食量、切口局部症状,并对切口部位组织进行组织病理学检查。结果术后实验动物的临床症状、体重、摄食量均未见明显异常。涂胶当天两侧切口局部可见轻度红斑,刺激强度为轻度,术后第1天开始肉眼已观察不到两侧皮肤刺激,刺激强度为极轻微。组织病理学检查结果显示,术后1周实验动物涂胶部位均可见极轻度或轻度的炎性细胞浸润、出血、轻度至中度的纤维组织增生等组织病理学改变。术后4周实验动物手术部位可见不同程度组织修复,未见明显皮肤刺激反应。结论该实验条件下,康派特组织粘合胶粘合巴马小型猪皮肤切口安全有效,且与Histoacryl医用组织胶水比较未见明显差异。

广西巴马小型猪21个微卫星座位的DNA多态性分析

利用 2 1个微卫星座位统计了广西巴马小型猪品系内的等位基因组成 ,计算了各位点的基因纯合率和多态性信息含量 (PIC)及平均杂合度。结果 ,2 1个位点的平均基因纯合率为 5 5 .5 % ,平均PIC为 0 .3 5 0 1,平均杂合度为 0 .3 881。结果提示 ,广西巴马小型猪具有一定的遗传稳定性 ,已成为一个稳定的遗传群体 。

跑步运动联合高脂单笼喂饲建立巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型

目的:通过跑步运动联合高脂单笼喂饲建立巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型。方法:选取6月龄雄性去势普通级小型猪47只,以随机数字表法随机分为对照组和模型组,对照组5只,模型组42只。模型组施以每日跑步训练联合高脂喂饲干预,对照组予普通饲料喂食,共喂饲24周。对巴马小型猪等待喂食行为、皮毛光泽、口色、粪便性状、划痕、生命体征、形体指标、血脂和行为学指标进行观测。结果:跑步运动联合高脂喂饲可使巴马小型猪出现高脂血症脾虚痰浊证表现:(1)模型组血清TC(14.89±5.56)mmol/L高于对照组(3.88±1.89)mmol/L,TG(1.00±0.36)mmol/L高于对照组(0.35±0.09)mmol/L,HDL-C(1.97±0.61)mmol/L高于对照组(0.77±0.17)mmol/L,LDL-C(8.00±3.17)mmol/L高于对照组(1.09±0.25)mmol/L,ox-LDL(8.84±0.86)μg/L高于对照组(8.04±0.25)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.01)。(2)模型组更趋于倦怠、懒惰,表现为咬物品、摆尾频次、闻物体、站立、走持续时间等低于对照组,闻同伴、卧、坐持续时间高于对照组(P<0.01)。(3)模型组等待喂食行为、粪便性状、划痕、口色评分大于对照组(P<0.05)。(4)模型组体质量、腹围、臀宽大于对照组(P<0.01)。(5)模型组心率大于对照组,呼吸频率小于对照组(P<0.01)。结论:跑步运动联合高脂单笼喂饲能成功建立巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型,为巴马小型猪进一步应用于中医药研究中提供有益的参考。

灯盏花素对脑死亡巴马小型猪心脏结构、功能及蛋白激酶C表达的影响

目的探讨灯盏花素对脑死亡巴马小型猪心脏结构、功能及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)表达的影响。方法巴马小型猪15只,随机分为脑死亡组、灯盏花素组及对照组。应用缓慢间断颅内加压法建立脑死亡模型。分别于脑死亡后6、12和24 h取血清及心肌组织进行研究。结果①脑死亡24 h灯盏花素组心肌损伤明显轻于脑死亡组;②脑死亡后各时间点灯盏花素组血清肌钙蛋白T(cTnT)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均较脑死亡组低;③脑死亡24 h灯盏花素组心肌蛋白激酶C表达水平均显著低于脑死亡组。结论灯盏花素可通过抑制蛋白激酶C,减少炎症因子释放,减轻脑死亡巴马小型猪的心脏损伤。

贵州小型香猪和广西巴马小型猪微卫星位点的遗传学分析

利用35个微卫星位点对贵州小型香猪、广西巴马小型猪的封闭群进行了遗传检测;计算出两个小型猪品系个体样本微卫星位点的平均杂合度、多态信息含量（PIC）、有效等位基因数及品系间的遗传距离。结果表明两个品系的小型猪平均杂合度和PIC均较低;有效等位基因数与实测等位基因数较接近,也表明两品系均有稳定的遗传;两者的遗传距离表明贵州小型香猪和广西巴马小型猪亲缘关系较近,同时表明两者已分别成为两个独立的封闭群动物。

