布鲁氏菌rOmp31_(48-74)-BLS重组载体的构建与苜蓿的转化

将布鲁氏菌rOmp3148-74-BLS基因转入紫花苜蓿中苜一号,最终获得转基因苜蓿。本试验利用不依赖于连接反应的克隆(Ligation-Independent Cloning,LIC)方法将布鲁氏菌rOmp3148-74-BLS基因克隆到植物表达载体pJG045上,并利用三亲本杂交的方法转化农杆菌AGL0。最后通过农杆菌介导法将该基因转化紫花苜蓿中苜一号。经PCR鉴定,筛选出转基因苜蓿植株。本试验为今后布鲁氏菌转基因植物疫苗的研发奠定了理论和实验基础。

布鲁氏菌融合蛋白Omp31_(48-74)-BLS在烟草中的瞬时表达

布鲁氏菌病是一种人畜共患病,严重威胁着人和家畜的健康。Omp31与BLS都是布鲁氏菌重要的表面抗原基因,将重组Omp31分子与BLS分子融合表达之后,能够进一步加强抗原蛋白Omp31的免疫原性。本研究以布鲁氏菌融合基因Omp3148-74-BLS作为研究对象,双酶切后克隆至含有EGFP基因的p JG053植物表达载体上。之后将重组质粒转化到农杆菌GV3101中,利用该农杆菌侵染烟草,通过观察EGFP基因的表达来判断融合基因Omp3148-74-BLS的表达,再提取侵染烟草叶片总RNA后反转录cDNA,进行RT-PCR来检测融合基因是否表达。结果显示,融合蛋白Omp3148-74-BLS顺利在烟草中表达。