希佩尔-林道抑癌基因(VHL)在胚胎和胎盘发育中的作用

希佩尔-林道抑癌基因(VHL)得名于Von Hippel-Lindau病,由VHL突变引起的一种常染色体显性遗传的家族性肿瘤综合征,VHL编码蛋白pVHL,其生理功能与多个生殖事件有关。pVHL调控胎盘的血管生成,缺乏VHL表达的小鼠妊娠早期胚胎死亡。本文综述了VHL在胚胎和胎盘发育中的作用。

肾癌患者血清VHL和HIF-1α与HIF-2α的表达及其与预后的相关性

目的探讨肾癌患者血清希佩尔-林道基因(VHL)、缺氧诱导因子-1(HIF-1α)和缺氧诱导因子-2(HIF-2α)的表达及与预后的相关性分析。方法选取2015年3月~2016年3月我院收治的82例肾癌患者为肾癌组,同时选取51例健康者为对照组。利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组的VHL、HIF-1α及HIF-2α水平。结果肾癌组患者VHL水平比对照组明显降低,HIF-1α、HIF-2α水平比对照组明显升高(P<0.05);Ⅰ/Ⅱ、Ⅲ期肾癌患者术后VHL水平均高于术前,且Ⅰ/Ⅱ期高于Ⅲ期(P<0.05);Ⅰ/Ⅱ、Ⅲ期肾癌患者术后HIF-1α、HIF-2α水平均低于术前,且Ⅰ/Ⅱ期低于Ⅲ期(P<0.05);肾癌患者血清VHL、HIF-1α及HIF-2α表达水平与年龄、性别无关(均P>0.05),与病灶直径、淋巴结转移、病理分级、TNM分期相关(均P<0.05);肾癌患者3年生存率与患者年龄、性别无关(均P>0.05),患者VHL高表达的3年生存率明显高于VHL低表达(P<0.05),患者HIF-1α、HIF-2α高表达的3年生存率明显低于HIF-1α、HIF-2α低表达(均P<0.05);血清VHL低表达、血清HIF-1α、HIF-1α高表达是肾癌患者术后肾衰竭的独立危险因素;患者VHL水平与发生肾癌呈负相关,HIF-1α、HIF-2α水平与发生肾癌呈正相关(P<0.05);血清VHL、HIF-1α、HIF-2α预测肾癌患者的最佳截值分别为379.78、7.71、0.95,三者联合预测的AUC大于VHL(Z=8.268,P<0.05),HIF-1α(Z=8.268,P<0.05),HIF-2α(Z=8.268,P<0.05)。结论血清VHL、HIF-1α和HIF-2α对肾癌患者具有较好的预后预测价值,可作为肾癌患者发生、发展的重要指标及预后预测的分子标志物,三者联合应用能提高其预后预测能力。

希佩尔-林道、缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子参与哮喘气道重塑

目的探讨希佩尔-林道基因(VHL)、缺氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)是否参与哮喘发作时气道重塑。方法人支气管上皮细胞分别进行4、8、16、24 h低氧培养,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测缺氧后VHL、HIF-1α及HIF-2α的表达,利用ELISA方法检测细胞培养基中VHL、HIF-1α、VEGF含量;建立动物模型,6~8周龄的BALB/c小鼠40只随机分成4组:正常对照组、屋尘螨(HDM)刺激哮喘模型组、缺氧组、HDM联合缺氧组(每组10只)。4组小鼠均在暴露于常氧或缺氧7 d后分别留取支气管肺泡灌洗液(BALF),用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测支气管BALF中VHL、HIF-1α、VEGF的含量。采用两样本t检验、单因素方差分析统计数据。结果人支气管上皮细胞缺氧16 h后VHL蛋白表达量明显减少,HIF-1α在缺氧24 h后蛋白表达明显增高,HIF-2α表达无明显改变;ELISA法检测不同时间低氧组及对照组细胞培养基中的VHL、HIF-1α、VEGF蛋白含量,缺氧16 h组VHL低于对照组[(5.40±0.76)pg/ml比(12.46±1.51)pg/ml,t=38.623,P<0.01];缺氧16 h组HIF-1α高于对照组[(13.98±0.75)pg/ml比(12.18±1.69)pg/ml,t=14.257,P<0.05],缺氧16 h组VEGF高于对照组[(27.70±2.43)pg/ml比(24.62±2.11)pg/ml,t=7.584,P<0.01]。动物实验组结果示,HDM联合缺氧组小鼠肺泡灌洗液中VHL低于单纯缺氧组[(6.21±0.74)pg/ml比(11.14±1.78)pg/ml,t=43.287,P<0.01];HDM联合缺氧组小鼠中HIF-1α高于单纯缺氧组[(37.43±1.02)pg/ml比(27.14±1.31)pg/ml,t=13.254,P<0.01];HDM联合缺氧组VEGF高于单纯缺氧组[(51.11±2.39)pg/ml比(42.83±3.06)pg/ml,t=7.389,P<0.01]。结论VHL、HIF-1α、VEGF参与了哮喘发作时气道重塑。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症肾阳虚血瘀证模型大鼠HIF-1α、PHD2、VHL表达的影响

