靶向SECTM1抑制低浓度帕博西尼诱导的肺腺癌细胞恶性表型

目的:探讨敲低分泌及跨膜蛋白1(secreted and transmembrane 1,SECTM1)对低浓度细胞周期选择性抑制剂帕博西尼(Palbociclib,Pb)诱导的肺腺癌细胞恶性表型的逆转作用。方法:CCK8法检测不同浓度Pb对肺腺癌细胞系H1650的杀伤作用;Transwell小室实验检测2μmol/L Pb处理H1650细胞后侵袭、迁移能力的变化;生物信息学分析2μmol/L Pb处理H1650细胞后转录组表达变化并筛选差异基因;验证Pb对H1650细胞SECTM1表达量的影响,检测敲降SECTM1对低浓度Pb诱导的恶性表型及上皮间质转化标志物的逆转作用。结果:Pb可抑制H1650细胞生长,但2μmol/L Pb处理显著促进其侵袭能力、迁移能力;测序结果显示,2μmol/L Pb处理后抑制H1650细胞细胞周期相关信号通路,但促进了细胞因子-细胞因子受体相关通路的激活;敲降SECTM1显著逆转了低浓度Pb诱导的细胞侵袭、迁移能力及上皮间质转化标志物的增加。结论:低浓度Pb可能诱导肺腺癌细胞侵袭、迁移能力增加,靶向敲低SECTM1可抑制其副作用。

刺梨多糖协同帕博西尼治疗胰腺癌的作用及机制

目的探讨刺梨多糖是否通过靶向清除衰老的肿瘤细胞促进帕博西尼治疗胰腺癌的效果。方法首先运用CCK8法检测经过帕博西尼处理后PANC02细胞的增殖速率,用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测PANC02细胞Ki-67和PCNA基因水平的表达;然后利用SA-β-Gal染色试剂盒和SA-β-Gal染色荧光探针检测PANC02细胞表达SA-β-Gal的比例;体外用CCK8法检测刺梨多糖联合帕博西尼对PANC02细胞增殖的影响,利用流式法检测联合处理对细胞凋亡水平的影响;同时采用皮下荷瘤模型进行体内实验,利用灌胃法给予小鼠刺梨多糖和帕博西尼,测量肿瘤体积,称量肿瘤质量,记录小鼠生存期以及复发率;最后利用SA-β-Gal染色荧光探针检测各组小鼠肿瘤细胞表达SA-β-Gal的比例。结果帕博西尼可有效抑制PANC02细胞的增殖,在基因水平上帕博西尼可降低PANC02细胞中Ki-67和PCNA的表达;同时,帕博西尼可诱导PANC02细胞发生衰老,增加SA-β-Gal的表达;当帕博西尼联合刺梨多糖后,在体外与单治疗组相比,联合治疗可以更有效地抑制PANC02细胞的增殖及增加该细胞的凋亡;体内治疗后,小鼠肿瘤质量和体积均明显下降,生存期延长,复发速度降低;且刺梨多糖可有效降低小鼠肿瘤细胞中衰老细胞的比例。结论刺梨多糖在体内体外可有效协同帕博西尼抑制胰腺癌细胞的生长,可能是通过靶向清除帕博西尼诱导的衰老的胰腺癌细胞。

帕博西尼治疗晚期Kristen鼠肉瘤致癌基因突变型非小细胞肺癌的疗效

目的探讨用细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)抑制剂帕博西尼治疗Kristen鼠肉瘤致癌基因(Kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS)突变型晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效及安全性。方法选取80例KRAS突变型NSCLC患者,用随机数字表法分为2组,每组40例。对照组用GP化疗方案治疗,研究组在对照组治疗的基础上用CDK抑制剂帕博西尼治疗。比较2组患者的近期临床疗效、治疗前后的卡氏评分(Karnofsky,KPS)、肿瘤标志物[癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(cyto-keratin 19 fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)]水平、不良反应发生情况及生存时间。结果治疗后,研究组的客观缓解率为47.50%、疾病控制率为75.00%,均高于对照组(P<0.05);治疗后,2组的KPS与CEA、CYFRA水平均改善,且研究组[(79.95±7.02)分、(15.94±2.01)μg·L^(-1)、(5.74±1.55)mm·h^(-1)]均优于对照组(P<0.05);研究组的无进展生存期[(8.96±1.58)个月]、总生存期[(19.86±2.94)个月]均长于对照组(P<0.05);2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论用CDK抑制剂治疗KRAS突变型非小细胞肺癌的临床效果显著,能延长患者的生存时间,提高患者的生活质量,且未增加不良反应的发生率。