我国巴马小型猪SLA-2基因克隆及分子特征

为研究我国巴马小型猪SLA-Ⅰ分子特征,设计引物克隆了SLA-Ⅰ类分子SLA-2基因（SLA-2bm）,并通过分子生物学软件分析其分子特征。经克隆及序列测定分析,SLA-2bm为1119bp,其中3-1097为ORF区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示SLA-2bm与其它SLA-2、SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为88.4%-96.4%、88.3%-90.5%和87.7%-92.7%。系统进化树显示SLA-2bm与其它SLA-2等位基因在遗传关系上相对独立,进化程度较低;各功能区分析,SLA-2bm与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2bm属于一个新的等位基因,巴马小型猪是保留原始基因特征的品种。

广西巴马小型猪克隆胚的构建及胚胎移植

通过胚胎移植验证构建的广西巴马小型猪克隆胚是否可以发育到期。利用刺入式手术胚胎移植法,将0.5～1.5日龄巴马小型猪克隆胚移植到2头巴马小型猪和2头陆川猪的输卵管壶腹部。其中2头巴马小型猪和1头陆川猪返情,另外一头陆川猪于2007年10月13日产下1头克隆雄性巴马小型猪。说明巴马小型猪克隆胚能够在受体猪体内发育到期并产仔。

巴马小型猪早期生长曲线拟合研究

对随机选择的32头(4窝)巴马小型猪0～25周期间每周平均体重进行测定,并用Logistic和Gompatz 2种模型对其进行拟合。结果表明:Logistic模型(R^2=0.997)和Gompatz模型(R^2=0.999)均能够对巴马小型猪的生长曲线进行良好的拟合,尤以Gompatz模型生长曲线预测的结果更接近实际情况。Gompatz模型预测的巴马小型猪早期生长速度的拐点周龄和拐点体重分别为18周和14.388 kg。

广西巴马小型猪卵泡抑素(Follistatin)cDNA的克隆和序列分析

从广西巴马小型猪的卵巢中提取总RNA,并以其为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),在合成的特异性引物引导下,扩增得到巴马小型猪卵泡抑素(Follistatin)cDNA的全序列,长度为1035bp。该扩增片段经纯化后,连接到pMD18-T载体上扩增。经序列分析结果表明,本研究中克隆的猪卵泡抑素cDNA序列与GeneBank中已报道的家猪卵泡抑素同源性高达99.4%,与奶牛、家鼠、挪威鼠和马等其他物种的卵泡抑素cDNA序列间同源性也大于89%。

巴马小型猪与贵州小型香猪遗传多样性的RAPD分析

应用经过筛选的31条引物对巴马小型猪和贵州小型香猪的基因组DNA进行RAPD扩增,分析二品系实验用小型猪的遗传多样性。两品系实验用小型猪品系内及品系间多态性位点的百分数分别为30.9%和25.7%,品系间及品系内的平均遗传距离分别为0.120、0.072和0.067。结果表明,两品系实验用小型猪品系间及品系内遗传多样性贫乏,遗传变异较小。

广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2的多态性研究

为探讨广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2的多态性,以其耳组织为试验材料,经PCR扩增获得广西巴马小型猪SLA-DQB外显子2片段,片段大小为273 bp,含有1个RsaI酶切位点和5个HaeIII酶切位点,基因型分别为27bp/246 bp和84 bp/83 bp/7 bp/16 bp/29 bp/54 bp。采用PCR-RFLP对30头广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2的PCR扩增产物进行多态性分析,发现广西巴马小型猪封闭群内S,LA-DQB基因外显子2无多态性位点;而克隆测序及同源性比较分析表明,广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2序列与普通猪(Sus Scrofa)、人类(Homo sapiens)的同源性分别为94.1%、79.1%。

巴马小型猪T2DM模型胰岛素抵抗及瘦素、抵抗素水平的变化

目的探讨巴马小型猪2型糖尿病(T2DM)模型胰岛素抵抗(IR)及瘦素、抵抗素水平的变化。方法选用健康雄性巴马小型猪10只,随机分为两组各5只。对照组喂养普通饲料;模型组喂养高脂高糖饲料,共喂养10个月。11个月初模型组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)100 mg/kg,1周后重复1次;对照组腹腔注射等剂量柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液,12个月末试验结束。检测两组空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及血清瘦素、抵抗素水平,同时采用HOMA模型公式计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果与对照组比较,高脂高糖饲料喂养10个月模型组小型猪体质量、FPG、FINS及HOMA-IR升高(P均<0.01);与对照组相比,模型组STZ给药后(12个月末试验结束时)FPG进一步升高,FINS水平明显下降(P均<0.01);与对照组比较,模型组血清瘦素、抵抗素水平升高(P均<0.05),且HOMA-IR与瘦素、抵抗素呈正相关(r分别为0.893、0.933,P均<0.05)。结论 T2DM小型猪血清瘦素、抵抗素水平升高,与HOMA-IR密切相关。

