布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)免疫绵羊试验

为掌握布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)免疫后的绵羊抗体水平、消长情况和不良反应发生情况,选择育肥羊和怀孕母羊各100只,分别用皮下注射免疫和点眼免疫法,开展了3个月的跟踪观察和定期检测。结果表明:布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)对育肥羊注射免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达100.0%,90 d降至22.7%;点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达85.4%,90 d日降至0;个别3月龄以下育肥羊对注射免疫和点眼免疫均会发生一定程度不良反应,甚至死亡。活疫苗(M5-90株)对怀孕母羊皮下注射免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达100%,90 d降至14%;点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达95.9%,90 d降至6.4%;注射免疫和点眼免疫均能造成一定比例的母羊流产和其他不良反应。因此,布鲁氏菌病活疫苗(M5-90株)不宜用于3月龄以下羔羊和怀孕母羊的免疫。

布鲁氏菌活疫苗(M5)免疫试验——多浪羊抗体消长规律研究

为探究多浪羊布鲁氏菌活疫苗(M5)的免疫抗体消长规律,在新疆南疆地区某行政村,选择100只多浪羊进行皮下注射布鲁氏菌活疫苗(M5)免疫试验。免疫前,对所有试验羊只全部采血,分别于免疫后30、90、180 d,随机采集30只羊全血,分离血清,用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)进行布鲁氏菌抗体检测。结果显示:免疫前,所有试验羊只均未检测到抗体,免疫30 d后,73.33%的羊检测到抗体,90d后只有13.30%的羊还能检测到抗体,180 d后未检测到抗体。结果表明,布鲁氏菌活疫苗(M5)能够使多浪羊产生良好的免疫反应,免疫抗体持续期约为180 d。这说明对免疫180 d后的多浪羊进行布鲁氏菌抗体检测,可为区分自然感染和免疫提供参考。

布鲁氏菌病M5、S2疫苗免疫血清半抗原-琼脂扩散试验方法检测评价

目的应用NH-AGID方法对布鲁氏菌M5、S2疫苗株免疫血清进行检测,评价该方法适用性。方法选取3~5月龄羔羊74只,随机分为3组。分别以S2株1.0×1010 CFU、5.0×109 CFU灌服和皮下注射接种羔羊各25只,M5株以1.0×10^(9) CFU皮下注射接种羔羊24只。免疫后7 d~150 d采集羊全血,分离血清,经RBT初筛和SAT确诊免疫抗体阳性血清。评估NH-AGID方法对M5和S2株疫苗免疫抗体与感染抗体的鉴别诊断特异性。结果NH-AGID方法对M5株疫苗免疫阳性血清的LPS抗体检出率为100%,NH抗体检出率8.3%~29.2%,鉴别诊断特异性为82.8%。对S2株疫苗口服组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为31.2%~66.7%,NH抗体检出率为0%;皮下注射组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为45.4%~100%,NH抗体检出率为4.5%~20%。对S2株疫苗免疫血清的鉴别诊断特异性为96.5%。结论NH-AGID方法不完全适用于羊用布鲁氏菌疫苗M5株和S2株的鉴别诊断,该方法的鉴别诊断特异性与疫苗毒力、免疫剂量和途径等因素相关,应进一步研究明确该方法的适用范围及条件,以期合理应用于布病防控诊断工作中。

布鲁菌病活疫苗M5株在羊的免疫中面临的问题及对策

近年来,随着甘州区牛羊产业的快速发展,活畜调运频繁,布鲁菌病在局部乡镇出现明显反弹,威胁到当地养殖业的安全和人民身体的健康,甘州区畜牧兽医工作站在2015年的该病抽样检测中,羊的发病率为2.2%,已超过了国家的控制标准。为此,按照甘肃省防制重大动物疫病指挥部的要求,2016年春季在我区的平山湖和靖安两个乡进行布鲁菌病活疫苗M5株的免疫试点,现将我区在羊布鲁菌病活疫苗M5株免疫中的一些做法报道如下,