帕博西尼逆转人食管鳞癌奥沙利铂耐药细胞株耐药性的研究

目的:建立人食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株KYSE150-OXA,研究细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent kinase 4/6,CDK4/6)抑制剂帕博西尼(palbociclib)对耐药细胞株耐药性的逆转及其机制。方法:CCK-8检测耐药细胞对奥沙利铂、紫杉醇(paclitaxel,PTX)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)以及CDK4/6抑制剂palbociclib的耐药性;流式细胞术检测化疗药物对耐药细胞凋亡和周期的影响;Western blot检测细胞中多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)及细胞周期相关蛋白的表达量;CalcuSyn软件计算palbociclib与L-OHP联合用药对细胞增殖的作用。结果:成功建立人体外ESCC L-OHP耐药细胞株KYSE150-OXA,耐药指数(resistance index,RI)为11.23±0.59,耐药细胞KYSE150-OXA对PTX和5-FU也表现出耐药性,Western blot结果显示耐药细胞中MDR1蛋白表达升高(4.46±0.22)倍;与亲本细胞KYSE150相比,耐药细胞株G1期细胞显著增多,且CDK4、CDK6及Cyclin D1表达显著升高;palbociclib增加KYSE150-OXA对L-OHP的敏感性;低浓度palbociclib与L-OHP表现出拮抗作用,高浓度时表现为协同作用;palbociclib处理组细胞中磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(phospho-retinoblastoma,pRb)降低(91±2)%及细胞周期蛋白A(Cyclin A)降低(89±6)%。结论:成功建立人体外ESCC L-OHP耐药细胞株KYSE150-OXA;palbociclib可能通过抑制异常激活的Cyclin D-CDK4/6-pRb信号通路逆转耐药细胞对L-OHP的耐药性。

乳腺癌帕博西尼耐药细胞株的建立及耐药机制研究

目的建立人乳腺癌帕博西尼耐药细胞株T47D-PalR,分析研究其耐药机制。方法采用抑制剂低浓度梯度递增法,建立人乳腺癌帕博西尼耐受的T47D-PalR体外耐药细胞模型;采用CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)法检测T47D-PalR的耐药特性;采用实时荧光定量RT-PCR法与免疫蛋白印迹(Western-Blot)法分析T47D、T47D-PalR两种细胞相关耐药基因CDK2、CDK4、CDK6及CCND1、E2F1、Rb等的mRNA表达及蛋白表达水平。结果经10个月的诱导成功建立T47D-PalR耐药细胞株,可在20μmol帕博西尼培养液中稳定生长。帕博西尼对亲本细胞T47D和耐药细胞T47D-PalR的IC50别为(0.069±0.018)μmol和(4.281±0.167)μmol,耐药指数(RI)为62;帕博西尼对T47D-PalR的单克隆细胞T47D-PalR-clone 39#的IC50>10μmol,耐药指数>144.9,属于高度耐药。与亲本细胞T47D比较,T47D-PalR细胞形态发生了明显改变,且T47D-PalR耐药细胞中CDK2、CDK4、CDK6、E2F1、CCND1等耐药基因的mRNA相对表达量均较T47D细胞升高,差异有统计学意义(P<0.05),而Rb的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与母本细胞T47D比较,T47D-PalR耐药细胞中p-Rb、CDK4、CDK6、E2F1的蛋白表达均较T47D升高,差异有统计学意义(P<0.05),但CDK2与总的Rb蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌帕博西尼耐药细胞株对CDK4/6抑制剂帕博西尼具有稳定良好的耐药作用。

帕博西尼胶囊的制备及体外溶出评价

目的筛选帕博西尼胶囊处方。方法以帕博西尼胶囊的体外溶出曲线为考察指标,调节帕博西尼胶囊的填充剂比例、崩解剂用量及厂家、原料药粒度,确定帕博西尼胶囊最优处方。结果最终确定帕博西尼胶囊内容物:微晶纤维素PH102/无水直压乳糖为1∶4,台湾永日化学的羧甲淀粉钠为6.00%,原料药粒度D_(90)为12.00～18.00μm。单剂量处方:帕博西尼125.00 mg,无水直压乳糖231.20 mg,微晶纤维素PH102 57.80 mg,羧甲淀粉钠27.00 mg,二氧化硅4.50 mg,硬脂酸镁4.50 mg。自制制剂和参比制剂在四种溶出介质中的溶出曲线均一致。结论筛选的帕博西尼胶囊处方可行。