脾虚痰浊证巴马小型猪心肌糖代谢相关分子的变化特点

目的:探讨脾虚痰浊证巴马小型猪心肌组织葡萄糖代谢相关分子的变化特点。方法:普通级雄性巴马小型猪10只随机分为正常组及脾虚痰浊组,每组5头。采用疲劳过度联合高脂单笼饲养建立小型猪脾虚痰浊证模型。采用实时荧光定量PCR法检测心肌组织葡萄糖转运体4(glucose transporter 4,GLUT4)、磷酸果糖激酶1(Phosphofructokinase-1,PFK-1)、丙酮酸激酶(Pyruvate kinase2,PKM2)和己糖激酶(Hexokinase,HK)mRNA表达,应用Western blotting法检测心肌组织GLUT4、PFK1、PKM2和HK蛋白表达水平。结果:与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织GLUT4、PKM2、PFK1、HK mRNA表达水平显著下降(P<0.01),GLUT4、PKM2蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。PFK1、HK蛋白表达水显著下降P<0.01)。结论:脾虚痰浊证小型猪心肌存在葡萄糖代谢异常,与葡萄糖转运及代谢相关分子表达呈下降趋势。

广西巴马小型猪和贵州小型香猪的DNA指纹分析

目的 应用DNA指纹分析的方法研究广西巴马小型猪和贵州小型猪的遗传背景。方法 采用ECL核酸直接标记和检测系统 ,以HRP标记JL 0 2多位点小卫星探针 ,对广西巴马小型猪和贵州小型猪基因组DNA的HinfⅠ或HaeⅢ酶切DNA片段进行Southern杂交 ,以化学发光法进行检测 ,获得了清晰可辨的、具有高度多态性的DNA指纹图。结果 广西巴马小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数为 11 7和 2 4 5 ;贵州小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数则为 15 8和 17 6。另外 ,广西巴马小型猪HinfⅠ和HaeⅢ酶切产生的不同个体DNA指纹的相似系数分别为 0 5 4± 0 0 7和 0 5 5± 0 0 8;而贵州小型猪则分别为 0 5 3± 0 0 4和 0 5 3± 0 0 7。结论 该探针适用于这两种猪的DNA指纹分析 ,不同酶切产生的DNA指纹图带数不同 ,但不同个体间相似系数的分析结果一致。同时说明这两种猪具有相当程度的种质均质性 。

巴马小型猪在辽宁地区的适应性观察及血液生理生化指标检测

从广西巴马瑶族自治县引进巴马小型猪20头,进行饲养繁殖,观察其在东北环境下的适应性及血液生理生化指标的变化。经过2年的观察与检验,证实引进的巴马小型猪适应性良好,繁殖性能正常,性成熟期为2~3月龄,妊娠期为114~120d,初产仔猪数为3~7头,经产仔猪数为5~10头,产仔猪数与母猪体重呈正相关(R2=0.96)。血液生理生化指标检测结果显示,与巴马原种厂提供的数据相比,白细胞数(WBC)、血红蛋白(HGB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖定量试验(GLU)、总胆固醇(T-Ch)、甘油三酯(TG)、胆碱酯酶(CHS)、Na、Cl、淀粉酶(AMS)和二氧化碳结合力(CO2CP)均有显著差异(P【0.05),其余指标差异均不显著(P】0.05)。结果表明由辽宁省饲养并繁殖的巴马小型猪的血液生理生化指标与人类具有一定的相似性,可以为辽宁地区试验应用巴马小型猪提供参考依据。

脾虚痰浊巴马小型猪冠脉细胞凋亡与细胞生长和增殖相关基因差异性表达研究

目的:基于PCR array技术观察脾虚痰浊巴马小型猪冠脉组织细胞凋亡和生长与增殖相关基因差异性表达,探讨AS发生的可能机制。方法:在建立脾虚痰浊巴马小型猪模型基础上,应用PCR array技术检测巴马小型猪冠脉细胞增殖与凋亡的相关基因的表达差异性表达。结果:PCR array显示巴马小型猪冠脉细胞中与细胞凋亡相关基因BAX、BCL2、TGFβ1、TNF、BCL2L1及与细胞生长和增殖相关的基因CSF-2、CCL2、MMP1、MMP3、FGF2均发生差异性变化。结论:脾虚痰浊巴马小型猪冠脉细胞增殖与凋亡相关基因的变化可能是脾虚痰浊冠状动脉硬化发生的病理机制。