布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)免疫绵羊试验

为掌握布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)免疫后的绵羊抗体水平、消长情况和不良反应发生情况,选择育肥羊和怀孕母羊各100只,分别用皮下注射免疫和点眼免疫法,开展了3个月的跟踪观察和定期检测。结果表明:布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)对育肥羊注射免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达100.0%,90 d降至22.7%;点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达85.4%,90 d日降至0;个别3月龄以下育肥羊对注射免疫和点眼免疫均会发生一定程度不良反应,甚至死亡。活疫苗(M5-90株)对怀孕母羊皮下注射免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达100%,90 d降至14%;点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达95.9%,90 d降至6.4%;注射免疫和点眼免疫均能造成一定比例的母羊流产和其他不良反应。因此,布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)不宜用于3月龄以下羔羊和怀孕母羊的免疫。

布鲁菌病活疫苗M5株在羊的免疫中面临的问题及对策

近年来,随着甘州区牛羊产业的快速发展,活畜调运频繁,布鲁菌病在局部乡镇出现明显反弹,威胁到当地养殖业的安全和人民身体的健康,甘州区畜牧兽医工作站在2015年的该病抽样检测中,羊的发病率为2.2%,已超过了国家的控制标准。为此,按照甘肃省防制重大动物疫病指挥部的要求,2016年春季在我区的平山湖和靖安两个乡进行布鲁菌病活疫苗M5株的免疫试点,现将我区在羊布鲁菌病活疫苗M5株免疫中的一些做法报道如下,

S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗对山羊免疫效果比较试验

通过对36只不同日龄、不同性别的健康山羊（含妊娠母羊6只）随机平均分组，分别口服S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗后，在7d、14d、21d、42d、90d对血液中布氏杆菌抗体进行检测，对S2、M5诱导的抗体消长动态进行分析及疫苗安全性评价，最终研究确定出S2可适用于不同日龄、不同性别山羊广泛使用，也适用于妊娠期间山羊的免疫，能有效预防布病的发生，减少由此导致的经济损失；M5可引起妊娠母羊免疫副反应及严重的流产症状。

布氏菌病活疫苗（Rev.1株）冻干保护剂工艺的研究

布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺借鉴、采纳布氏菌病活疫苗(S2株)成熟的冻干工艺及菌液的配比,对冻干保护剂的选择进行了优化。我们选择蔗糖明胶保护剂和蔗糖脱脂乳保护剂,保护剂与布鲁氏菌Rev.1株菌液以16的比例混合,冻干后测定其活菌含量。结果显示,3批使用蔗糖脱脂乳保护剂的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12×10^9CFUmL、12.44×10^9CFUmL、12.65×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶再加入终浓度约1%硫脲的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.34×10^9CFUmL、12.62×10^9CFUmL、12.91×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.22×10^9CFUmL、12.64×10^9CFUmL、12.8×10^9CFUmL。3种冻干保护剂对冻干疫苗的活菌含量影响无明显差异,但使用蔗糖明胶保护剂制备冻干疫苗时加入适量硫脲可适当增加冻干疫苗的耐热性,因此我们选择10%明胶、20%蔗糖冻干保护剂与菌液以1∶6配比比例混合,再加入终浓度约为1%的硫脲作为布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺。

羊同时注射布病M5菌苗与口蹄疫疫苗副反应观察

在甘肃河西3市6个乡镇选择90日龄以上的羊198 080只,其中怀孕羊84 160只,单独注射布氏菌病活疫苗(M5株)64 350只,同时注射布氏菌病活疫苗(M5株)和牛羊口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗133 730只,结果 50 d内死亡428只,流产4 460只。表明布病M5疫苗毒株毒力强,不适合用于免疫防控,更不能与口蹄疫疫苗同时注射。

原核表达山羊布氏杆菌M5-90VirB12蛋白及其在检测中的初步应用

为建立山羊布氏杆菌(Brucellar melitensis)血清学检测方法,本实验克隆了B.melitensis M5-90疫苗株的virB12基因,并表达了相应蛋白。经SDS-PAGE和western blot鉴定,重组VirB12蛋白分质量约为25ku,具有较好的抗原性。以纯化的VirB12重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,并检测90份B.melitensis临床血清样品,检测结果与试剂盒及虎红平板凝集试验的检测结果符合率均为91.7%,结果表明,VirB12重组蛋白作为包被抗原可用于B.melitensis感染的血清检测,为进一步建立B.melitensis M5-90virB12缺失标记疫苗的鉴别检测提供方法。