PI3K/Akt信号通路在胞内布鲁氏菌存活中的作用

为了检测对PI3K/Akt信号通路在巨噬细胞内布鲁氏菌存活的影响,将布鲁氏菌粗糙型菌株RB51和光滑型菌株S2308分别侵染细胞,应用Western blot技术检测RB51和S2308和对巨噬细胞内p-Akt(S473)和p-Akt(T308)表达的影响;用MTT法检测抑制剂LY294002(LY)对细胞活性的影响;通过菌落计算法,检测抑制剂LY对胞内菌RB51和S2308存活的影响。结果表明,粗糙型菌株RB51和光滑型菌株S2308都可激活PI3K/Akt信号通路,但粗糙型菌株RB51的激活程度显著弱于光滑型菌株S2308(P<0.01);抑制剂LY在小于或等于20μmol/L浓度时不影响细胞活性;抑制剂LY(20μmol/L)可显著抑制光滑型菌株S2308的存活,但不影响粗糙型菌株RB51的存活。本研究表明,PI3K/Akt信号通路在光滑型菌株存活中发挥重要作用。

NF-κB信号通路调控布鲁氏菌胞内存活分子机制的初步研究

本试验用布鲁氏菌强、弱毒株侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,旨在探讨NF-κB信号通路与布鲁氏菌强、弱毒株在胞内生存的关系。采用光滑型牛布鲁氏菌2308、粗糙型牛布鲁氏菌RB51在不同感染复数下侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,侵染0、4、8、24h后,裂解细胞收集蛋白,Western blotting检测布鲁氏菌对激活NF-κB信号通路的影响。利用不同浓度的NF-κB信号通路抑制剂处理小鼠巨噬细胞RAW264.7,然后用布鲁氏菌在不同感染复数下侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,ELISA试剂盒检测细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达量;同时对胞内菌CFU进行计数。结果显示粗糙型牛布鲁氏菌RB51可以强烈激活NF-κB信号通路,光滑型牛布鲁氏菌2308对其激活作用较弱;同时对NF-κB信号通路的激活具有浓度依赖性,在感染复数为80∶1、侵染时间为8h时光滑型牛布鲁氏菌2308和粗糙型牛布鲁氏菌RB51对NF-κB激活程度最强,且该通路参与产生TNF-α、IL-1β和IL-6;NF-κB信号通路抑制剂BAY11-7082影响布鲁氏菌在胞内的生存。因此,粗糙型牛布鲁氏菌RB51胞内存活与NF-κB信号通路密切相关,为进一步研究布鲁氏菌的胞内致病机制奠定基础,也为布鲁氏菌新型药物的研发、家畜布鲁氏菌病预防和治疗提供科学依据。