基于DNA条形码SNP鉴别东方泽泻、泽泻及市售泽泻药材

目的建立基于单核苷酸多态性(SNP)分子标记鉴定泽泻药材的方法。方法采用改良的试剂盒法提取药材基因组DNA,PCR扩增ITS2序列,通过分析比对东方泽泻和泽泻ITS2序列,确定SNP位点,并对商品泽泻药材进行鉴定分析。结果东方泽泻和泽泻ITS2序列长度为311 bp,二者均无种内变异,但种间在165 bp有稳定的A-T变异,NJ树鉴定结果亦表明二者可以准确区分;基于SNP分子条形码鉴定和NJ树鉴定市售泽泻药材,仅有7%药材样本为东方泽泻,93%的市售药材样本均非《中国药典》规定基原。结论基于SNP标记能准确鉴定中药材泽泻,为保护泽泻种质资源和指导药材生产种植提供可靠依据。

基于ITS2序列鉴定市售地骨皮药材及其混伪品

目的基于中药材DNA条形码分子鉴定法鉴定市售地骨皮药材及其混伪品。方法本实验对象共计137份，依照中药材DNA条形码分子鉴定法标准操作流程（DNAbarcodingSOP）获取各样本ITS2序列，构建地骨皮药材及其混伪品DNA条形码数据库，对市售地骨皮药材及饮片进行鉴定。结果地骨皮药材ITS2序列长度为212—230bp，能够明显区分地骨皮药材及其混伪品。50％市售药材及饮片能够获得可用于分析的条形码序列，应用地骨皮药材及其混伪品DNA条形码数据库鉴定结果显示所得序列均为枸杞。结论ITS2序列能够作为地骨皮药材及其混伪品鉴定的DNA条形码，本实验所建立的地骨皮药材及其混伪品DNA条形码数据库能够用于市售地骨皮药材及饮片的鉴定。

基于ITS2序列的市售木通药材及其混伪品的分子鉴定12

目的建立基于核糖体内部转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列的木通药材DNA条形码鉴定方法,对市售木通药材进行物种分析。方法收集河北、安徽、贵州等地的样品总计45份,其中木通药材及其混伪品的原植物样品18份,市售木通药材样品27份。通过提取DNA、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增、双向测序获得ITS2序列,基于邻接(neighbor joining,NJ)系统发育树和单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点进行物种鉴定分析。结果基于木通药材及其混伪品原植物ITS2序列构建的NJ树分析结果表明,木通药材正品及其混伪品在NJ树上聚为独立的分支,木通药材正品及其混伪品在NJ树上可明确区分;基于NJ树对27份市售木通药材的物种分析表明,市售样品中仅有4份为正品木通,2份为小木通,21份为粗齿铁线莲,正品率为14.8%。结论基于ITS2序列的DNA条形码技术可以准确区分中药材木通及其混伪品,市售木通药材物种较混乱。