S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗对山羊免疫效果比较试验

通过对36只不同日龄、不同性别的健康山羊（含妊娠母羊6只）随机平均分组，分别口服S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗后，在7d、14d、21d、42d、90d对血液中布氏杆菌抗体进行检测，对S2、M5诱导的抗体消长动态进行分析及疫苗安全性评价，最终研究确定出S2可适用于不同日龄、不同性别山羊广泛使用，也适用于妊娠期间山羊的免疫，能有效预防布病的发生，减少由此导致的经济损失；M5可引起妊娠母羊免疫副反应及严重的流产症状。

羊种布鲁氏菌M5-90 omp31蛋白原核表达

克隆、测序布鲁氏菌疫苗株M5-90外膜蛋白基因OMP31,原核表达OMP31并对其检测。从羊种布鲁氏菌M5-90中PCR获得OMP31基因,连接到pBS-T克隆质粒并测序;将测序正确的基因片段克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a,进行SDS-PAGE,而后Western-blot检测。结果M5-90疫苗株的OMP31基因序列与羊种布鲁氏菌参考株16M的同源性为99.03%;外膜蛋白基因OMP31在大肠杆菌表达后能够被Western-blot检测到。结论:表达的布鲁氏菌疫苗株M5-90外膜蛋白OMP31可以被布鲁氏菌特异性血清识别,表现出良好的抗原性,为以后实验室诊断和疫苗的研究做好坚实的上游工作。

羊同时注射布病M5菌苗与口蹄疫疫苗副反应观察

在甘肃河西3市6个乡镇选择90日龄以上的羊198 080只,其中怀孕羊84 160只,单独注射布氏菌病活疫苗(M5株)64 350只,同时注射布氏菌病活疫苗(M5株)和牛羊口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗133 730只,结果 50 d内死亡428只,流产4 460只。表明布病M5疫苗毒株毒力强,不适合用于免疫防控,更不能与口蹄疫疫苗同时注射。

布鲁氏菌M5号菌苗畜间气雾免疫对人群影响的评价

布鲁氏菌Ｍ５号菌苗畜间气雾免疫对人群影响的评价冯建萍，徐历升，田广，胡桂英（青海省地方病防治研究所，西宁市８１１６０２）在我省应用布鲁氏Ｍ５号菌苗气雾免疫，已取得广明显地控制畜间布病的效果，我省海北藏族自治州海晏县，坚持畜问气雾免疫达２０年之久，同样...

布鲁氏菌疫苗免疫抗体水平消长规律研究

本研究旨在评估不同布鲁氏菌疫苗株(A19、S2和M5)及免疫程序对牛羊的免疫效果和抗体消长规律,以优化布鲁氏菌病的疫苗免疫策略。选取免疫背景清晰的牛犊和羊只,分别采用A19疫苗注射、S2疫苗灌服和M5疫苗注射的方法进行免疫。免疫后定期采集血清样本,通过虎红平板凝集试验检测抗体阳性率。结果表明,A19疫苗在初次免疫后30 d抗体转阳率最高,加强免疫可维持较长时间阳性率。S2和M5疫苗在免疫后15~30 d达到抗体阳性高峰,注射组阳性率显著高于灌服组,且S2疫苗的阳性持续时间较长。统计分析显示,不同疫苗株和免疫方式对抗体阳性率和持续时间有显著影响。研究结果为制定布鲁氏菌病的疫苗免疫接种程序提供了科学依据,指出A19疫苗加强免疫的重要性,以及注射免疫方式相较于灌服在提高免疫效果和延长保护时间上的优势。

S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗对山羊免疫效果的比较试验

为了研究S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗对本地杂交山羊诱导的抗体消长动态规律、安全性及免疫效果,试验对36只不同日龄、不同性别的健康山羊(含妊娠母羊9只)随机平均分组,采用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)方法分别对口服S2株、M5株布鲁氏菌减毒活疫苗的试验山羊,在免疫后第7,14,21,42,90天时对血液中布鲁氏菌抗体进行检测。结果表明:两种疫苗一次免疫对本地杂交山羊的最长保护期为90 d,其中S2株布鲁氏菌减毒活疫苗可适用于不同日龄、不同性别本地杂交山羊使用,也适用于妊娠期间山羊的免疫;M5株布鲁氏菌减毒活疫苗可引起妊娠母羊免疫副反应及严重的流产症状。说明较M5株布鲁氏菌减毒活疫苗,S2株布鲁氏菌减毒活疫苗具有使用方便且安全有效的优势。

