布雷菲尔德菌素A高产菌的选育和发酵条件优化

研究了选育布雷菲尔德菌素A(BFA)高产菌和优化发酵条件。采用紫外线照射(UV)、亚硝基胍(NTG)和UV+NTG复合诱变处理BFA产生菌Eupenicilum sp.E-0506筛选突变株后进一步发酵选育;采用单因素筛选结合正交试验考察摇瓶装液量、转速等因素的影响。试验所确定的BFA产生菌的孢子诱变适宜条件为:孢子悬液在电磁搅拌下经紫外照射处理60 s后,以2.0 mg/mL NTG处理30 min;获得了一株高产BFA的诱变菌株E-UN88,其产量较出发菌株提高10.36倍。并确定了发酵优化参数:500 mL三角瓶内装100 mL培养液,摇床转速为250 r/min,接种量为5%,发酵温度为26℃,种子培养时间43 h,发酵时间120 h。BFA高产菌及其发酵优化参数为工业化发酵生产BFA奠定基础。

布雷菲尔德菌素A经内质网应激途径诱导的肝癌细胞HepG2发生p53依赖性死亡

目的探讨布雷菲尔德菌素A(BFA)作为肝脏肿瘤治疗药物的作用机制和可能的临床应用价值。方法采用细胞毒性试验(MTT法)观察BFA对肝癌细胞Hep G2的细胞毒性作用,采用定量荧光PCR法、蛋白杂交法观察BFA对Hep G2细胞有关囊泡转运相关、内质网应激相关基因和蛋白表达的影响。结果用不同浓度的BFA处理肝癌细胞24 h和48 h后,可引起肝癌细胞死亡,并呈现剂量依赖关系。(0.1~5)μg/m L BFA处理组细胞存活率与阴性对照组比较,差异具有统计学意义(24 h和48 h的H值分别为45.7和45.9,P<0.01)。2.5μg/m L BFA可引起HepG2细胞内COPI、Arf1、COPII和Sar1b的基因表达显著升高(24 h实验组的F值分别为72.5、41.4、107和134,P<0.05;48 h实验组的F值分别为69.2、51.4、49.8和170,P<0.05)。2.5μg/m L BFA处理24 h、48 h后可引起HepG2细胞内BiP(GRP78)和calnexin基因表达水平明显升高,其中BiP(GRP78)在24 h和48 h的基因表达分别为阴性对照组的46倍和36倍,calnexin在24 h和48 h的基因表达分别为对照组的10倍和5倍。2.5μg/m L BFA处理24 h、48 h后可引起HepG2细胞内Bi P(GRP78)蛋白表达明显升高,约为对照组的2倍,calnexin的表达明显减少,几乎无法检测到。2.5μg/m L BFA引起HepG2细胞内p-AMPKα(Thr 172)和p-p53蛋白表达明显增加。结论BFA可通过内质网应激途径引起肝癌细胞发生p53依赖的死亡,对肝癌细胞有一定的杀伤作用。

细胞粘附分子ELAM-1的抑制剂——布雷菲德氏真青霉产生的布雷菲尔德菌素A

在筛选真菌活性代谢产物过程中，从分离自四川省蜀南竹海的土壤真菌ＳＩＡ－Ｆ４０３的发酵液中，分离出能抑制粘附分子ＥＬＡＭ－１的活性代谢产物ＳＩＡ－Ｃ４０３，其理化性质和波谱分析表明为已知的抗肿瘤抗生素布雷菲尔德菌素Ａ。菌种经鉴定被命名为布雷菲德氏真青霉Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｉｕｍｂｒｅｆｅｌｄｉａｎｕｍ（Ｂ．Ｄｏｄｇｅ）Ｓｔｏｌｋ＆Ｓｃｏｔ。这是首次报道布雷菲尔德菌素Ａ具有抑制粘附分子ＥＬＡＭ－１的新活性。

瓶花木内生真菌C22发酵液中生物活性成分的分离、纯化与鉴定

目的分离、鉴定红树林植物瓶花木内生真菌C22的活性次生代谢产物。方法利用硅胶柱层析等方法进行分离纯化;利用光谱分析进行结构解析。结果内生真菌C22的活性次生代谢产物为一大环内酯类抗生素布雷菲尔德菌素A和一倍半萜类抗生素木霉菌醇。结论以上两种抗生素对肺癌细胞SMMC-7721、胃癌细胞SGC-7901具有较强的肿瘤细胞毒活性,并且在内生真菌C22中含量较大,因此,红树林植物瓶花木内生真菌菌株C22具有广阔的应用价值和开发前景。

Eupenicillum sp.UN88胞内活性物质的分离纯化与结构鉴定

在筛选微生物来源代谢产物的过程中,分离到一株抗真菌活性强的正青霉Eupenicillum sp.UN88,采用溶媒浸提与结晶进行分离和纯化Eupenicillum sp.UN88的发酵产物,得到一个大环内酯类化合物UN88A。经理化性质研究和UV、MS、IR、1HNRM、13CNMR及DEPT及HSBC和HMQC等波谱分析,确定由Eupenicillum sp.UN88产生具有活性的次级代谢产物UN88A的化学结构与布雷菲尔德菌素A相同。