高效液相色谱法同时测定帕博西尼胶囊中5种有关物质

目的采用高效液相色谱法,建立一种帕博西尼胶囊有关物质的检测方法。方法色谱柱为Ultimate XB C18(250 mm×4. 6 mm,5μm);流动相A:体积分数0. 1%三氟乙酸-水溶液,流动相B:乙腈-水-三氟乙酸(体积比70∶30∶0. 1)溶液,进行梯度洗脱;检测波长:290 nm;进样体积:10μL;流速:1. 0 m L·min^(-1);柱温:35℃;运行时间:50 min。结果杂质WB001-A、WB001-B、WB001-E、WB001-F、WB001^(-1)和帕博西尼的定量限分别为27. 0、63. 0、42. 0、26. 0、27. 0、18. 0μg·L^(-1),线性范围分别为0. 09～0. 59 mg·L^(-1)、0. 11～0. 71 mg·L^(-1)、0. 07～0. 47 mg·L^(-1)、0. 09～0. 58 mg·L^(-1)、0. 09～0. 60 mg·L^(-1)和0. 09～0. 61 mg·L^(-1),平均回收率分别为96. 79%、101. 18%、97. 23%、100. 75%和103. 56%。结论本方法可准确检测帕博西尼胶囊的有关物质。

CDK4/6抑制剂帕博西尼的研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases, CDKs)在细胞周期的调控中起着至关重要的作用,是干扰肿瘤细胞分裂和增殖的特异治疗靶点。帕博西尼是全球首个CDK4/6特异性抑制剂,临床疗效显著,毒性可控,被批准联合来曲唑治疗绝经后ER^+、HER2^-的晚期乳腺癌患者,作为转移性疾病的初始内分泌治疗。目前已经开始研究这种抑制剂对其他恶性肿瘤的疗效。本文综述了帕博西尼的作用机制及其在不同肿瘤治疗中的研究进展,并对帕博西尼的发展前景进行了展望。

新型抗乳腺癌药帕博西尼的合成进展

帕博西尼(palbociclib)是一种治疗转移性乳腺癌的新药,于2015年获得美国食品药品监督管理局批准上市。本文较全面地报道了帕博西尼的9种合成工艺路线,并进行了相应的评价。通过对这些合成工艺的比较和分析,发现帕博西尼的合成主要包括4个关键步骤:构建吡啶酮并嘧啶环、2位引入[5-(1-哌嗪基)-2-吡啶基]氨基、6位引入乙酰基和8位引入环己基。传统的合成路线存在诸多缺点,如反应步骤多、采用价格昂贵的金属钯以及有毒的有机锡化物和强碱二(三甲基硅基)胺基锂(Li HMDS)、部分操作条件苛刻和总收率低。新开发的路线或通过选择恰当的原料和反应,或选用新型反应器如微波-超声波联合反应器,或通过"一锅煮"方式来减少反应步骤,避免采用钯类和有机锡类化合物,从而构建反应步骤少、收率高、环境友好和较具有工业化价值的合成路线。帕博西尼的合成路线总体上向着原辅材料价廉易得、所采用试剂环保、反应路线短、操作简单、反应条件温和及总收率高的方向不断改进。就现有的合成路线而言,倘若能寻找到操作简单的催化剂代替强碱Li HMDS,以2,4-二氯嘧啶为起始原料的合成路线8具有较强的工业化前景;倘若能解决微波-超声波联合反应器的放大问题,以2-乙酰基-2-丁烯酸甲酯为起始原料的合成路线6是最具工业化前景的路线。此外,本文也介绍了具有更好的药代性质和体内稳定性的氘代帕博西尼的合成工艺,可根据帕博西尼的先进合成路线对此工艺进行改进。

低浓度帕博西尼诱导食管鳞癌细胞发生上皮-间质转化的实验研究

目的探讨低浓度细胞周期选择性抑制剂帕博西尼(Palbociclib)诱导食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞发生上皮-间质转化(EMT)的潜在风险。方法观察低浓度Palbociclib作用ESCC细胞24、48、72 h的形态改变;Transwell小室实验检测低浓度Palbociclib作用ESCC细胞侵袭、迁移能力的变化;CCK-8实验检测经低浓度Palbociclib处理72 h后,ESCC细胞对铂类药物耐药性的改变;Western blotting检测低浓度Palbociclib对EMT相关标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、人蜗牛同源蛋白1(SNAI1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平的影响。结果低浓度Palbociclib作用ESCC细胞可使其对铂类药物的耐药性增加,诱导ESCC细胞形态向间质细胞改变,促进其侵袭能力、迁移能力增强(P<0.001);Western blotting结果显示,低浓度Palbociclib在促进间质细胞标志物Vimentin、SNAI1、N-cadherin蛋白表达的同时,抑制上皮细胞标志物E-cadherin表达(P<0.05)。结论低浓度Palbociclib可能存在诱导ESCC细胞发生EMT表型的风险。