目的观察补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症(endometriosis,EM)肾阳虚血瘀证模型大鼠缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)、脯氨酸羟化酶2(proline hydroxylase2,PHD2)、希佩尔-林道抑癌基因(von Hippel Lindau disease,VHL)表达的影响,探讨EM发病机制及补肾温阳化瘀方治疗EM的作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药组、西药组,每组10只。其中正常组、假手术组常规饲养,模型组、中药组、西药组采用"延长冰箱冷冻加冰水浸泡"30天,再结合"自体移植法"创建EM肾阳虚血瘀证模型。术后中药组给予补肾温阳化瘀方(3.33 g/mL)1mL灌胃,西药组予以孕三烯酮0.5 mg/(kg·d)灌胃,模型组、正常组、假手术组灌服等体积的生理盐水,共给药4周。观察大鼠异位灶大小及形态,放免法检测血清CA125、血浆环磷酸腺苷(cAMP)、血浆环磷酸鸟苷(cGMP)的表达,HE染色光镜观察子宫在位内膜及异位组织形态学的变化,免疫组化SABC法、Western blot法检测HIF-1α、PHD2、VHL蛋白表达及含量,RT-PCR方法检测HIF-1α、PHD2、VHL mRNA表达。结果模型组大鼠异位灶生长明显,中药组、西药组治疗后,异位灶体积明显缩小。与正常组及假手术组比较,模型组CA125及cGMP水平明显升高,cAMP水平明显降低(P<0.05);HIF-1αmRNA、蛋白表达及含量均升高(P<0.05),PHD2、VHL mRNA、蛋白表达及含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,中药组及西药组CA125及cGMP水平明显降低,cAMP水平明显升高,HIF-1αmRNA、蛋白表达及含量均降低,PHD2、VHL mRNA、蛋白表达及含量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与中药组比较,西药组PHD2蛋白含量更高(P<0.05)。HIF-1α与PHD2呈负相关(r=-0.799,P=0.00),HIF-1α与VHL呈负相关(r=-0.625,P=0.003)。结论补肾温阳化瘀方可有效治疗EM,其作用机制可能与降低HIF-1α、CA125、cGMP含量,上调PHD2、VHL、cAMP表达有关。

血清VHL、HIF-1α、HIF-2α水平与肾细胞癌患者病理分期、淋巴结转移的关联性

目的分析血清希佩尔-林道抑癌基因(VHL)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)水平变化与肾细胞癌患者病理分期、淋巴结转移的关联性。方法选取该院2015年10月至2017年2月肾细胞癌患者52例为观察组,另选同期健康体检者50例为对照组,检测两组血清VHL、HIF-1α、HIF-2α水平;分析血清VHL、HIF-1α、HIF-2α水平与肾细胞癌患者病理分期、淋巴结转移的关联性。结果观察组HIF-1α、HIF-2α水平分别为(12.90±1.95、1.35±0.15)μg/L,高于对照组的(4.81±0.49、0.39±0.08)μg/L;VHL水平为(351.24±28.97)ng/L,低于对照组的(391.13±40.08)ng/L,差异均有统计学意义(均P<0.05)。肾细胞癌患者病灶大小、病理分级、临床分期、淋巴结转移与血清VHL、HIF-1α、HIF-2α水平有关,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论血清HIF-1α、HIF-2α在肾细胞癌组织中呈现异常高表达状态,血清VHL为异常低表达状态;3者表达水平均与病灶大小、病理分级、临床分期、淋巴结转移有关。

过表达VHL调节HIF-1α抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的探讨希佩尔-林道抑癌基因(VHL)对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及相关作用机制。方法收集在本院进行切除手术的35例宫颈癌患者的宫颈癌组织及对应癌旁组织,体外培养HaCaT、HeLa、SiHa、C33A、MS751细胞,将HeLa细胞分为对照组、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA VHL组(转染pcDNA VHL)、pcDNA VHL+pcDNA低氧诱导因子-1α(HIF-1α)组(转染pcDNA VHL、pcDNA HIF-1α)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测HeLa细胞中VHL、HIF-1αmRNA表达,蛋白印迹(WB)法检测细胞及组织中VHL、HIF-1α蛋白表达,CCK-8法检测HeLa细胞增殖,Transwell法检测HeLa细胞迁移、侵袭。结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中VHL蛋白表达水平显著降低(P<0.05),HIF-1α蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与HaCaT细胞相比,HeLa、SiHa、C33A、MS751细胞中VHL蛋白表达水平显著降低(P<0.05),HIF-1α蛋白表达水平显著升高(P<0.05),其中,HeLa细胞中VHL、HIF-1α蛋白表达变化更明显。与pcDNA组相比,pcDNAVHL组HeLa细胞中VHLmRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05),HIF-1αmRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),HIF-1α蛋白的表达水平及HeLa细胞OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数显著降低(P<0.05);与pcDNA VHL组相比,pcDNA VHL+pcDNA HIF-1α组HeLa细胞中VHL mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),HIF-1αmRNA及蛋白的表达水平、HeLa细胞OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。结论VHL过表达后可通过抑制HIF-1α蛋白表达,进而抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移及侵袭行为。