布氏菌病双价DNA疫苗免疫保护效果的研究

【目的】构建布氏杆菌pcDNA3.1(+)-L7/L12-BCSP31双价DNA疫苗,观察其免疫保护效果。【方法】分别克隆L7/L12、BCSP31基因,构建pcDNA3.1(+)-L7/L12-BCSP31双价DNA疫苗。转染COS-7细胞,免疫细胞化学检测目的蛋白的表达。DNA疫苗免疫Balb/c小鼠,观察体液免疫和细胞免疫效果。布氏杆菌强毒株腹腔攻毒,观察双价DNA疫苗的免疫保护效果。【结果】构建的pcDNA3.1(+)-L7/L12-BCSP31双价DNA疫苗在COS-7细胞有目的蛋白的表达。双价DNA疫苗免疫小鼠,ELISA检测双价DNA疫苗产生了高水平的特异性IgG抗体,且抗体亚型以IgG2a为主。FCM检测双价DNA疫苗的CD4+/CD8+比值明显下降。ELISPOT检测到疫苗免疫后小鼠分泌IFN-γ的T细胞增多。攻毒实验证明双价DNA疫苗能够产生有效的保护效果;部分数据及攻毒结果表明双价DNA疫苗的效果优于单价。【结论】研制的pcDNA3.1(+)-L7/L12-BCSP31双价DNA疫苗免疫Balb/c小鼠能产生有效的免疫保护效果,且双价DNA疫苗效果优于单价。