首个CDK4/6抑制剂帕博西尼的药理和临床综述

本文介绍了帕博西尼和来曲唑联合用于治疗绝经后妇女对雌激素受体(ER)阳性,对人表皮生长因子受体2(HER2)阴性的晚期乳腺癌,作为转移性疾病的初始内分泌为基础的治疗的药理、药动学、临床研究和安全性信息。这些信息主要参考了国外有关的帕博西尼的注册和临床资料。临床试验表明帕博西尼和来曲唑联合应用能使患者的无进展生存期(PFS)明显提高。

帕博西尼的分子结构、非线性光学及化学活性的密度泛函理论研究

采用密度泛函理论对帕博西尼分子进行了理论计算,对其分子结构进行了优化,计算分析了其分子振动光谱、紫外-可见吸收光谱、非线性光学以及化学特性等.结果表明:帕博西尼分子的HOMO-LUMO能隙为3.549760eV,最大峰值的振荡强度为0.0519,一阶超极化率为3.28E-29e.s.u,分子静电势显示负电位位于氧和氮原子的位置,正电位区位于氢原子附近.

帕博西尼关键中间体的合成工艺改进

本研究基于帕博西尼原研合成路线的基础上,对其重要中间体6-溴-8-环戊基-2-甲基亚磺酰基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-D]嘧啶-7-酮进行了优化设计,提出了新的合成工艺路线,路线以4-氯-2-甲硫基-5-氰基嘧啶为原料经四步反应合成目标中间体,优化条件后总收率为64.58%。在合成工艺中,重点对反应溶剂、催化剂、物料摩尔比、反应温度等参数进行了优化。优化后的工艺路线所用原料易得,步骤较少,收率较高,可为工业化生产提供参考。

帕博西尼和厄洛替尼联合治疗结直肠癌的协同作用及其机制

目的:评估帕博西尼(Palbociclib)单独或联合表皮生长因子缀体抑制剂厄洛替尼(Erlotinib)治疗结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的有效性。方法:采用Alamar blue法和克隆形成实验检测帕博西尼单独或联合厄洛替尼对CRC细胞系增殖的影响;采用DNA含量定量法检测细胞周期分布变化;分别通过β-半乳糖苷酶和DCFH-DA染色检测细胞衰老和活性氧积累的情况;通过Western blot分析相关蛋白表达水平;在CRC患者来源异种移植模型中检测联合治疗的效果。结果:帕博西尼单独治疗有效抑制CRC细胞增殖,诱导细胞G1期阻滞、细胞衰老和胞内活性氧积累。帕博西尼和厄洛替尼联合治疗CRC具有协同作用,厄洛替尼进一步增强帕博西尼对CRC的多种抑制效应和多信号通路抑制,在CRC患者来源的异种移植模型中显示出了良好的协同抑制作用。结论:帕博西尼联合厄洛替尼在体外和体内能够协同抑制结直肠癌的生长。

帕博西尼关键侧链中间体的合成研究

目的 合成帕博西尼关键侧链中间体。方法 以2-氨基吡啶为原料,经溴代、氧化、偶联、还原反应合成了4-(6-氨基吡啶-3-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯。结果 目标产物总收率56%,纯度99%以上,其结构经熔点,质谱(MS),核磁共振氢谱(^(1)H NMR)确证。结论 该工艺易于操作,避免使用苛刻条件,可提高收率,降低成本,提高生产安全性,易于工业化生产。

帕博西尼母核中间体的合成工艺优化

以2,4-二氯-5-溴嘧啶作为起始原料,经过取代反应、 Heck反应、关环反应3步合成得到帕博西尼母核中间体2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮,产品纯度达99.50%。优化条件下总收率63.38%。工艺原料便宜易得、操作简单、条件温和,收率和纯度较为理想,适合工业化生产。