牛布鲁氏菌不同种强毒株膜蛋白质组学差异的比较

[目的]比较牛的不同种类布鲁氏菌的菌株膜蛋白质组学的差异。[方法]采用丙酮干粉方法,提取布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5的全蛋白,具有双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质,用考马斯亮蓝染色、扫描获取二维电泳图谱,用ImageMaster TM2D Platinum6.0-TOF软件筛选出差异蛋白质酶切,准备样品进行质谱分析,通过MALDI.0软件在不同的肽质量指纹质谱搜索数据库,通过生物信息技术进行蛋白质识别。[结果]应用固相pH梯度图获得良好的重复性2-DE凝胶,观察布鲁氏菌强毒株16M和疫苗株M5 2-DE图谱,其蛋白质的表达模式非常相似,使用ImageMaster TM2D4.0软件自动识别蛋白质点,检测布鲁氏菌16 M蛋白的蛋白质点856,疫苗株M5的蛋白质点793。在数据库中选择有意义的蛋白质23种进行选择质谱鉴定。蛋白质功能的差异是由质谱鉴定得到的,涉及糖代谢、物质运输、蛋白质合成和分子伴侣等方面,有13种在16M和疫苗株M5的蛋白高表达。[结论]通过质谱鉴定,获得的蛋白质功能涉及糖代谢、物质运输、蛋白质合成和分子伴侣等,有13种在16M和疫苗株M5的蛋白高表达。

不同毒力马耳他种布鲁氏菌体内外诱导细胞凋亡的研究

为探究不同毒力马耳他种布鲁氏菌能否在体内外诱导凋亡以及诱导凋亡程度的差异,本研究将M28(强毒株)和M5-90(疫苗株)以MOI=100感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,利用激光共聚焦显微镜观察和流式细胞术检测凋亡产物caspase3/7。结果显示:M5-90和M28在体外细胞水平均能够诱导RAW264.7细胞凋亡,且M5-90促进细胞凋亡能力高于M28。然后将M28和M5-90以1×10~6 cfu的剂量接种BALB/c小鼠,分别在接种后3 d、7 d和42 d迫杀小鼠,取小鼠脾脏组织制备切片,经HE染色后进行形态学观察,利用透射电镜观察并通过Tunel法检测细胞凋亡。结果显示M5-90和M28感染后均可诱导小鼠脾脏细胞凋亡,凋亡细胞主要为T淋巴细胞。本研究为布鲁氏菌诱导宿主细胞凋亡和布鲁氏菌致病机理研究奠定了基础。

环磷酰胺对布鲁氏菌侵染小鼠过程的影响

目的为了探究布鲁氏菌在环磷酰胺(CP)诱导的免疫抑制小鼠的侵染过程和炎症反应。方法使用40 mg/kg剂量CP腹腔连续7 d注射昆明小鼠,之后侵染1×10^6CFU布鲁氏菌M5,检测小鼠体重食量,脏器质量,脏器相对质量。用CFU计数法计算组织细菌数,石蜡切片进行免疫组织化学观察,ELISA法检测血清IFN-γ、TNF-α和NO细胞因子的释放。结果我们发现与正常小鼠相比,CP显著降低了受试小鼠的体重和免疫器官的重量,并且显著增加了组织细菌数量、巨噬细胞的浸润和细胞因子的含量。结论环磷酰胺为布鲁氏菌M5在小鼠体内的增殖创造了更加适宜的环境,并且增加了布鲁氏菌的存活数量和小鼠的炎症反应。为布鲁氏菌引起宿主炎症反应以及免疫逃避研究提供新的思路,为进一步研究宿主细胞与病原菌的相互作用提供数据支持并奠定基础。