帕博西尼联合他莫昔芬对乳腺癌细胞T-47D的作用研究

目的 探讨帕博西尼联合他莫昔芬对人乳腺癌细胞的影响及其相关作用机制。方法 将乳腺癌细胞T-47D随机分为对照组、帕博西尼组、他莫昔芬组、联合用药组。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,Western blot检测细胞凋亡和周期相关蛋白表达,ELISA测定免疫抑制细胞因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素10(IL-10)、程序性死亡配体1(PD-L1)水平。结果 联合用药组细胞抑制率明显高于单药组和对照组,具有协同作用。与对照组和单药组比较,联合用药组细胞凋亡更加明显,阻滞细胞于G1/S期,Bcl-2、cyclin D1、p-Rb蛋白表达降低及Bax、cleaved-caspase3蛋白表达升高,TGF-β1、IL-10、PD-L1水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 帕博西尼联合他莫昔芬可能通过阻滞T-47D细胞周期于G1/S期、促进细胞凋亡、下调免疫抑制细胞因子发挥协同抗肿瘤作用。

药物帕博西尼的定性和定量分析研究

采用差示扫描量热分析法(differential scanning calorimetry, DSC)、扫描电子显微镜法(scanning electron microscopy, SEM)和X-射线粉末衍射法(X-ray powder diffraction, PXRD)对帕博西尼进行了结构表征,初步建立了帕博西尼A、B两种晶型的鉴定方法;通过X-射线粉末衍射单峰法(峰面积法和峰高法)对帕博西尼(palbociclib)有效晶型A中混杂的晶型B进行了定量测定。结果表明:DSC法鉴定两种晶型其结果区分不够明显, SEM法和PXRD法可快速有效鉴别两种晶型;峰面积法和峰高法所建立的标准曲线方程分别为y=0.842 75x-0.001 21和y=0.909 64x-0.002 32,两种方法的R^2值分别为0.986 17和0.985 83,两组曲线均取得了较好的线性关系,其中峰面积法的线性关系更好。峰面积标准曲线计算出B晶型的检测限(limit of detection, LOD)和定量限(limit of quantity,LOQ)分别为1.17%和3.92%,峰高标准曲线计算出B晶型的检测限和定量限分别为1.19%和3.97%,峰面积法更为灵敏。采用本实验的方法可快速的鉴定帕博西尼晶型A和晶型B并对其进行定量测定。

新型乳腺癌靶向治疗药物帕博西尼的研究进展

帕博西尼是一种口服、靶向性药物,对绝经后晚期或转移性雌激素受体阳性/HER-2阴性(ER^+/HER-2^-)乳腺癌患者具有良好的疗效。目前研究表明,帕博西尼与来曲唑联合用药相比单用来曲唑治疗,能延长患者无进展生存期。美国食品和药物管理局于2015年2月批准帕博西尼联合来曲唑用于绝经后晚期或转移性ER^+/HER-2^-乳腺癌的初始内分泌治疗。帕博西尼最常见的不良反应主要为中性粒细胞减少。

帕博西尼逆转人乳腺癌MCF-7/DOX细胞对多柔比星的耐药性

目的:研究细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent protein kinase4/6,CDK4/6)抑制剂帕博西尼(palbociclib,PAL)对乳腺癌MCF-7/多柔比星(doxorubicin,DOX)细胞耐药性的逆转作用,并探讨药物转运体ATP结合盒蛋白B1(ATP binding cassette protein B1,ABCB1)在其中的作用机制。方法:采用CCK-8法检测PAL对亲本MCF-7及耐药MCF-7/DOX细胞DOX敏感性的影响;FCM法检测PAL对MCF-7及MCF-7/DOX细胞中DOX蓄积浓度的影响。构建稳定转入ABCB 1基因的MDCKⅡ细胞模型,采用药物跨膜转运实验检测PAL对药物转运体ABCB1介导的DOX外排功能的影响。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测PAL对MCF-7及MCF-7/DOX细胞中ABCB1 mRNA及蛋白表达水平的影响。结果:0.2与0.4μmol/L的PAL可使DOX对MCF-7/DOX细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别降低39%和51%(P值均<0.05),但对MCF-7细胞的IC_(50)值无明显影响;0.4μmol/L PAL可使MCF-7/DOX细胞内DOX的蓄积浓度上调82%(P<0.05),但对MCF-7细胞中DOX的蓄积浓度无明显影响。PAL对ABCB1介导的DOX外排功能有明显抑制作用(P<0.05),但对MCF-7及MCF-7/DOX细胞中ABCB1 mRNA与蛋白的表达水平均没有明显的调节作用。结论:PAL可以通过抑制ABCB1转运体的功能而逆转乳腺癌MCF-7细胞DOX耐药性,提示PAL与DOX联用有望提高临床乳腺癌DOX的治疗效果,优化临床治疗方案。